过表达Akt1对小鼠骨髓间充质干细胞生物学功能的影响

目的探讨Akt1过表达对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）生物学功能的影响。方法雄性健康C57小鼠,鼠龄7~8周,体质量18~25 g。取该小鼠胫骨和股骨,利用BMSCs的贴壁生长能力进行分离,并对获取的细胞进行流式鉴定。构建Akt1-IRES-GFP逆转录病毒载体,感染BMSCs,并筛选、扩增Akt1过表达的BMSCs。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot测定转染Akt1表达情况。用不同浓度（0、10、50、100 ng/mL）的γ干扰素（IFN-γ）处理Akt1-BMSCs及BMSCs,采用四唑氮化合物（MTS）法绘制生长曲线,通过Ca2＋依赖性磷脂结合蛋白/碘化丙啶（AnnexinV/PI）复染,观察不同浓度IFN-γ对Akt1-BMSCs及GFP-BMSCs细胞凋亡的影响。结果成功培养出小鼠BMSCs,高表达CD29、CD44、Sca-1,而不表达CD45、CD34,CD11b、CD31、FLK-1、MHC-Ⅱ。成功筛选并扩增出Akt1-BMSCs;RT-PCR显示,Akt1-BMSCs的Akt1基因表达量明显高于BMSCs（P〈0.01）;Western blot显示,Akt1-BMSCs的总Akt1蛋白及磷酸化Akt蛋白均高于BMSCs。流式细胞仪检测Akt1-BMSCs及GFP-BMSCs的绿色荧光蛋白（GFP）的表达量均高于95%。细胞增殖及凋亡实验显示,在正常培养及高浓度IFN-γ（100 ng/mL）的刺激下,Akt1-BMSCs显示出了增殖及抗凋亡优势。结论 Akt1-BMSCs比相同代数的BMSCs在正常培养及高浓度IFN-γ（100 ng/mL）的刺激下增殖及抗凋亡能力增强,可用于进行下一步的研究。