葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的差异表达

为探讨葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的生物学意义,利用蛋白质免疫印迹、免疫荧光及RNA印迹技术,检测了发育不同时期小鼠脑组织中GRP78、GRP94的表达及分布情况.结果显示:小鼠脑发育过程中GRP78、GRP94的表达在时间和空间上呈现出显著差异,在脑发育的早中期GRP78表达水平高于GRP94,随发育的进程GRP78不断下降而GRP94逐渐升高,至胚胎发育晚期GRP94表达水平高于GRP78.在E16.5的不同脑区,GRP78的表达呈现出从端脑到后脑逐渐递减的“浓度梯度”分布,而GRP94在不同脑区中表达相同.小鼠出生后,二者作为应激蛋白在脑组织中的表达没有明显的差异性.免疫荧光结果显示,GRP78和GRP94在大脑组织中的分布基本相同,神经细胞和神经胶质细胞的细胞质均有分布.这些观察得到的结果提示,GRP78和GRP94与神经细胞分化和脑的形态建成有关,它们分别在脑发育的不同时期起作用.

未折叠蛋白反应对维甲酸诱导鼠胚胎干细胞分化的作用

目的 研究未折叠蛋白反应 (UPR)在神经分化过程中的作用。 方法 应用全反式维甲酸 (RA)诱导鼠胚胎干细胞 (ES) ,通过免疫细胞化学和RT PCR方法检测神经组织特异性标志物的表达 ,建立以RA诱导ES细胞得到的神经分化的初步模型 ,再分别用RT PCR和Westernblot方法检测模型中UPR分子的表达。 结果 RA诱导后得到大量表达神经特异性标志物的细胞。UPR关键分子Irelα的表达在RA处理组和未经RA处理组中均下降 ,但未经RA处理组中Irelα的表达始终低于同一时间RA处理组细胞 ;Grp78的表达在RA处理组随诱导时间延长逐渐上升 ,但在未经RA处理组Grp 78的表达未见上升。Irelα和Grp78的这种表达变化与RA诱导细胞中神经特异性标志物的表达情况相关。 结论 以RA诱导ES细胞得到表达神经特异性标志物的细胞分化系统 ,可作为研究神经发育的初步模型 ,其模型中UPR分子的表达变化提示 。

大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的编码产物为外膜蛋白前体

为进一步探讨大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的生物学特性 ,将ibeB基因克隆到pET2 8a(+)载体 ,以E .coliBL2 1 (DE3)为宿主菌 ,经IPTG诱导后 ,通过Ni2 + NTA树脂提纯IbeB蛋白 .SDS PAGE确定纯化蛋白的分子量 ;应用无蛋白酶的体外转录和翻译系统进一步鉴定ibeB基因表达蛋白的分子量 ;通过 [3 5S]Met标记的体内T7表达体系并结合膜蛋白分离技术定位IbeB蛋白在细菌中的亚细胞分布 ;利用细菌侵袭实验分析IbeB蛋白抗体对E .coliK1侵袭人脑微血管内皮细胞的封闭作用 .结果发现 ,ibeB基因的重组蛋白表达纯化产物呈现出 5 0kD和 34kD两种分子量大小 ,5 0kD存在于表达细菌的可溶性部分 ,而 34kD则存在于包涵体中 ;体外翻译实验也显示出较弱的 5 0kD和较浓的 34kD两个蛋白带 ;体内T7表达体系实验显示 34kD的IbeB成熟蛋白定位于E .coli的外膜 ;抗 34kDIbeB蛋白抗体能封闭E .coli对人脑微血管内皮细胞的侵袭 .这些结果提示 ,大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的编码产物为 5 0kD的外膜蛋白前体 ,该前体可通过分子内剪接形成成熟的

LIM域结合蛋白研究进展

近来，几组研究人员分别独立地分离出一种新的蛋白质，先后将其命名为ＬＤＢ、ＮＬＩ和ＣＬＩＭ，统称为ＬＩＭ域结合蛋白。它在爪蟾和小鼠的胚胎以及成体小鼠和人中有着广泛的表达，并能与多种ＬＩＭ同源域蛋白发生相互作用，进而在神经系统发育及红细胞和淋巴细胞的成熟过程中发挥作用。ＬＩＭ域结合蛋白在果蝇中的同源体ＣＨＩＰ／ｄＬＤＢ的发现，为进一步研究 ＬＩＭ同源域蛋白提供了有价值的线索。

未折叠蛋白反应——从内质网到细胞核的细胞内信号传导

在真核细胞中 ,内质网 (ER)中未折叠蛋白聚集时 ,细胞为生存便会启动未折叠蛋白反应 (unfoldedprotein response ,U PR) ,这种反应首先发现于酵母中 ,而其保守性使人们对哺乳动物细胞的 U PR有了一定的认识。近年来发现哺乳动物细胞的 U PR不仅参与蛋白质合成和分泌通路的调节 ,还与蛋白质翻译水平下调、细胞周期停滞、细胞凋亡及内质网相关性蛋白质降解 (ER- associated degradation ,ERAD)等生理过程有关。