基质金属蛋白酶与动脉粥样硬化斑块发生、发展的关系

目的利用高脂餐诱导的兔动脉粥样硬化模型,观察基质金属蛋白酶2(MMP_2)、MMP_2的调节因子MT1_MMP和MMP组织抑制因子_1(TIMP_1)、MMP_3、TIMP_3,在动脉粥样硬化发生和早期病变中的表达,以及在此过程中增生内膜降解基质的能力、胶原含量、内弹力板的变化;方法6周龄雄性新西兰大白兔(NZW),饲以高脂餐。在高脂餐前随机选取6只,取主动脉,液氮速冻,以后每隔2周随机选取8只,直至第10周。以免疫组化检测巨噬细胞、平滑肌细胞、MT1_MMP、MMP_2、TIMP_2、MMP_3、TIMP_3与COX_2的表达,检测组织原位明胶酶和酪蛋白酶活性。结果主动脉标本呈现5级动脉粥样硬化病变,高脂餐负荷时间与动脉粥样硬化病理分级正相关(相关系数:0.893,P<0.001)。主动脉内膜MT1_MMP.TIMP_2.MMP_2、MMP_3、TIMP_3随动脉粥样硬化进展表达逐渐增多,主动脉内膜降解明胶与酪蛋白的能力随动脉粥样硬化病变进展而增强,内膜胶原含量亦增加。内弹力板的破坏可见于Ⅱ-Ⅳ级斑块中,但有明显的个体差异。结论动脉粥样硬化发生和进展过程中,伴有MMPs激活,并有逐步增加的趋势,内膜胶原含量亦增加。内弹力板的稳定与否有明显的个体差异。

Lp(a)对THP-1源性巨噬细胞基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶抑制剂表达和活性的影响

目的通过研究脂蛋白a对巨噬细胞源性基质金属蛋白酶(MMPs)和基质金属蛋白酶内源性组织拟制剂(TIMPs)表达的调节作用,探讨脂蛋白a促动脉粥样硬化的机制。方法利用从新鲜混合血浆经超速离心和亲和层析纯化的脂蛋白a刺激人单核细胞白血病THP_1细胞经豆蔻酰佛波醇乙酯诱导24 h转化而成的巨噬细胞,孵育10 h和36 h后收集细胞裂解液和条件培养基分别进行MMPs/TIMPs mRNA和蛋白检测及明胶酶谱分析MMPs活性。结果免疫印迹结果显示脂蛋白a可使巨噬细胞培养基中MMP_1、MMP_2、MMP_9、MT1_MMP水平明显上调,其中MMP_2和MT1_MMP的活性形式明显增加;而其抑制剂TIMP_1、TIMP_2水平则明显减少,以前者的剂量效应最为明显。明胶酶谱分析表明条件培养基中MMP_9活性增强。逆转录聚合酶链式反应结果显示,MMP_1、MMP_2、MMP_9 mRNA水平随Lp(a)刺激增强而增加,TIMP_1 mRNA水平则梯度降低,而MT1_MMP、TIMP_2的mRNA水平未见明显改变。结论研究发现Lp(a)可促进巨噬细胞表达多种MMPs,同时抑制TIMPs的表达,由此所致的MMPs/TIMPs表达及活性失衡最终可致基质过度降解,在整体情况下则可能促进斑块进展成不稳定斑块并破裂。为阐明Lp(a)的促动脉粥样硬化机制提供了新的线索。

特异性环氧化酶2抑制剂-双脱氧氟尿苷(DFU)在动脉粥样硬化中的作用

目的本研究观察高脂餐诱导的兔AS模型中,COX-2在AS发生和早期病变中的表达,以及在此过程中增生内膜降解基质的能力、胶原含量、内弹力板的变化;以及DFU[5,5-dimethyl-3-(3-fluorophenyl)-4-(4-methylsulphonyl)-phenyl-2-(5H)-furanone]-特异性COX-2抑制剂的作用。方法42只6周龄雄性新西兰大白兔(NZW),饲以高脂餐(2%胆固醇+3%猪油),参考血脂反应程度,随机分为四组,在高脂餐的同时,分别管饲安慰剂与不同剂量的DFU。4周后取主动脉(主动脉根部-髂动脉分叉)。主动脉弓前1/3切片,行HE染色;后2/3匀浆,测明胶酶活性及免疫印迹检测MMP-2。其余主动脉标本纵向剖开,以4%中性甲醛固定,苏丹Ⅳ染色,内膜拍照,Matlab软件分析粥样硬化斑块面积占内膜总面积比例。结果主动脉内膜COX-2随AS的进展表达逐渐增高。DFU对各组体重、血浆总胆固醇与甘油三酯无显著性影响。不同剂量DFU组AS面积比例分别为:对照组,0.330±0.052(n=7);实验1组,0.273±0.042(n=6);实验2组,0.314±0.089(n=8);实验3组,0.288±0.036(n=9)。与对照相比,DFU对实验1、23、组主动脉AS面积没有明显影响(P>0.50)。DFU对病变血管内MMP-2的表达和活性亦没有影响。结论COX-2与AS发生和进展相关,但未发现特异性COX-2抑制剂DFU对AS进展的抑制作用。