医学院校中开设基因组学课程的探索

基因组学教学是新涌现的医学和生物学相关专业教学内容之一。本文首先介绍了国内外医学院校开设基因组学课程的情况；继而总结了中国医科大学基础医学院医学基因组学教研室在医学院校中开设基因组学课程的实践经验，在教学内容、教材的选择、教学过程中的教书育人、教学方式的选择等方面提出了建议；最后对基因组学课程教学的效果进行了评价。

肯尼迪病基因突变分析

目的对1例临床拟诊断为肯尼迪病的患者进行雄激素受体(AR)基因突变分析。方法对肯尼迪病患者AR基因第一外显子CAG三核苷酸重复序列进行PCR扩增TA克隆后测序。结果基因检测结果表明,患者AR基因第一外显子中CAG重复序列数为50个,符合肯尼迪病基因诊断的标准。结论基因诊断可以作为肯尼迪病诊断的可靠依据。

一个低磷酸酶血症家系的基因突变分析

目的筛查低磷酸酶血症患者的致病基因突变,丰富该疾病的基因突变数据库,进一步从基因水平上确定患者的临床诊断并探讨其发病机制。方法提取家系中患者的外周静脉血基因组DNA,在UCSC Genome Browser Home网站获得人类肝/骨/肾碱性磷酸酶(ALPL)基因的DNA序列,针对该基因编码区设计引物,PCR扩增目的片段,采用测序分析的方法查找致病基因突变。结果在先证者的ALPL基因编码区第12外显子筛查到1个杂合突变c.1366G>A(p.G456R),其母亲也存在相同的基因突变。结论初步认为本研究中检测到的c.1366G>A突变,是该家系中患者临床表型的致病因素。

研究生分子生物学实验技术教学的思考与实践

分子生物学实验教学是医学院校中研究生分子生物学教学的重要组成部分。文章就教学内容(综合性实验的设置、新技术实验的增设、与生物信息学教学的结合)、教学方式(实验理论与实验操作穿插式教学、小班授课)、考核方法(实验操作及科研设计加入考核体系)及师资队伍建设(教师队伍选择与培养、研究生助教)等方面提出建议,以期为相同层次教学的设置与安排提供有益的借鉴与参考。

胃癌组织MUC黏蛋白表达及其与胃癌分型关系的研究进展

目的:阐述黏蛋白在胃癌中表达变化的临床病理意义,探讨黏蛋白标记的胃癌分型在研究胃癌的生物学行为和发病机制方面的意义。方法:通过Pubmed文献检索系统、万方数据资源系统和维普信息资源系统,选择了43篇研究文献,内容涉及黏蛋白的研究概况,黏蛋白在胃癌中表达的变化以及黏蛋白标记的胃癌分型的最新研究进展。结果:黏蛋白MUC1、MUC5AC、MUC6在正常胃黏膜中呈强阳性表达而MUC2则不表达。在正常胃黏膜向肠上皮化生、胃癌演进过程中,MUC1、MUC5AC、MUC6表达呈下调趋势而MUC2表达上调。以黏蛋白为标记可对胃癌进行重新分型,弥补了Lauren分型的不足。结论:黏蛋白MUC质和量的变化可以反映胃上皮细胞癌变的情况。黏蛋白标记的胃癌分型有助于进一步研究胃癌的生物学行为及潜在的分子机制。

野生型ADAR1蛋白与其R916W突变体在哺乳动物细胞中相互作用的研究

目的:应用酵母双杂交和哺乳动物双杂交系统研究野生型双链RNA腺苷酸脱氨基酶ADAR1蛋白(ADAR1WT)与其突变体R916W(ADAR1R916W)之间的相互作用,从而探讨ADAR1基因错义突变在遗传性对称性色素异常症中的分子致病机制。方法:通过RT-PCR方法从患者外周血白细胞中获得含ADAR1基因R916W突变的全长cDNA,将野生型和突变cDNA分别克隆到相关质粒载体上,利用MatchmakerTMGAL4酵母双杂交系统3和CheckMateTM哺乳动物双杂交系统检测蛋白单体间的相互作用。结果:在酵母细胞中未检测到野生型-野生型ADAR1蛋白及野生型-突变体ADAR1蛋白间的相互作用;与对照细胞相比,pBIND-ADAR1WT和pACT-ADAR1WT共转染的HeLa细胞中荧光素相对活性显著升高(P<0.05);与共转染pBIND-ADAR1WT和pACT-ADAR1WT的HeLa细胞比较,pBIND-ADAR1R916W和pACT-ADAR1WT共转染的细胞中荧光素相对活性明显降低(P<0.05),为前者的66%。结论:在哺乳动物细胞中ADAR1WT自身相互作用,ADAR1WT和ADAR1R916W突变体蛋白相互作用依然存在但作用明显减弱。

细胞周期相关蛋白DCT1染色体及细胞定位与其组织表达的研究

目的对候选抑癌基因DOC-1R((Deleted in oral cancer-1 related,CDK2AP2)相关基因DCT1(DOC-1Rterminal1)进行染色体定位分析并观察其细胞内定位,检测该基因在人类组织中的表达。方法通过辐射杂交细胞系对其进行染色体定位分析,同时构建EGFP-DCT1质粒并转染HeLa细胞,荧光显微镜观察DCT1蛋白在细胞内的定位。此外,应用荧光定量PCR的方法检测该基因在16个正常人类组织中的表达。结果DCT1基因定位于5q31,其编码产物在HeLa细胞中定位于核膜,该基因在正常人类的16个组织中均有表达,其中在脾中表达水平较高。结论DCT1可能为细胞周期调控相关基因,在人类组织中普遍表达。

A型激酶锚定蛋白γ在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的表达

目的研究小鼠卵母细胞减数分裂过程中A型激酶锚定蛋白(AKAP7)γ的表达情况。方法收集生发泡(GV)期及第2次减数分裂中期(MⅡ期)小鼠卵母细胞,Western blot方法检测AKAP7γ蛋白的表达及修饰情况。结果在小鼠卵母细胞减数分裂过程中,AKAP7γ在GV及MⅡ期均有表达,且在MⅡ期卵母细胞中,AKAP7γ电泳迁移率变慢,应用冈田酸及碱性磷酸酶分别处理GV及MⅡ期卵母细胞,AKAP7γ电泳迁移率差异消失。结论随减数分裂进程,在MⅡ期小鼠卵母细胞中,AKAP7γ发生磷酸化修饰,提示AKAP7γ不仅作为AKAP发挥支架蛋白的作用,其本身也可作为其他激酶的底物和效应分子。

A型激酶锚定蛋白在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中的作用

目的探讨A型激酶锚定蛋白(AKAPs)在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中的作用。方法收集生发泡期小鼠卵母细胞,显微注射Ht31或Ht31-P,观察卵母细胞减数分裂恢复情况。结果在蛋白激酶A(PKA)持续激活的情况下,Ht31注射组能促进小鼠卵母细胞减数分裂重新启动,解除PKA引起的生发泡期阻滞,而Ht31-P对照组不能。结论 AKAPs介导的PKA正确锚定对小鼠卵母细胞第一次减数分裂阻滞至关重要。

一个眼牙指发育不良家系的基因突变分析

目的 旨在报道一个罕见的中国汉族眼牙指发育不良家系,并对该家系进行基因突变分析.方法 采用PCR及测序方法检测该家系先证者GJA1基因编码区及其侧翼序列的突变,然后在家系成员中验证,并通过Weblogo软件对可疑变异位点进行保守性分析;同时利用PCR、电泳及测序分析方法,检测HOXD13基因突变,排除患者由HOXD13基因突变致病的可能.结果 该家系内患者均携带GJA1基因的杂合突变c.605 C〉T,正常个体均无此突变;该突变导致Cx43蛋白第202位氨基酸由精氨酸变成组氨酸（p.R202H）;HOXD13基因未见异常.结论GJA1基因c.605 C〉T（p.R202H）突变是该中国汉族眼牙指发育不良家系的致病突变,该突变为中国人群中首次报道.

一先天性厚甲家系角蛋白基因突变鉴定

目的 探讨一个先天性厚甲家系角蛋白基因突变。方法 用PCR及Sanger测序技术对先天性厚甲家系先症者KRT17基因所有外显子和KRT6B基因编码螺旋起始和终止区域序列进行突变鉴定，针对发现的可疑位点，Sanger测序检测家系其他成员该位点的变异情况。结果 基因检测结果表明，家系患者KRT17基因错义突变c.263T 〉 C，该突变导致角蛋白17（K17）第88位氨基酸由蛋氨酸变成苏氨酸（p.M88T），KRT6B基因未见异常。结论 KRT17基因c.263 T 〉 C（p.M88T）突变是该先天性厚甲家系致病基因突变。

联合应用高分辨率熔解曲线和多重连接依赖探针扩增技术对PAH基因突变筛查研究

目的联合应用高分辨率熔解曲线（highresolutionmelting，HRM）和多重连接依赖探针扩增（multiplexligation—dependentprobeamplification，MLPA）技术检测苯丙酮尿症（phenylketonuria，PKU）患者基因突变，并探讨两种技术联合运用对于突变筛查的价值。方法采用HRM和MLPA技术对26例临床诊断为PKU的患者苯丙氨酸羟化酶基因（phenylalaninehydroxylase，PAH）进行检测，并通过测序验证；针对未报道的基因改变进行聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析。结果在52个等位基因中检测到44个突变等位基因（共21种不同突变），包括第4外显子拷贝数的增加，总检出率达84．62％（44／52），其中C．584—585insA和IVSl0＋1G〉T突变在国内外未见报道。此外，R243Q（25％）突变为中国最常见的突变种类。结论应用HRM和MLPA技术相对提高了PAH基因突变筛查的检出率，检测结果丰富了基因突变数据库，并为临床诊断与产前诊断提供实验室依据。

小干扰RNA抑制胃癌细胞肝素酶表达及侵袭的实验研究

目的利用 RNA 干扰(RNAi)技术封闭胃癌细胞系 SGC7901肝素酶表达,观察其对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法体外转录合成小于扰 RNA(siRNA),经脂质体转染胃癌细胞系;结合逆转录(RT)-PCR,Western 印迹检测类肝素酶 mRNA 及蛋白质表达;通过体外侵袭实验评价肝素酶RNAi 后胃癌细胞系的侵袭能力变化。结果肝素酶 siRNA 分子可以特异性地抑制 SGC7901细胞肝素酶 mRNA,抑制率达(70±6)%;肝素酶 RNAi 后 SGC7901细胞的侵袭抑制率达(61±36)%。结论靶向肝素酶基因的 siRNA 分子能特异性抑制其蛋白表达水平,降低肿瘤细胞的侵袭能力。肝素酶是促进胃癌细胞侵袭转移的关键分子,并可为抑制胃癌侵袭转移提供新策略。

胃癌与癌旁组织miRNA差异表达谱的研究

目的研究胃癌中表达失调的miRNA及其生物学功能，从而进一步阐明miRNA在胃癌发生中的分子机制。方法将总RNA加ploy（A）尾后进行反转录PCR扩增特异miRNA，使用QuantityOne软件进行定量分析，计算每对样本胃癌与癌旁组织比值（T／NRatio），使用SAM软件进行统计分析。MTT法检测miR-21和miR-17-5p对胃癌细胞系生长的影响。结果在8对胃癌及癌旁组织样本中对237个miRNA进行了表达谱分析。对于检测到表达的161个miRNA，使用SAM软件进行统计分析，确认22个在胃癌中表达上调，2个在胃癌中表达下调（FDR=0．0963）。进一步通过生长抑制试验证实在胃癌组织中表达异常增高的miR-21和miR-17-5p对胃癌细胞的生长有明显的促进作用。结论这些在胃癌中异常表达的miRNAs具有成为新一代胃癌标记物的潜力，能够为胃癌的精确诊断分型提供依据，同时针对这些靶点可以开发新的核酸治疗技术，通过抑制或增强其功能来达到治疗胃癌的目的。

AKAP7γ介导蛋白激酶A在小鼠G_2期卵母细胞发挥阻滞作用

目的:探讨小鼠卵母细胞G2期阻滞中,AKAP7γ是否是介导蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)锚定在Cdc25B底物蛋白处的A型激酶锚定蛋白(A-kinase anchoring proteins,AKAPs)。方法:以PKA锚定阻断剂Ht31处理G2期阻滞的小鼠卵母细胞,观察Cdc25B-S321的磷酸化状态,以免疫共沉淀方法检测PKA RII-AKAP7γ-Cdc25B的相互作用。结果:在G2期阻滞的小鼠卵母细胞中,Ht31处理后Cdc25B-S321不能被PKA磷酸化,同时PKA RII-AKAP7γ及AKAP7γ-Cdc25B存在相互作用。结论:在小鼠卵母细胞中,PKA通过AKAP7γ锚定在胞质中的Cdc25B底物蛋白处,磷酸化其321位丝氨酸,使卵母细胞减数分裂阻滞在G2期,PKA RII-AKAP7γ/Cdc25B通路在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中发挥重要作用。