Polypyrimidine Tract-Binding Protein Enhances Zika Virus Translation by Binding to the 5'UTR of Internal Ribosomal Entry Site

Objectives To identify the 5'untranslated region of Zika virus(ZIKV 5'UTR)RNA-binding proteins and to investigate the impact of the binding protein on the activity of internal ribosomal entry site(IRES)located in ZIKV 5'UTR and virus production.Methods Interacting proteins in U251 cells were captured using tRSA-tagged ZIKV 5'UTR RNA and tRSA-ZIKV 5'UTR RNA-binding proteins were visualized by SDS-PAGE silver staining,Subsequently,liquid chromatographytandem mass spectrometry(LC-MS/MS),bioinformatics analysis,and Western blot were used to identify the candidate proteins binding to ZIKV 5'UTR.Dicistronic expression assay and plaque forming assay were performed to analyze the effect of the binding protein on ZIKV IRES activity and ZIKV production,respecitvely.Results tRSA RNA pull-down assay,LC-MS/MS,and Western blot analysis showed that polypyrimidine tractbinding protein(PTB)bound to the ZIKV 5'UTR.Furthermore,dual luciferase reporter assay revealed that overexpression of PTB significantly enhanced the IRES activity of ZIKV(t=10.220,P<0.001),while PTB knockdown had the opposite effect(t=4.897,P<0.01).Additionally,virus plaque forming assay demonstrated that up-regulation of PTB expression significantly enhanced viral titer(t=6.400,P<0.01),whereas reducing PTB expression level weakened virus infectivity(t=5.055,P<0.01).Conclusion PTB positively interacts with the ZIKV 5'UTR and enhances IRES activity and virus production.

猕猴静脉注射自体RAK细胞剂量安全性研究

目的通过对猕猴静脉注射自体RAK细胞,观察猕猴是否出现血管内细胞栓塞等现象,为评价在人体上回输RAK细胞安全性剂量提供依据。方法随机选择健康雄性猕猴5只,进行自体RAK细胞静脉回输,观察动物在回输过程中及回输结束后14d内动物的生理生化指标是否出现异常,是否出现血管栓塞现象。结果自体RAK细胞回输后至观察期14d结束,5只动物均存活,且精神状态良好,各动物的生理生化指标正常,无行为和体征异常出现。结论猕猴静脉注射自体RAK细胞达到拟用临床剂量上限时不会引起毒性反应,不会引起血管内栓塞现象。

人工哺育期腹泻婴猴奇异变形杆菌的分离与鉴定

目的对一株人工哺育期引发恒河猴婴猴腹泻的奇异变形杆菌进行了鉴定,为实验猕猴疾病检测、鉴别诊断提供参考依据。方法通过培养特性、菌落形态、染色、生化试验和血清学诊断鉴别等检查,对分离菌株进行初步鉴定,同时,对分离菌株进行致病性试验及药敏试验。结果通过表型生物学特性鉴定,并结合血清学诊断鉴别方法,确证该分离菌株为奇异变形杆菌,应用药敏试验筛选出了高度敏感的抗菌药,控制了该病的继续发生,致病性试验证明,该分离菌株对小白鼠有高致病性。结论分离到的奇异变形杆菌是导致本次婴猴腹泻死亡的病原菌,该菌为条件致病菌,对实验猕猴和研究人员均有潜在的危害,尽管该菌不是国家标准要求排除的病原菌,但该菌引发的传染病将对动物实验造成严重影响,故应引起高度重视。

高糖高脂饲料联合地塞米松诱发树鼩血糖、血脂异常

目的用高糖高脂饲料＋地塞米松（dexamethasone，DEX）诱导树鼩糖代谢和脂代谢紊乱，为建立实验性2型糖尿病疾病模型提供基础。方法14只雄性中缅树鼩，随机分为高糖高脂组（n=6）和高糖高脂＋DEX组（3mg／kg，h.i.,n=8），连续观察8周，并测定树鼩空腹血糖（FBG）、体重、甘油三酯（TG），总胆固醇（TC），糖化血红蛋白（HA1c）。结果高糖高脂饮食联合地塞米松皮下注射后能够在短时间内使树鼩血糖升高，体重降低，同时发生脂代谢紊乱，糖耐量异常。结论高糖高脂＋地塞米松连续多次空腹注射可诱发树鼩糖代谢、脂代谢紊乱，且动物状态良好。

猕猴艾滋病模型EKM基因治疗效果观察

目的明确体外导入EKM基因的实验猕猴感染SHIV-KB9后，病毒复制和免疫反应情况，为基因治疗AIDS提供实验依据。方法用血清学方法筛选出无SIV、STLV、SRV／D和B病毒感染的猕猴7只，实验当天回输自体储备血75ml，同时采集猴外周血75m1进行CD4＋T细胞分离培养，并导入EKM基因，培养结束后收获细胞，静脉回输猴体后再进行SHIV-KB9感染。采用流式细胞术、血常规检测、病毒栽量检测和基因拷贝数检测的方法确定导入基因后的实验猕猴感染sHIV．KB9后体内病毒复制和免疫损伤情况。结果导入基因和回输细胞的实验猕猴其血浆病毒载量峰值都与已报道的推迟14d出现，比模型对照组推迟11d出现，血浆病毒载量峰值均比模型对照组峰值低。流式细胞术结果表明其CD4＋T细胞计数也稳定在一定水平，CD4／CD8比值未出现明显倒置。实验组猕猴在试验结束时均未发展为猴AIDS。结论自体回输导入EKM基因的CD4＋T细胞的猕猴AIDS模型其血浆病毒载量峰值与模型对照组峰值比较有迟后作用，且低于模型对照组峰值，与回输细胞的实验对照组没有明显区别，其更确定的效果还有待进一步的研究。

猴泡沫病毒SFV-1前病毒pol基因克隆及序列分析

采用nested-PCR从猕猴肾组织细胞中获得同源性较高、具有高度保守序列的、长度为465bp大小的猴泡沫病毒SFV-1的pol基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中,并对其进行序列分析,分析结果表明所克隆的基因片断为猴泡沫病毒SFV-1pol基因片段,与文献中已发表的来源于灵长类动物SFV-1、SFV-1A、SFV-1B、SFV-2、SFV-mac、SFVkm的pol基因核苷酸序列进行比对,显示SFVkm1与上述病毒pol基因核苷酸同源性分别为91.06%、90.59%、90.82%、90.21%、89.41%、91.53%。对pol基因克隆和序列分析是了解和掌握SFV病毒分子流行病学及其变异趋势的重要手段,7种不同基因型的泡沫病毒的系统进化树分析显示了SFVkm1与它们之间的相互联系。