葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的差异表达

为探讨葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的生物学意义,利用蛋白质免疫印迹、免疫荧光及RNA印迹技术,检测了发育不同时期小鼠脑组织中GRP78、GRP94的表达及分布情况.结果显示:小鼠脑发育过程中GRP78、GRP94的表达在时间和空间上呈现出显著差异,在脑发育的早中期GRP78表达水平高于GRP94,随发育的进程GRP78不断下降而GRP94逐渐升高,至胚胎发育晚期GRP94表达水平高于GRP78.在E16.5的不同脑区,GRP78的表达呈现出从端脑到后脑逐渐递减的“浓度梯度”分布,而GRP94在不同脑区中表达相同.小鼠出生后,二者作为应激蛋白在脑组织中的表达没有明显的差异性.免疫荧光结果显示,GRP78和GRP94在大脑组织中的分布基本相同,神经细胞和神经胶质细胞的细胞质均有分布.这些观察得到的结果提示,GRP78和GRP94与神经细胞分化和脑的形态建成有关,它们分别在脑发育的不同时期起作用.

泡沫碳化硅的生物相容性

依据国家标准GB/T16886,评价了用"高分子热解结合可控熔渗反应烧结技术"制备的泡沫碳化硅的生物相容性.结果表明:这种泡沫碳化硅没有细胞毒性,没有潜在的皮肤致敏性,遗传毒性试验、皮下和骨植入试验均未见异常反应,具有良好的生物相容性,可应用在外形复杂和长段承重骨缺损的修复.

可卡因对后代多巴胺能神经系统的长时影响:剂量依赖性与年龄依赖性研究

目的 通过建立妊娠中晚期暴露于可卡因的小鼠动物模型 ,探讨可卡因对后代多巴胺能神经系统 (dopaminergicnervoussystem ,DAS)的发育是否具有长时程影响 ,同时探讨这种影响是否具有剂量依赖性和年龄依赖性。方法 称量不同剂量可卡因处理组与对照组的后代仔鼠在青春前期、青春期和成年期的体重和脑重 ;运用高效液相色谱结合电化学检测器 (HPLC EC)的技术检测各组各时期后代仔鼠脑内多巴胺 (dopamime,DA)及其代谢产物 3 ,4 双羟苯乙酸 (3 ,4 di hydroxyphenylaceticacid ,DOPAC)、高香草酸 (4 hydroxy 3 menthoxyphenylaceticacid ,HVA)含量差异 ;通过免疫组织化学结合图像分析方法观察黑质区 (substantianigra,SN)酪胺酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase,TH)的分布与含量。 结果 在妊娠期中晚期皮下注射中等剂量可卡因的仔鼠在青春前期和青春期生长发育延迟 ,脑内DA及其代谢产物的含量比对照组明显增高 ,SN区TH相对含量增多 ,这些改变在成年期恢复正常 ;低剂量组的仔鼠各项检测指标在各时期与对照组相比无统计学意义 ;高剂量组的妊娠母鼠流产率为 80 % ,新生仔鼠 1 0d内死亡。结论 妊娠期暴露于可卡因对后代DAS的发育和功能具有长时程影响 。

内质网分子伴侣GRP78在小鼠脑发育过程中的时空表达

多细胞生物体发育的实质是基因的选择性表达,表达蛋白的成熟有赖于分子伴侣的协助,但迄今分子伴侣特别是内质网分子伴侣在脑发育过程中的作用尚不清楚。本文应用RT-PCR、蛋白质免疫印迹和免疫组织化学的方法研究了小鼠发育不同阶段的脑组织中GRP78的表达和定位分布随时间变化的情况。结果发现GRP78在小鼠脑发育过程中呈时空性表达:胚胎早期表达较高,胚胎发育末期逐渐下降,出生后逐渐升高,至生后一周时达到成年鼠的水平;在胚胎期GRP78蛋白在脑组织的表达呈现从端脑到后脑逐渐降低的趋势。研究结果还表明GRP78蛋白的免疫染色阳性产物在神经细胞中出现的时间早于神经胶质细胞。这些首次观察到的结果提示GRP78与脑的早期发生和形态建成有一定的关系。

自由基对培养的鼠肾小球系膜细胞膜系统损伤的研究

目的 观察自由基对肾小球系膜细胞 (GMC)膜系统的影响。方法 用黄嘌呤氧化 酶黄嘌呤生成自由基 ,作用于培养的鼠GMC ,通过TBA比色法检测脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量及透射电镜观察超氧化物歧化酶 (SOD)对细胞膜系统的保护作用。结果 未加SOD组GMC的MDA含量明显增加 ,电镜下出现细胞膜系统的损伤性改变。加SOD组MDA含量未见明显增加。电镜下细胞膜系统未见明显改变。结论 自由基可引起GMC膜系统脂质过氧化损伤 。

神经生长端发育中两种细胞粘着机制的分子联系

本文综述神经生长端在发育过程中 ,通过其表面的整合素与细胞外基质形成点粘着 ,这种粘着与胞内肌动蛋白逆流相偶联 ,为生长端生长提供支点和动力 ;同时生长端还借助神经细胞粘着分子与其它细胞发生粘着 ,参与神经束的形成、诱导生长端向突触前膜分化。神经细胞粘着分子与整合素都能激活局部粘着激酶 。

LIM域结合蛋白研究进展

近来，几组研究人员分别独立地分离出一种新的蛋白质，先后将其命名为ＬＤＢ、ＮＬＩ和ＣＬＩＭ，统称为ＬＩＭ域结合蛋白。它在爪蟾和小鼠的胚胎以及成体小鼠和人中有着广泛的表达，并能与多种ＬＩＭ同源域蛋白发生相互作用，进而在神经系统发育及红细胞和淋巴细胞的成熟过程中发挥作用。ＬＩＭ域结合蛋白在果蝇中的同源体ＣＨＩＰ／ｄＬＤＢ的发现，为进一步研究 ＬＩＭ同源域蛋白提供了有价值的线索。

诱导干细胞分化为神经细胞的研究进展

干细胞是在机体分化过程中存在的具有自我增殖、更新能力，且能形成各种类型分化细胞的一类细胞的总称。它不但为细胞发育分化和细胞诱导研究提供了很好的模型，而且对于临床细胞替代疗法与细胞移植具有重要意义。作者综合干细胞研究的成果，从方法、机理及诱导得到的神经细胞的检查等几个方面对诱导干细胞向神经细胞分化的进展加以综述。

神经生长锥内α-spectrin与F-actin的免疫细胞化学研究

目的 为了探讨α 血影蛋白 (α spectrin)和纤维型肌动蛋白 (F actin)在神经生长锥激烈运动与神经生长过程中的作用机制。方法 采用免疫双荧光染色法 ,以共聚焦激光扫描显微镜观察初代培养脊神经节细胞生长锥的连续水平断面上观察α spectrin和F actin的三维分布特点及其相互关系。结果 在水平面上 ,α spectrin和F actin分布在细胞质中 ,尤以细胞膜下、生长锥的P区伸展方向的前端和丝状伪足内分布最多 ,且α spectrin比F actin更接近细胞膜 ;在纵轴方向 ,α spectrin从基质侧到表面游离侧都有分布 ,而F actin在生长锥体部C区和表面游离侧分布较少。结论 提示α spec trin和F actin共同参与生长锥运动、神经生长外 ,还参与构筑生长锥内的三维网架及维持生长锥的极性。

mRNA前体选择性剪接的研究进展

ｍＲＮＡ前体的选择性剪接(又称可变剪/拼接)是真核生物的一种基本而又重要的调控机制;它精细协调基因的功能;高效调节基因的定量表达以及蛋白功能的多样化,影响主要发育方向的决定,对细胞的分化、发育、生理功能和病理状态都有重要意义。选择性剪接与许多人类疾病密切相关。目前在生物信息学领域已有选择性剪接数据库的构建,用于选择性剪接的信息存储和处理。

非折叠蛋白质应答对人胚肾细胞293A迁移特性的影响

为了研究非折叠蛋白质应答对器官发生的影响 ,应用衣霉素诱导非折叠蛋白质应答并观察其对人胚肾细胞系 2 93A迁移特性的影响。在实验中 ,应用划痕法对细胞迁移进行观察 ,并应用细胞黏附实验、荧光染色技术、扫描电镜技术及免疫印迹实验分别对细胞黏附特性、微管及微丝、细胞表面边缘的突起及小分子GTPase的表达水平进行研究。结果表明 ,非折叠蛋白质应答可以抑制细胞迁移 ,进一步的研究发现 ,非折叠蛋白质应答可以降低细胞的黏附能力、引起细胞骨架的重排、抑制伪足的形成并降低RhoA的表达水平。这提示 ,非折叠蛋白质应答可能通过抑制应激细胞的迁移为应激细胞的功能修复赢得了时间 。

幽门螺杆菌感染者胃黏膜中内质网分子伴侣Grp94的表达

目的:探讨幽门螺杆菌感染对胃黏膜组织中内质网分子伴侣Grp94mRNA及蛋白水平表达的影响及意义.方法:应用半定量RT-PCR方法及Westernblot方法检测感染与未感染幽门螺杆菌的胃黏膜组织中Grp94mRNA及蛋白的表达情况.结果:未感染组28例,Grp94mRNA表达量为0.424±0.055,感染组32例,Grp94mRNA表达量为0.882±0.082.两组相比感染组Grp94mRNA的表达量明显高于未感染组(P<0.01);未感染组Grp94蛋白表达量为0.427±0.036,感染组Grp94蛋白表达量为0.671±0.072,两组相比感染组Grp94蛋白表达量明显高于未感染组(P<0.01).结论:幽门螺杆菌感染可使胃黏膜增加Grp94mRNA的表达及蛋白的合成,这可能有利于胃黏膜的自身保护作用.

未折叠蛋白反应对维甲酸诱导鼠胚胎干细胞分化的作用

目的 研究未折叠蛋白反应 (UPR)在神经分化过程中的作用。 方法 应用全反式维甲酸 (RA)诱导鼠胚胎干细胞 (ES) ,通过免疫细胞化学和RT PCR方法检测神经组织特异性标志物的表达 ,建立以RA诱导ES细胞得到的神经分化的初步模型 ,再分别用RT PCR和Westernblot方法检测模型中UPR分子的表达。 结果 RA诱导后得到大量表达神经特异性标志物的细胞。UPR关键分子Irelα的表达在RA处理组和未经RA处理组中均下降 ,但未经RA处理组中Irelα的表达始终低于同一时间RA处理组细胞 ;Grp78的表达在RA处理组随诱导时间延长逐渐上升 ,但在未经RA处理组Grp 78的表达未见上升。Irelα和Grp78的这种表达变化与RA诱导细胞中神经特异性标志物的表达情况相关。 结论 以RA诱导ES细胞得到表达神经特异性标志物的细胞分化系统 ,可作为研究神经发育的初步模型 ,其模型中UPR分子的表达变化提示 。

大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的编码产物为外膜蛋白前体

为进一步探讨大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的生物学特性 ,将ibeB基因克隆到pET2 8a(+)载体 ,以E .coliBL2 1 (DE3)为宿主菌 ,经IPTG诱导后 ,通过Ni2 + NTA树脂提纯IbeB蛋白 .SDS PAGE确定纯化蛋白的分子量 ;应用无蛋白酶的体外转录和翻译系统进一步鉴定ibeB基因表达蛋白的分子量 ;通过 [3 5S]Met标记的体内T7表达体系并结合膜蛋白分离技术定位IbeB蛋白在细菌中的亚细胞分布 ;利用细菌侵袭实验分析IbeB蛋白抗体对E .coliK1侵袭人脑微血管内皮细胞的封闭作用 .结果发现 ,ibeB基因的重组蛋白表达纯化产物呈现出 5 0kD和 34kD两种分子量大小 ,5 0kD存在于表达细菌的可溶性部分 ,而 34kD则存在于包涵体中 ;体外翻译实验也显示出较弱的 5 0kD和较浓的 34kD两个蛋白带 ;体内T7表达体系实验显示 34kD的IbeB成熟蛋白定位于E .coli的外膜 ;抗 34kDIbeB蛋白抗体能封闭E .coli对人脑微血管内皮细胞的侵袭 .这些结果提示 ,大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的编码产物为 5 0kD的外膜蛋白前体 ,该前体可通过分子内剪接形成成熟的

Paraptosis——一种新的细胞死亡方式

人们一直认为细胞死亡有两种方式—细胞坏死和凋亡。但最新研究表明还存在一种非凋亡性细胞程序性死亡 ,命名为paraptosis。Paraptosis在形态学上与凋亡不同 ,不具有凋亡的典型特征 ,即缺少染色质的新月形凝集和凋亡小体。它是以胞浆空泡的形成为特征 ,在整个过程中胞浆和胞核密度增加 ,线粒体肿胀 ,但细胞膜和细胞器仍保持完整 ;无“阶梯状DNA区带” ,ISEL ,TUNEL标记为阴性。paraptosis过程中有RNA及蛋白质合成 ,并为caspase非依赖性的。目前已知 paraptosis与许多生理和病理现象相关。

钮蛋白在神经生长锥的三维分布及其机能意义

目的 探索钮蛋白 (vinculin)在神经生长锥形态变化和神经生长过程中的作用机制。 方法 用免疫细胞化学方法 ,检测了初代培养鸡胚脊神经节细胞生长锥的细胞骨架蛋白vinculin的三维分布特征及其与纤维型肌动蛋白 (F actin)的相互关系。 结果 在三维的水平面上 ,vinculin与F actin的免疫反应活性在P领域和C领域的部分区域重合 ,在P领域伸展方向前端和丝状伪足内免疫反应活性最强。vinculin比F actin更接近细胞膜分布 ;在纵轴方向 ,vinculin主要分布在中部以上的表面游离侧 ,基质侧未见分布 ;F actin大部分与vinculin重叠 ,但比vinculin分布更广泛。 结论 vinculin是构成膜骨架蛋白成分之一 ,具有连接生长锥细胞膜和F actin的作用 ,参与生长锥形态变化、伪足伸缩 ,使神经突起生长。

内质网分子伴侣家族成员在幽门螺杆菌感染者胃黏膜中的表达和意义(英文)

目的探讨内质网分子伴侣家族成员Grp94、Grp78和PDI在幽门螺杆菌感染者胃黏膜组织中的表达及意义。方法应用半定量RT-PCR方法及Westernblot方法分别检测感染与未感染幽门螺杆菌的人胃黏膜组织中Grp94、Grp78和PDI的mRNA及蛋白的表达情况。结果未感染组28例,Grp94、Grp78和PDI的mRNA表达量分别为(0.427±0.0360)、(0.8038±0.500)和(0.5198±0.0379),感染组32例,Grp94、Grp78和PDImRNA表达量为(0.882±0.082)、(1.1586±0.0839)和(1.0642±0.1533)。两组相比,感染组的Grp94、Grp78和PDImRNA的表达量明显高于未感染组(P<0.01);未感染组Grp94、Grp78和PDI蛋白表达量分别为(0.427±0.0360)、(0.4345±0.0545)和(0.5198±0.0379),感染组Grp94、Grp78和PDI蛋白表达量为(0.671±0.072)、(0.6204±0.0412)和(0.8252±0.032)。两组相比,感染组Grp94蛋白的表达量明显高于未感染组(P<0.01)。结论幽门螺杆菌感染可使人胃黏膜增加Grp94、Grp78和PDImRNA的表达及蛋白的合成,这可能有利于胃黏膜的自身保护作用。

强迫游泳应激强度的改变对大鼠海马中c-fos表达习惯化的影响

目的 研究应激强度的改变对重复应激导致的大鼠海马中c fos表达习惯化的影响。方法 采用特异抗体的免疫组织化学方法 ,在重复强迫温水游泳应激导致的c fos表达习惯化大鼠模型基础上 ,观察强迫冰水游泳应激对大鼠海马中c fos表达的影响。结果 重复强迫温水游泳应激导致c fos表达习惯化后 ,再给予强迫冰水游泳应激使c fos表达水平再次升高。

分子开关Rho族GTP酶与神经突起生长

生长端是神经唯一的生长点 ,它将寻址 ,选择靶位 ,最后形成突触。生长端如何正确破译导向信号、产生形状及运动变化 ,一直是神经科学的研究焦点。本文重点对分子开关 Rho族 GTP酶在神经发育中的调节作用及其 Rho族 GTP酶的上。