母体慢性铝暴露对子代鼠海马细胞内Ca^(2+)浓度及记忆行为的影响

目的探讨母体于孕前、孕期和哺乳期不同浓度的铝暴露对子代大鼠实施LTP诱导后海马细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)和记忆行为的影响。方法从孕前30d始至子代断乳止,对照组(control)与低剂量(用0.2%-Al表示)和高剂量(用0.4%-Al表示)暴露组的母代大鼠分别饮用蒸馏水和浓度为0.015mol·L-1(2g·L-1)、0.03mol·L-1(4g·L-1)的三氯化铝(AlCl3)水溶液;采用原子吸收石墨炉法测定子代鼠的脑铝及血铝含量;以Fura-2/AM为荧光指示剂,测定实施LTP诱导后海马神经元的[Ca2+]i;采用跳台法(即步下试验)测试子代鼠的记忆能力。结果①两暴露组大鼠的血铝和脑铝平均含量明显高于对照组(P<0.05及P<0.01);②与对照组相比,两暴露组海马神经元的[Ca2+]i降低,但0.2%-Al组的差异无显著性(P>0.05),而0.4%-Al组差异有显著性(P<0.01),且0.2%-Al组与0.4%-Al组间的差异亦有显著性(P<0.05);③与对照组相比,两暴露组大鼠步下试验行为测试中跳下平台的潜伏期明显缩短(P<0.01),5min内错误次数明显增加(P<0.01),且两暴露组间的差异亦具有显著性意义(P<0.01)。结论母体不同浓度的慢性铝暴露可损害子代大鼠的记忆能力,其可能的损害机制之一是母体的铝暴露导致海马神经元[Ca2+]i的降低。

出生前后铝暴露对大鼠学习记忆及海马NO、nNOS的影响

目的研究出生前后不同浓度慢性铝暴露后年轻大鼠海马NO含量和nNOS表达的变化,探讨铝损害学习记忆的突触机制。方法对照组、低剂量和高剂量组大鼠从孕期开始分别自由饮用蒸馏水15mmol.L-1和30mmol.L-1的A1C13水溶液;采用原子吸收石墨炉法测定血铝和脑铝含量;跳台法测试学习记忆能力;硝酸还原酶法检测NO含量;免疫组化方法观察nNOS阳性细胞表达。结果与对照组相比,两铝暴露组大鼠血铝和脑铝含量明显升高,学习记忆能力明显下降,海马NO含量明显降低且nNOS阳性神经元表达明显减少。结论出生前后慢性铝暴露损害了大鼠的学习记忆行为,可能与海马NO含量减少及nNOS神经元表达降低有关。

小干扰RNA抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因的表达

目的:以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞株HPV18基因组中恶性转化基因E6、E7的抑制作用及对细胞内P53蛋白表达的影响。方法:实验分细胞培养液阴性对照组(阴性对照组),无关序列siRNA对照组(无关序列对照组)及转染HPV18 E6-siRNA实验组(siRNA实验组)。设计并合成HPV18 E6-siRNA及无关序列siRNA,转染Hela细胞后,RT-PCR检测转染后48、120 h细胞内HPV18E6、E7mRNA的变化,Western blotting检测转染后48 h细胞内HPV18 E7和P53蛋白的变化。结果:siRNA转染Hela细胞的效率约为85%。siRNA转染后48 h,实验组细胞内HPV18E6、E7mRNA及E7蛋白含量降低,其含量分别为阴性对照组的33.33%、36.78%及33.84%;实验组细胞内P53蛋白含量增加,其含量为阴性对照组的2.194倍。siRNA转染后120 h,实验组细胞HPV18E6、E7mRNA含量恢复为阴性对照组的90.91%、101.60%。结论:HPV18 E6-siRNA体外能明显抑制宫颈癌Hela细胞HPV18E6、E7基因的表达,增加细胞内肿瘤抑制因子P53蛋白的水平。

纳米SiO_2对大鼠肺脏白介素-4表达的影响

目的 研究纳米SiO2 对大鼠肺脏白介素 - 4 (IL - 4 )和成纤维生长因子 -b(FGF -b)表达的影响。方法 气管内非暴露法染尘 ,一次性分别给予雌性Wistar大鼠纳米SiO2 〔粒径 (10± 5 )nm〕和常规SiO2 粉尘 (粒径 <5 μm)2 0mg/只 ,分别于染尘 1个月和 2个月时处死动物。HE和VG染色观察实验动物肺组织病理改变 ,免疫组化卵白素-生物素过氧化物酶复合物 (ABC)法观察动物肺组织IL - 4和FGF -b的表达情况。结果 (1)纳米SiO2 组大鼠的肺纤维化程度 (1期 )明显轻于常规SiO2 组 (Ⅰ + ～Ⅲ期 )。 (2 )纳米SiO2 组大鼠肺脏IL - 4表达程度稍高于对照组 ,与常规SiO2 组比表达程度较轻。 1个月时 ,纳米SiO2 组和常规SiO2 组IL - 4表达程度均重于 2个月。而FGF -b无论在纳米SiO2 组或常规SiO2 对照组 ,1个月或 2个月时 ,其表达均为弱阳性 ,与对照组无明显区别。结论 纳米SiO2 致肺纤维化程度较轻 ,大鼠肺脏IL - 4的表达水平较低。FGF

香兰素通过抑制自噬及PINK1信号通路改善新生大鼠低氧缺血性脑损伤与炎症反应

目的探讨香兰素(vanillin,Van)对新生大鼠低氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的影响及作用机制。方法将7日龄SD大鼠根据改良的Rice-Vannucci法构建HIBD模型,将120只新生大鼠随机分为5组:假手术(Sham)组、HIBD组、HIBD+Van(20 mg·kg^(-1))组、HIBD+Van(40mg·kg^(-1))、HIBD+Van(80 mg·kg^(-1))组,每组30只,香兰素处理组大鼠分别按照对应剂量腹腔内注射香兰素,每12h注射一次,连续注射2d,假手术组和HIBD组大鼠同时注射等量无菌生理盐水。48h后将各组大鼠麻醉后断头处死,收集脑组织计算脑组织含水量,TTC染色检测梗死面积,苏木精-伊红染色观察脑组织病理学变化,酶联免疫吸附法(enzyme linked immune sorbent assay,ELISA)检测脑组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)及肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor,TNF-α)含量,免疫荧光染色检测脑组织微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3)表达,蛋白质印迹(Western blot)检测脑组织自噬相关蛋白表达,实时定量PCR和Western blot检测PTEN诱导假定激酶1(PTEN induced putative kinase1,PINK1)mRNA与蛋白表达。结果与Sham组比较,HIBD组大鼠脑组织含水量显著增加(P<0.05),脑梗死面积显著增加(P<0.05),炎症细胞因子TNF-α、IL-1β与IL-6含量显著增加而抗炎因子IL-10含量显著降低(P<0.05),LC3荧光表达强度增加,Beclin-1蛋白表达水平和LC3-II/LC3-I比值显著升高(P<0.05),P62蛋白表达水平显著下降(P<0.05),同时,脑组织中PINK1mRNA与蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05)。与HIBD组比较,不同剂量香兰素(20 mg·kg^(-1)、40 mg·kg^(-1)、80 mg·kg^(-1))作用下,大鼠脑组织含水量显著下降(P<0.05),脑梗死面积显著减小(P<0.05),炎症细胞因子TNF-α、IL-1β与IL-6含量显著下降而抗炎因子IL-10含量显著升高(P<0.05),LC3荧光表达强度减弱,Beclin-1蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P<0.05),P62蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而PINK1mRNA与蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论香兰素具有改善新生大鼠低氧缺血性脑损伤、减轻炎症反应的作用,其机制可能抑制自噬及PINK1信号途径激活相关。