血液干细胞研究进展

干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的原始细胞。血液干细胞是最早证实 ,研究最多 ,临床应用最成熟的组织专能干细胞。血液干细胞的移植已成功地应用于治疗多种血液系统和相关系统疾病。近年来 ,血液干细胞在胚胎时期的发生、发育过程和发育中的定向迁移及移植过程中的动员、归巢机制得到进一步阐明。干细胞的概念有所突破 ,发现血液干细胞具有跨系统分化潜能。这不仅开拓了干细胞研究内容 ,也极大地拓展了血液干细胞在临床上的应用范围。本文同时对国内。

血液肿瘤耐药机制及克服耐药研究

肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉耐药性,称多药耐药(multidrug resistance,MDR)是造成肿瘤化疗失败的主要原因.有关资料统计,肿瘤年病死率中,属内在性多药耐药(intrinsic MDR)的肿瘤,包括消化器官的胃癌,肠癌,肝癌等,呼吸系统的肺癌,泌尿系统的肾癌以及大脑和中枢神经系统肿瘤约占61%,属获得性多药耐药(acquired MDR)的肿瘤,包括皮肤癌,乳腺癌,生殖器癌,内分泌肿瘤,白血病和淋巴瘤,约占33%.这就是说90%以上肿瘤患者死因都与耐药有关.另一方面,肿瘤新药的出现也常常伴随着耐药的出现,如紫杉醇和Gleevec(STI-571),这就使问题更加严重.因此逆转MDR成为肿瘤治疗亟待解决的问题.

树突状细胞融合瘤苗体内外诱导特异性抗白血病免疫的实验研究

本研究观察615鼠骨髓来源树突状细胞(DC)与白血病细胞L615融合瘤苗L615/DC体内外诱导特异性抗白血病免疫的能力。分别制备615鼠骨髓来源DC,用PEG融合法将DC与照射灭活的L615制备L615/DC融合瘤苗并免疫动物,用MTT法和LDH法测定L615/DC融合瘤苗免疫鼠脾细胞体外MLR反应和对L615特异性杀伤活性,同时通过免疫治疗实验检测L615/DC融合瘤苗的体内抗白血病作用。结果表明:研究获得了具有特征形态的树突状细胞,MLR反应表现出强大的异基因免疫刺激功能,当L615/DC融合瘤苗免疫鼠的脾细胞再次接触L615抗原时表现出强烈的增殖活性;LDH实验显示,融合瘤苗组、共培瘤苗组和灭活L615组均可在体外诱导扩增出L615特异性CTL,但融合瘤苗组的CTL在不同效靶比、不同孵育时间的特异性杀伤活性均明显高于另两组(P<0.01)。体内免疫治疗实验中L615/DC融合瘤苗治疗组平均寿命为25.7±1天,有1/4小鼠长期存活,而对照组全部死亡,平均寿命17.5±1天。2个月后对治疗组存活鼠用致死剂量L615攻击不发病。结论:L615/DC融合瘤苗可诱导强大的特异性抗L615免疫,它不仅在体外能特异性识别并杀伤L615细胞,还可有效抑制荷瘤鼠体内肿瘤的生长,延长存活时间,并产生免疫记忆,抵抗肿瘤的二次攻击。L615/DC融合瘤苗为肿瘤免疫治疗提供了新的手段。

洛伐他汀保护内皮祖细胞的机制研究

目的探讨洛伐他汀(lovastatin)保护内皮祖细胞(en-dothelial progenitor cells,EPCs)的机制。方法EPCs与洛伐他汀或者血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体(lectin-like oxi-dized low density lipoprotein receptor,LOX-1)的特异性阻断抗体(LOX-1 mAb)预处理24 h后,再与氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)孵育48 h。然后,检测EPCs迁移、粘附和管状结构形成能力。为探讨洛伐他汀的作用机制,检测EPCs生成一氧化氮(nitric oxide,NO)的量,内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)和LOX-1蛋白及mRNA表达。结果oxLDL抑制EPCs迁移、粘附及管状结构形成能力,降低NO产生、eNOS蛋白及mRNA表达,增加LOX-1蛋白及mRNA表达。洛伐他汀和LOX-1 mAb恢复EPCs功能,逆转oxLDL对NO、eNOS及LOX-1的调节。结论洛伐他汀通过调节eNOS和LOX-1而保护EPCs免受oxLDL的损害。

靶向肿瘤坏死因子的炎性肠病治疗研究进展

肿瘤坏死因子在介导炎性肠病(IBD),特别是在克罗恩病的炎症过程中发挥着重要作用。现在已有多种以肿瘤坏死因子为靶点的药物用于临床或正在进行临床研究。

3种可注射性支架体内构建组织工程软骨的比较研究

目的比较以纤维蛋白封闭剂(FS)、P luron ic-F 127(PF)、透明质酸(HA)3种可注射性支架体内构建组织工程软骨的效果。方法常规分离、消化、体外单层培养新生兔软骨细胞,分别将软骨细胞与3种支架材料混合接种于裸鼠皮下,并于第10周取材通过大体观察,湿重测定,GAG含量测定和组织化学检查来判断体内形成软骨的能力。结果三组均可形成软骨样组织块,其中FS组体积最大,质地较硬,表面光滑,软骨细胞位于成熟的陷窝中,阿尔新兰及Ⅱ型胶原免疫组化染色强阳性;PF组体积中等,质地柔韧,陷窝清楚,可以检测到阳性的阿尔新兰及Ⅱ型胶原表达。HA组只形成很小的组织块,硬度较差,含有的细胞数和分泌的基质最少,三组的GAG含量分别为(8.8±0.4)m g/g,(6.8±0.3)m g/g,(4.2±0.3)m g/g,各组间差异具有显著性(P<0.05,n=3)。结论3种可注射性支架中,FS成软骨作用最强,PF较好、HA组最差,FS和PF可以用于组织工程软骨的构建。

新的肿瘤耐药相关基因ERGIC-53的研究

目的:研究ERGIC-53基因表达与肿瘤细胞耐药的关系,寻找肿瘤耐药逆转可能的新靶点。方法:采用Northern Blot检测ERGIC-53基因在K562和K562/A02中的表达差异;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测11种肿瘤敏感及耐药细胞系中ERGIC-53基因的表达;设计合成针对ERGIC-53基因的siRNAs,用脂质体法转染K562和K562/A02细胞,用MTT比色法和流式细胞仪检测其干扰耐药细胞中ERGIC-53基因表达后的细胞对阿霉素的敏感性。结果:ERGIC-53在K562/A02细胞中的表达明显高于亲代K562细胞(P<0.05);6种耐药细胞株中ERGIC-53基因表达的平均值约为亲代敏感细胞的2倍。siRNA转染组与对照组相比,K562/A02细胞对阿霉素的敏感性均有不同程度的提高,且在转染后72h时细胞内阿霉素积累接近其亲代敏感细胞水平。结论:ERGIC-53基因与肿瘤细胞耐药相关,明确该基因参与耐药肿瘤细胞表型的形成。

建立人胚胎干细胞系的研究进展

Embryonic stem(ES) cells are derived from totipotent cells of the early mammalian embryo and are capable of unlimited, undifferentiated proliferation in vitro. The establishment of mouse ES cell lines demonstrated the unmatchable convenience for the study of mouse embryonic development and the particular gene regulation and function. It has been long expected to construct such cell line for human. Here we summarized the development in the construction of human ES cell line, its potential utilization in various fields and the possible ethical dilemmas it brought with were also discussed.

蛋白质相互作用的研究方法

蛋白质相互作用的研究是现代分子生物学研究领域一个很重要的方面。该文介绍了经典的和最近新建立的研究蛋白质相互作用的方法,并比较了各种方法的优缺点和所适用的领域。

基于4-1BBL和CD3双信号的融合蛋白协同抗肿瘤作用研究

旨在研究4-1BBL/CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20 diabody介导的特异性靶向杀伤活性。采用亲和层析法纯化本室构建的抗-CD3/抗-CD20 diabody和4-1BBL/CD20融合蛋白可溶性表达产物;采用calcein释放试验测定其介导的体外靶向杀伤活性;采用人B淋巴瘤细胞系Raji裸鼠移植瘤模型测定其介导的体内靶向杀伤活性。纯化4-1BBL/CD20融合蛋白在体外能增强抗-CD3/抗-CD20 diabody介导激活的T细胞杀伤Raji细胞;在人B淋巴瘤细胞系Raji裸鼠移植瘤模型联合人T淋巴细胞4-1BBL/CD20融合蛋白增强抗-CD3/抗-CD20 diabody高效抑制Raji细胞裸鼠移植瘤的生长,明显延长荷瘤裸鼠的生存时间。在体外和体内4-1BBL/CD20融合蛋白均能增强抗-CD3/抗-CD20 diabody介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿增细胞,是一个有望用于B细胞恶性肿瘤临床治疗的特异性融合蛋白。

1例极重型再生障碍性贫血合并多重感染患者的护理体会

极重型再生障碍性贫血(VSAA)是一种非常罕见的、严重的造血系统疾病,表现为骨髓造血功能持续受损,导致全血细胞中的三大类细胞(红细胞、白细胞和血小板)数量不足。本文总结1例极重型再生障碍性贫血合并多重感染的患者的护理体会。根据患者临床症状,明确护理重点,积极控制感染,加强病情观察,做好跌倒及出血风险评估和防控,针对性开展心理护理,疏导患者情绪,提高患者治疗依从性,促进早期康复。

乳腺癌转移复发肿瘤标志物研究进展

肿瘤标志物是指与肿瘤发生相关的物质 ,主要包括两部分 :大分子蛋白质肿瘤标志物和基因肿瘤标志物 ,可用于肿瘤的早期发现、预后判断、定位和治疗。目前有多种肿瘤标志物与乳腺癌转移相关 ,但erbB 2可在 2 0 %～ 3 0 %侵袭性乳腺癌患者中扩增表达 ,被认为是首选的肿瘤标志物 ,并成为抗乳腺癌治疗的靶点。研究认为 ,肿瘤的转移潜能与多药耐药(MDR)表型相关。因此从MDR相关基因和蛋白质中寻找肿瘤标志物 。

癌症的造血保护和抗血管新生治疗研究

已知肿瘤放、化疗造成的造血功能抑制是肿瘤治疗失败的主要原因.此外,无论是实体或血液肿瘤,其持续生长都必须依赖新生血管的形成,因此本项目从造血保护和抗肿瘤血管新生两方面着手,研究探索新的抗肿瘤治疗技术,着重研究:降低造血干细胞对化疗药物和辐射的敏感性,阻止化疗药物和辐射引起的造血细胞凋亡,从而可以增大治疗剂量,最大限度地杀死肿瘤细胞而不引起造血功能严重受损;刺激造血干细胞的增殖、粘附和归巢,促使造血全面恢复;抑制肿瘤血管新生,阻断营养血管导致肿瘤细胞缺血性坏死,增大肿瘤放、化疗的治疗效应.研究发现血小板第四因子(PF4)和凝血酶敏感蛋白(TSP-1)这两种蛋白质具有很好的造血功能保护和抗肿瘤血管新生双重作用.

p27kip-1和细胞凋亡的研究进展

CDK抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitors,CDKI)p27Kip-1除了参与细胞周期调节,广泛抑制多种细胞周期蛋白-CDK复合物的活性外,它还参与细胞的凋亡、分化、细胞-细胞间黏附等多种生物功能的调节作用。本文对p27Kip-1和凋亡调节的研究进展作一综述。

1例双上腔静脉患者Sherlock 3CG尖端定位下经外周静脉穿刺中心静脉置管及护理对策

本文总结了应用Sherlock 3CG尖端定位技术为1例急性髓系白血病伴有双侧上腔静脉患者双侧置入经外周静脉穿刺中心静脉导管(PICC)的护理对策。本例患者为满足治疗需求分别于两次经两侧置入PICC导管,导管尖端分别位于右、左两侧上腔静脉。患者首次选择右侧上臂置管过程顺利,再次置管选择左侧置入过程顺利,应用Sherlock 3CG技术定位,导管送至预留长度范围P波持续呈负波,查看计算机断层扫描(CT)结果提示患者存在永存左上腔静脉,行X光定位确认导管尖端位于左侧上腔静脉。经多学科团队综合评估,调整导管留置长度,密切观察患者情况,加强多方面健康宣教,导管留置成功,无并发症发生。

成体骨髓源多能间充质干细胞体内分化皮肤干细胞和皮肤组织

近年来,因在退行性或遗传性等疾病中潜在的治疗前景,成体干细胞可塑性引起众多学者的广泛兴趣。有许多报道显示骨髓源干细胞植入体内可生成多种组织细胞,但到目前为止,成体干细胞可塑性尚存争议,尤其是关于成体干细胞体内分化成皮肤组织的报道较少且意见不一。本工作,自成年BALB/C小鼠的骨髓中分离获得并体外培养扩增多能间充质干细胞,将适量的供体BALB/C小鼠骨髓源多能间充质干细胞和一定量的C57BL/小鼠骨髓细胞经尾静脉共同植入经致死量照射的成年C57BL/6小鼠。40天后,观察到受体C57BL/6小鼠背部出现白色毛发,逐渐扩展至3-4cm2,同时还出现在颈部和腹部,取该部位的皮肤组织进行免疫组化检测及RT-PCR检测。蛋白水平和基因水平的结果均显示受体C57BL/6小鼠出现白色毛发处的皮肤组织为BALB/C来源。首次直接证明了成体骨髓源多能间充质干细胞体内在一定条件下可以分化成皮肤干细胞及皮肤组织。不仅为研究体内诱导皮肤分化的机制也为鉴定成体多能干细胞提供了一个模型,也为成体干细胞可塑性理论提供了新的依据。

从补肾生血药对衰老小鼠骨髓GM-CSF基因转录水平的影响探讨肾生髓的分子基础

目的 :为探讨肾生髓的分子基础 ,阐述肾生髓的本质相关基因 ,我们观察了补肾生血药对衰老小鼠骨髓粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)基因转录水平的影响。方法 :采用老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠两种衰老肾虚动物模型 ,分别连续灌服补肾生血药 2个月和 1个月 ,应用半定量逆转录 聚合酶链式反应技术 (RT PCR)检测小鼠骨髓有核细胞GM CSF基因转录水平的变化。结果 :老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠骨髓有核细胞GM CSF基因转录水平明显低于青年小鼠和正常对照小鼠 ,给药后则可明显得到提高。结论 :补肾生血药起到滋阴补肾、益髓生血作用的分子机理之一 ,是促进骨髓GM CSF基因的转录 ,GM CSF是肾生髓的分子基础之一 ,GM CSF基因是肾生髓的本质相关基因之一。

补肾生血药对衰老小鼠Bcl—2mRNA表达的影响

"肾生骨髓"是中医肾生理功能的重要组成部分.因此,肾生髓理论的现代研究在肾本质研究中占有重要的地位.我们实验室自20世纪70年代末以来一直致力于肾生髓理论的现代研究,研究的重要成果之一是补肾生血药的研制成功.该药由熟地黄、何首乌、山茱萸、枸杞子、阿胶等11味中药组成,具有滋阴补肾,益髓生血等功能.20多年来,我们通过对补肾生血药的药效机理的研究,来阐述中医经典理论肾生髓的现代内涵.基因是决定生命结构和功能的最根本物质,与作为"先天之本"、"主生殖、生长发育、生髓等"的中医肾的概念可能存在着某些必然的联系.Bcl-2基因(B细胞淋巴瘤/白血病-2基因)是最初发现的与细胞凋亡相关的原癌基因,其表达产物Bcl-2主要作用是抑制细胞凋亡.本课题采用老年小鼠和目前应用较成熟的D-半乳糖致衰老小鼠模型,通过观察补肾生血药对其骨髓有核细胞Bcl-2 mRNA表达的影响,来探讨肾生髓的本质相关基因.

自体分选造血干细胞和异体脐带间充质干细胞移植治疗神经系统变性疾病

背景:将自体分选造血干细胞和异体脐带间充质干细胞技术应用于临床,试图寻找一种新的治疗神经系统变性疾病的可行方法。目的:探讨自体分选CD34+造血干细胞和异体脐带间充质干细胞治疗神经系统变性病的可行性。方法:入选神经系统变性病患者21例,其中运动神经元病15例,脊髓小脑共济失调6例。取4mL的脐带间充质干细胞或自体分选干细胞液经腰穿注射到患者蛛网膜下腔,每次注射的细胞数1.0×107。于干细胞治疗后3个月进行评分。结果与结论:15例运动神经元病患者,治疗总有效率为80%,治疗前后的脊髓侧索硬化功能分级量表和自我评估问卷评分差异有显著性意义(P<0.05);6例脊髓小脑共济失调患者,按ICARS评分,4例病情等级下降,治疗总有效率为77%。21例中4例有轻度低颅压性头痛(腰穿后),14例采用脐带间充质干细胞治疗的患者中2例在治疗后2h出现短暂发热,其余患者治疗后未见明显不良反应。结果初步表明自体分选造血干细胞和异体脐带间充质干细胞治疗神经系统变性病临床疗效肯定,安全可行。