灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠脑组织抗氧化酶的影响

目的:探讨灯盏花素注射液对脑缺血再灌注小鼠脑组织抗氧化酶的影响。方法:复制小鼠脑缺血再灌注模型,进行灯盏花素的治疗,监测不同时间脑皮质血流、脑组织Evans蓝含量及抗氧化酶类等的变化。结果:缺血再灌注后脑皮质血流降低,治疗后4 h升高,其他时间降低。不同再灌注时间脑缺血再灌注组脑组织Evans蓝含量升高,治疗后降低。脑缺血再灌注组抗氧化酶活性降低,MDA含量增高,而治疗组酶活性增高,MDA含量降低。结论:灯盏花素能增加脑缺血再灌注小鼠抗氧化酶的活性,改善脑血流,减轻血脑屏障的损伤,对脑缺血再灌注损伤具保护作用。

丁香酚对酵母菌发热大鼠血浆及脑脊液中精氨酸加压素含量的影响

目的探讨丁香酚抑制酵母菌所致发热的机制。方法建立大鼠酵母菌性发热模型,观察丁香酚对大鼠直肠温度的影响,放免法测定大鼠血浆及脑脊液中精氨酸加压素(AVP)含量的改变。结果皮下注射酵母混悬液后大鼠直肠温度明显升高(△T由-0.23℃升高至1.13℃,P<0.01),血浆及脑脊液中AVP含量也明显增加(分别由1.55,2.57ng/ml升高至2.03,4.29ng/ml,P<0.05),丁香酚能明显抑制酵母菌所致大鼠发热反应(△T由1.19℃降低至0.03℃,P<0.01),同时血浆及脑脊液中AVP含量也进一步增加(分别由2.03,4.29ng/ml升高至3.51,6.69ng/ml,P<0.05)。结论丁香酚通过增加体内AVP的含量而发挥其解热作用。

TTC染色评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤梗死面积的适宜观察时间及计算方法

目的探索氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤梗死面积的适宜观察时间及计算方法。方法将11只豚鼠离体心脏分为2组:对照组(control组,n=5)和缺血30 min再灌注60 min组(I30R60组,n=6)。Langendorff灌流后垂直心脏长轴将心脏横切成5片,弃去心耳片后,由心耳往心尖方向依次记为第1片、第2片、第3片、第4片并进行TTC染色,分别于染色后4个时间点(1、2、3、4周)对4个横切片进行逐个观察,并通过统计前2片、前3片和前4片的方法计算梗死面积百分比。结果与control组比较,I30R60组在第1周观察时第1至第4横切片梗死面积百分比均显著增加(P<0.05);第2周观察时,第1片无明显梗死,其余3个横切片与control组比较可见明显梗死区域(P<0.05);第3周观察时,4个心脏横切片梗死面积与control组比较无统计学差异(P>0.05);第4周观察时,仅第4片与control组比较具有统计学差异(P<0.05)。在计算梗死面积百分比方法中,与control组比较,I30R60组采用前2片、前3片和前4片进行计算,在第1周和第2周观察梗死面积具有统计学差异(P<0.05),在第3周、第4周观察均无统计学差异(P>0.05)。结论用TTC染色法评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤时,单片及多片心脏横切片评估梗死程度染色后第1周及第2周内观察为宜。

高压氧和SB203580联合应用对大鼠脑缺血再灌注紧密连接蛋白claudin-1的表达及血脑屏障通透性的影响*

目的:探讨高压氧(HBO)和SB203580联合应用对大鼠脑缺血再灌注紧密连接蛋白claudin-1的表达及血脑屏障的通透性影响。方法:雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组(sham)、脑缺血再灌注组(IR)、HBO+脑缺血再灌注组(HBO+IR)、脑缺血再灌注组+SB203580(IR+SB203580)、HBO+脑缺血再灌注+SB203580组(IR+HBO+SB203580)。复制局灶性脑缺血再灌注模型,IR+SB203580组和IR+HBO+SB20358组于脑缺血再灌注前30min经侧脑室注射100μlP38MAPK信号传导通路抑制剂SB203580,HBO+IR组与IR+HBO+SB203580组并于再灌注期间行0.25MPa(2.5ATA)HBO治疗5次,在处死动物前1h经尾静脉注射2%伊文思兰(EB),采用EB法检测缺血再灌注后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法和Westernblot法分别观察claudin-1蛋白缺血再灌注72h后脑组织中的分布及claudin-1蛋白的表达水平的变化。结果:Claudin-1的蛋白表达与sham组相比于再灌注后72h表达显著降低(P<0.01),同时伴有脑组织EB的含量显著增高(P<0.01)。HBO+IR组与IR+SB203580组较IR组脑组织claudin-1蛋白表达水平明显增加(P<0.01,P<0.05),脑组织EB的含量显著降低(P<0.01)。IR+HBO+SB203580组相比脑组织中claudin-1蛋白表达与IR+HBO组、IR+SB203580较比显著增加(P<0.01),脑组织EB的含量显著降低(P<0.01)。结论:高压氧从蛋白水平可明显增加脑缺血再灌注脑组织中紧密连接相关蛋白claudin-1的蛋白表达,从而降低血脑屏障通透性;高压氧与SB203580二者具有协同作用。

小剂量脂多糖气管内滴注制备急性肺损伤动物模型的探究

目的 急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征 （Acute lung injury/Acute respiratory distress syndrome, ALI/ARDS） 发病率与死亡率均较高, 发病机制迄今尚不完全清楚, 也无特效的治疗方法.本实验成功地建立一种轻型ALI动物模型,为研究该病的早期发病机制及治疗提供重要的观察手段.方法 给予45只SD大鼠气管内灌注内毒素0.5 mL/kg （LPS 200 μg/mL）,观察4、12、24及48 h光镜和电镜下的病理改变;观察支气管肺泡灌洗液 （BALF） 中细胞分数、白蛋白等.结果 在观察时间内实验动物均存活.LPS给予后实验组病理检查发现①肺间质水肿;②肺泡腔内多形核中性粒细胞 （PMN） 浸润和红细胞渗出; ③肺泡Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞破坏.以LPS给予后4～12 h为最严重.BALF中PMN及白蛋白明显增加.结论 气管内灌注内毒素0.5 mL/kg （LPS 200 μg/mL） 成功地建立急性肺损伤动物模型.

高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织小窝蛋白-1、基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:研究高压氧(HBO)对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织小窝蛋白-1(Cav-1)、MMP-9表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组、脑缺血再灌注组(IR)、IR+HBO、HBO组。复制局灶性脑缺血再灌注模型。HBO和IR+HBO组经0.25MPaHBO治疗5次。采用比色法、免疫组化法及Western印迹法检测血脑屏障的通透性和Cav-1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达。结果:IR组第4、12、24、48、72小时脑组织伊文思蓝(EB)的含量与第0小时组相比明显增加,再灌注后第4小时EB的含量最高。IR+HBO组脑组织EB的含量明显低于IR组。IR组第4、12、24、48、72小时Cav-1、MMP-9蛋白表达明显高于0小时组。IR+HBO组与IR组相比脑组织Cav-1、MMP-9蛋白表达显著减低。结论:HBO降低了脑缺血再灌注时增高的脑微血管内皮细胞Cav-1蛋白和MMP-9的表达。这可能是HBO对脑缺血再灌注时血脑屏障通透性起保护作用的机制之一。

慢性染铅对小鼠血铅、脑铅含量及海马超微结构变化的影响

目的:研究脑发育早期低水平铅暴露通过母体对仔鼠血铅、脑铅含量及海马超微结构变化的影响。方法:石墨炉原子吸收仪测定不同浓度低水平铅暴露后的小鼠子代的血铅、脑铅含量,电镜观察海马超微结构。结果:各组仔鼠随着铅暴露水平的增加,血铅、脑铅含量也都相应增加,均高于对照组(P<0.05)。海马超微结构发生改变。结论:低水平铅暴露对脑的功能产生损伤,改变海马超微结构,并可持续至成年阶段。提示孕母及婴儿是铅暴露的高危人群,铅可由母体传递给子代。

高压氧对缺血再灌注小鼠脑组织中细胞因子IL-1β、IL-8及血脑屏障通透性的影响

目的探讨高压氧(HBO)对缺血再灌注小鼠脑组织中细胞因子IL-1β、IL-8蛋白含量和mRNA的表达及血脑屏障通透性的影响。方法复制清醒小鼠脑缺血再灌注模型,于再灌注期间经0.25MPa(ATA)HBO治疗5次,采用ABC-ELISA、RT-PCR法检测脑组织中IL-1β、IL-8的含量、mRNA的表达及依文思蓝(EB)的含量。结果脑缺血再灌注组于再灌注72h脑组织中细胞因子IL-1β、IL-8含量及mRNA的表达较假手术组明显升高(P<0.01);并与脑组织EB含量渗出增多相一致。HBO+脑缺血再灌注组与脑缺血再灌注组相比细胞因子IL-1β、IL-8含量及mRNA的表达明显降低(P<0.05),并与脑组织EB含量渗出减少相一致。HBO组与假手术组相比细胞因子IL-1β、IL-8的含量及mRNA表达差异不显著(P>0.05)。结论HBO从细胞及基因水平可明显减少脑缺血再灌注损伤中促炎因子IL-1β、IL-8的含量及表达,从而对血脑屏障具有保护作用;而对正常脑组织中细胞因子IL-1β、IL-8的含量及表达影响很小。

高压氧对急性脑缺血再灌注小鼠AQP-4表达及血脑屏障通透性的影响

目的:探讨高压氧(HBO)对缺血再灌注小鼠脑组织中水通道蛋白-4 mRNA(AQP-4)的表达及血脑屏障通透性的影响。方法:复制清醒小鼠脑缺血再灌注模型,并于再灌注期间行0.25MPa HBO治疗5次,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法、比色法及干湿法分别检测脑组织中AQP-4 mRNA的表达、伊文思蓝(EB)的含量及脑组织含水量。结果:脑缺血再灌注组AQP-4 mRNA的表达、EB的含量及脑组织含水量明显高于假手术组,差异有显著性意义(P<0.01)。高压氧组与假手术组相比,脑组织中AQP-4 mRNA的表达、EB的含量及脑组织含水量变化无显著性差异。HBO+脑缺血再灌注组脑组织中AQP-4 mRNA的表达、EB的含量及脑组织含水量较脑缺血再灌注组明显降低,差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:高压氧可通过降低脑缺血再灌注中AQP-4 mRNA的表达,降低血脑屏障的通透性,减轻脑水肿。

高压氧对缺血再灌注小鼠脑组织细胞因子IL-10及血脑屏障通透性的影响

目的:探讨高压氧(HBO)对缺血再灌注小鼠脑组织中细胞因子IL-10含量、mRNA的表达、血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法:复制清醒小鼠脑缺血再灌注模型,并于再灌注期间行0.25MPa(CBFATA)HBO治疗5次,在处死动物前1h经尾静脉注射2%伊文思兰(Evans blue,EB),采用比色法、ABC-ELISA、RT-PCR分别检测脑组织中细胞因子IL-10含量、mRNA的表达及EB的含量的变化。结果:脑组织EB的渗出于缺血再灌注后第4h为最多,于再灌注后第11h、23h、48h、72h逐渐下降;HBO+脑缺血再灌注组脑组织EB的渗出与相应时间的脑缺血再灌注组相比明显降低(P<0.01)。HBO组脑组织EB的渗出与相应时间的假手术组相比变化不明显(P>0.05)。脑缺血再灌注组细胞因子IL-10含量于再灌注11h开始增加并于再灌注23h达到高峰,再灌注48h、72h逐渐下降。脑缺血再灌注组细胞因子IL-10含量与相应时间的假手术组相比于再灌注后11h、23h、48h、72h都明显增高(P<0.01)。HBO+脑缺血再灌注组细胞因子IL-10含量于再灌注后11h、23h、48h、72h与相应时间的脑缺血再灌注组相比变化不明显(P>0.05);而IL-10mRNA的表达明显增加(P<0.01)。HBO组与相应时间的假手术组相比IL-10含量和mRNA的表达变化都不明显(P>0.05)。结论:HBO从基因水平可明显增加脑缺血再灌注72h细胞因子IL-10mRNA的表达,从而具有保护血脑屏障的作用;HBO对正常脑组织中IL-10含量、mRNA的表达作用不明显。

用Fura-2双波长荧光法测定小鼠海马细胞内游离钙

目的:探讨小鼠海马细胞分离及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的测定。方法:低浓度胰蛋白酶消化、分离海马细胞,采用Ca2+荧光指示剂Fura2双波长荧光法测定[Ca2+]i。结果:海马细胞存活率超过95%。细胞外Ca2+1.0mmol/L时,静息状态下海马细胞[Ca2+]i为(210±10.7)nmol/L。30mmol/LKCl可显著增加[Ca2+]i,并且KCl的这种效应呈一定的剂量依赖关系。结论:低浓度胰蛋白酶消化分离小鼠海马细胞简单、可靠;Fura2建立的双波长荧光法灵敏、可靠。

高压氧对脑缺血再灌注小鼠脑组织细胞粘附分子的表达及血脑屏障通透性的影响

目的:探讨高压氧(HBO)对缺血再灌注72h小鼠脑组织中细胞粘附分子(ICAM-1,VCAM-1)的表达及血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法:昆明种小鼠220只,随机分为A、B、C、D4组各55只,A、B组均为假手术组,C、D组制作为脑缺血再灌注模型。术后B、C组即给予HBO治疗5次,术后2、9、21、45及69h的5个时点,各组分别取10只小鼠经尾静脉注射2%伊文思兰(EB)后处死,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法及比色法分别检测脑组织中ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达及EB的含量。结果:脑缺血再灌注后各时点C、D组小鼠EB渗出含量及ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达均明显高于A、B组(P<0.01);C、D组间比较,C组ICAM-1mRNA的表达及EB的含量均低于D组(P<0.01),VCAM-1mRNA的表达变化不明显。A、B组间比较各项指标均差异无显著性意义。结论:HBO具有降低脑缺血再灌注72h过程中细胞粘附分子ICAM-1的表达,从而对BBB具有保护作用。

Wnt拮抗因子SFRP1在结直肠癌发病机制中的作用

目的检测结直肠癌中Wnt拮抗因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因的甲基化及表达状态,探讨SFRP1在结直肠癌发病中的作用。方法选自中国医科大学盛京医院的结直肠癌组织标本及相应的癌旁组织标本各35例,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和即时定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术检测在结直肠癌组织和相应的癌旁组织中SFRP1的表达状态。利用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP-PCR)技术检测结直肠癌组织和相应的癌旁组织中SFRP1的甲基化状态。利用RT-PCR和Western blot技术检测结直肠癌细胞中SFRP1的表达状态。结果 SFRP1 mRNA的表达水平在结直肠癌组织中明显低于癌旁组织(P<0.01)。SFRP1的甲基化频率结直肠癌组织(68.6%)明显高于癌旁组织(11.4%)(χ2=21.49,P<0.01)。在结肠癌细胞HCT116、SW480和SW620中SFRP1未见表达,SFRP1存在甲基化,而在HT-29中SFRP1有表达,SFRP1无甲基化。对HCT116、SW480和SW620使用去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)处理后,SFRP1出现表达。结论 SFRP1甲基化是引起SFRP1在结直肠癌中表达下调的重要原因之一。SFRP1甲基化及其所致表达下调可能在部分结直肠癌的发病过程中起重要作用。

高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠环加氧酶基因表达及血脑屏障通透性的影响

目的:探讨高压氧(HBO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注环加氧酶-1(COX-1)、环加氧酶-2(COX-2)mRNA的表达及血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法:160只Wister大鼠随机分为A、B、C、D 4组各40只。成功制备为局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,术后C、D组于2、9、11、45及69 h点均行0.25 MPa HBO治疗。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法及比色法分别检测大鼠4、11、23、48及72 h点脑组织中COX-1、COX-2 mRNA的表达及伊文思蓝(EB)的浓度。结果:与A、C组比较,B、D组各时间点COX-1 mRNA的表达差异无统计学意义;而COX-2 mRNA的表达及EB的浓度在11～72 h点组明显高于A、C组(P<0.05,0.01)。结论:HBO具有降低脑缺血再灌注过程中COX-2 mRNA的表达,对血脑屏障具有保护作用,而对COX-1 mRNA的表达作用不明显。

EBV转化的人乳头瘤病毒感染者B淋巴母细胞系的建立及应用

建立EB病毒(EBV)转化的B淋巴母细胞系(LCL),应用此细胞系作为抗原递呈细胞筛选抗原特异性的T细胞克隆。收集人乳头瘤病毒(HPV)感染者外周血20份,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用Pan T细胞试剂盒去除PBMC中的T细胞,获得non-T淋巴细胞,EBV病毒转化non-T淋巴细胞。应用转化的LCL细胞作为抗原递呈细胞,ELISPOT筛选可能的HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立18个LCLs,建株成功率为90%。转化成功的LCL细胞体积增大,聚集成团状或簇状。建株失败的两份标本,用于转化的non-T淋巴细胞数少于2×106。应用LCL细胞作为抗原递呈细胞筛选出64个HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立LCLs,此细胞系细胞可作为体外研究HPV特异性免疫反应的刺激细胞。

铅对小鼠海马[Ca^(2+)]的影响及L型钙通道的作用

目的 探讨铅对分离的小鼠海马细胞内游离钙的影响及其及L型钙通道的作用。方法 采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞 ,并以莹光指标剂 (Fura 2 )作Ca2 + 荧光探针 ,用双波长荧光法测定海马细胞 [Ca2 + ] i。结果 铅可致分离的小鼠海马细胞 [Ca2 + ] i 升高 [由静息时的 (2 0 3 4± 10 86)nmol L升至 (4 2 3 3± 19 2 6)nmol L] ,而不论胞外是否有钙 ;铅可抑制钾诱发海马细胞 [Ca2 + ] i 升高 ,尼莫地平可加强这种抑制作用 ,而BayK864 4则可部分消除这种抑制作用。结论 铅可致分离的小鼠海马细胞 [Ca2 + ] i 升高作用与胞内钙库释放有关 ;铅的抑制钾诱发海马细胞 [Ca2 + ] i 升高作用与其抑制L型钙通道有关。

PBL结合网络教学平台在医学机能实验课中的应用

基于问题的学习（problem based learning，PBL），是指教师在教学过程中，以务实问题为导向，通过学生小组讨论的方式，来达到自主学习的目的。其特点是：以学生为中心问题讨论替代教师为中心的知识传授，注重学生综合分析能力的培养，是从“知识传授型”教学向“能力培养型”教育的转变。近几年，以PBL教学法为主的教学改革一直应用在各个学科教学工作中，并取得了较好的成果。