紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的表达及意义

目的通过观察大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑皮层紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1表达的变化及JNK抑制剂SP600125对其表达的影响,探讨SAH后早期脑损伤的机制。方法成年雄性SD大鼠75只,随机分成假手术组(sham组)、SAH组、SAH+DMSO组、SAH+SP600125(10 mg/kg)组和SAH+SP600125(30 mg/kg)组5组。采用血管内穿刺法建立大鼠SAH模型,在SAH后24 h时,应用电镜观察各组脑皮层微血管血脑屏障形态学变化;应用Western blot检测各组中脑皮层Claudin-5、ZO-1表达的变化。结果 SAH后早期脑皮层微血管发生明显损伤改变;与sham组相比,SAH组出血后24 h Claudin-5、ZO-1的表达水平明显降低(P<0.05),c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125明显改善了脑皮层微血管形态学损伤程度,并抑制了Claudin-5、ZO-1表达水平的降低。结论大鼠SAH后早期血脑屏障结构破坏是早期脑损伤关键性机制之一;SP600125可能通过抑制细胞凋亡、保护血脑屏障发挥SAH早期脑损伤的神经保护作用。

不同浓度染铅大鼠海马神经元Ca_(2+)浓度与LTP关系的研究

目的 :探讨铅对大鼠海马神经元 Ca2 +浓度的影响及其与长时程增强 (L TP)的关系。方法 :断乳后 Wistar大鼠自由饮用不同浓度醋酸铅溶液 (0 .0 15 % ,0 .10 % ,0 .15 % ) ,建立慢性染铅动物模型。高频刺激 (HFS)海马区诱发长时程变化后 ,分离海马神经元 ,测定 [Ca2 + ]i。结果 :各染铅组大鼠海马神经元 [Ca2 + ]i与对照组比较均明显增高(P <0 .0 5 ) ;血铅浓度 (3.2 8± 0 .88) μm ol/ L 以上时海马 L TP产生率下降 ,三染铅组 PS幅值均降低 ,L TP阴性组 [Ca2 + ]i 明显高于 L TP阳性组 (P <0 .0 5 )。结论 :慢性染铅可使 HFS后大鼠海马神经元 [Ca2 + ]i 升高 ,损害海马区 L TP的在体诱导 ;铅致 L TP发生率下降与海马神经元 [Ca2 + ]i

哺乳动物的雷帕霉素靶蛋白及其底物在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的 探讨哺乳动物的雷帕霉素靶蛋白 (mTOR)及其底物对口腔鳞状细胞癌生长的影响。方法 提取RNA ,通过RT_PCR和Western印迹分析观察mTOR及其底物p70S6激酶 (p70S6k)的α1 、α2 、β1 、β2 不同亚型及起始因子 4E结合蛋白 1(4EBP1)在口腔鳞状细胞癌中的表达。结果 RT_PCR与Western印迹的结果一致。随着肿瘤恶性度的提高 ,mTOR、p70S6K的表达明显增加 ,而 4EBP1的表达则下降。结论 mTOR及其底物表达水平的强弱与口腔鳞状细胞癌的分化程度密切相关 ,它可能成为未来癌症治疗的重要靶向蛋白。

人精子蛋白激酶C活性及含量对其活力的影响

蛋白激酶 C(PKC)在跨膜信息传递中起着重要的调控作用。已有文献报道 PKC存在于人精子尾部 ,与鞭毛活动力密切相关 ,且参与鞭毛活动力的调节。本实验目的是通过对正常的与活力弱的人精子的 PKC活性及含量进行比较 ,观察 PKC活性及含量对人精子活力的影响。结果表明活力弱的人精子尾部的 PKC活性及含量明显低于正常人精子 ,提示人精子活力低下的原因与 PKC的活性及含量降低有关。

生长抑素对人胃癌细胞BGC-823生长的调控作用

目的观察生长抑素对人体分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用,测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量及蛋白激酶C(PKC)活性,探讨受体后信息传导途径。方法BGC-823细胞在含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中,于37℃、5%CO2条件下培养,分别加入不同浓度的生长抑素,应用MTT法观察细胞的增殖程度。应用放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量,应用[γ-32p]ATP掺入外源性底物的方法测定PKC活性。结果生长抑素能抑制BGC-823细胞的生长,且与剂量呈正相关。生长抑素能抑制细胞PKC活性,而对细胞内cAMP生成无明显影响。结论1、生长抑素能抑制胃癌细胞BGC-823的生长。2、生长抑素可降低PKC活性,提示其受体后信息传递途径可能涉及DG-PKC系统。

慢性染铅对大鼠海马区神经细胞Ca^(2+)浓度及Ca^(2+)-ATP酶活性的影响

目的：观察慢性染铅对大鼠海马区神经细胞Ｃａ２＋浓度及Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性的影响。方法：用０．１５％醋酸铅饲养大鼠建立慢性染铅动物模型，参照Ｄｉｌｄｙ法和徐友涵法测定海马神经细胞Ｃａ２＋浓度及Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性。结果发现：细胞内Ｃａ２＋浓度，染铅组（２０３．８３±３０．５０）ｎｍｏｌ／Ｌ，对照组（９７．６２±１９．８３）ｎｍｏｌ／Ｌ，ｔ＝８．３１Ｐ＜０．００５；Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性，染铅组（３２６．４２±４０．０６）ｎｍｏｌ（Ｐｉ）·ｍｇ－１·ｍｉｎ－１，对照组（２５３．０７±２５．４０）ｎｍｏｌ（Ｐｉ）·ｍｇ－１·ｍｉｎ－１，ｔ＝３．５４，Ｐ＜０．０１。结论：慢性染铅可使大鼠海马区神经细胞内Ｃａ２＋浓度升高。

P70 S6激酶在腮腺腺泡细胞癌中表达的研究

目的:研究P70S6激酶信号通路在腮腺腺泡细胞癌中的作用。方法:用免疫组化方法、Westen印迹分析测定腮腺腺泡细胞癌中P70S6激酶的表达。结果: 免疫组化的结果与Westen印迹分析一致,和正常组织相比,腮腺腺泡细胞癌中P70S6K的表达明显增加。结论:P70S6K的表达增加是提示腮腺腺泡细胞癌发生的重要生物化学指标。

铅对大鼠海马神经元培养细胞ERK活性的影响

目的 观察不同浓度和不同时间染铅对大鼠海马神经元培养细胞细胞质ERK活性的影响。方法 出生 4～ 8dWistar大鼠海马神经元原代细胞培养 ,抑制剂PD0 980 5 9预处理培养细胞 ,不同浓度及不同时间染铅 ,应用改良的Takai法测定ERK活性的变化。结果 0 1、0 5、1 0、5 0 μmol染铅 ,ERK活性依浓度依赖方式被激活 ,比活性倍数分别为 2 36、3 16、7 0 0、3 19(P <0 0 5 ) ;PD0 980 5 9抑制铅激活ERK活性 ,1 0 μmol染铅 30min时ERK活性最高 ,为 2 6 6 (P <0 0 5 ) ,12 0min时降至正常 ,为 1 72 (P >0 0 5 )。结论 低浓度染铅可短暂激活大鼠海马神经元原代培养细胞ERK。

人新基因hbrp的染色体定位及其对TPK活性的抑制作用(简报)

hbrp(Human BSP-Related Protein)是我们实验室最近在睾丸组织中克隆的一个人与BSP(bovine seminal plasma)蛋白相关的新基因.为了将有关该新基因信息与现有人类基因组转录图相整合,我们应用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization-FISH)法进行了该基因的人染色体基因定位,结果成功地将hbrp基因定位在人19号染色体长臂1区3带上.hbrp基因是在对BSP蛋白功能的研究过程中发现并克隆的,其同源性分析发现,与其序列最相近的是BSP蛋白家族.hbrp基因编码的蛋白质氨基酸序列中含有四个纤连蛋白Ⅱ型结构域,而BSP蛋白结构中含有两个前后排列的纤连蛋白Ⅱ型结构域,表明该蛋白可能是一种与BSP蛋白相关的结合蛋白.以前的研究中,我们发现BSP不仅能抑制PKC的活性,还能抑制酪氨酸蛋白激酶(TPK)的活性,根据BSP的这一功能,对HBRP蛋白与TPK的关系进行了研究,结果证明HBRP蛋白对TPK活性有明显的抑制作用.现将实验方法及所观察结果报道如下:

蛙皮素和生长抑素对人胃癌BGC-823细胞生长的影响及受体后信息传递

目的:观察蛙皮素(BBS)和生长抑素(SS)对人低分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用,测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量、蛋白激酶C(PKC)活性及PKC亚型的表达,探讨受体后信息传导途径．方法:BGC-823细胞在含100 mL／L小牛血清的RPMI 1640培养液中,于37℃,50 mL／L CO2条件下培养,分别加入不同浓度的BBS或SS,应用MTT法观察细胞的增殖程度．应用放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量,应用[γ-32p]ATP掺入外源性底物的方法测定PKC活性,应用Western blot方法分析PKC亚型α,β1,β,及ε的表达．结果:BBS能促进BGC-823细胞的生长,且与剂量呈正相关(r=0．878,P<0．05),这种促生长作用可被其受体拮抗剂所拮抗;BBS能促进细胞内cAMP的产生(r=0．68,P<0．01)及增加PKC活性,PKCα表达明显增加,而β1,β2及ε则无明显表达;SS能显著抑制BGC-823细胞的生长,呈剂量依赖关系(r=0．831,P<0．01);SS能显著抑制BBS的促细胞生长作用,但无明显的剂量依赖关系;SS可使细胞PKC活性明显下降,呈剂量依赖关系(r=-0．74,P<0．01)．结论:经特异性受体介导,BBS能促进胃癌细胞BGC-823的生长;其受体后信息传递途径可能涉及cAMP-PKA系统及DG-PKC系统, PKCα在BBS的受体后信息传递中可能起重要作用:SS可能通过降低PKC活性抑制BGC-823细胞的生长,同时可抑制BBS的促胃癌细胞生长作用．

小鼠受精卵早期发育过程中PKC对cdc2和cdc25C活性的影响

为研究小鼠受精卵细胞早期发育过程中PKC对cdc2和cdc2 5C活性的影响 ,采用免疫印迹和电泳迁移率差异分析的方法 ,观察PKC的激活剂TPA及其抑制剂星形孢子素对小鼠受精卵一细胞期cdc2和cdc2 5C活性的影响 .10nmol L的TPA作用 10min后 ,小鼠受精卵一细胞期卵裂率明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,而星形孢子素作用后卵裂率显著下降 (P <0 0 1) .TPA处理后 ,受精卵中呈去磷酸化状态的活性cdc2明显增加 ,没有活性呈磷酸化状态的cdc2 5C明显减少 ;而星形孢子素处理的受精卵中没有活性的cdc2明显增加 ,有活性的cdc2 5C明显减少 .结果表明 ,TPA短时间作用可以促进小鼠一细胞期受精卵分裂 ,星形孢子素抑制受精卵的分裂 ;TPA可以促进cdc2的去磷酸化以及cdc2 5C的磷酸化 ,从而促进G2 M转换 ,星形孢子素则抑制cdc2和cdc2 5C的活性 ,阻止受精卵由G2

PKC通过对MPF活性的影响在G2/M期调节细胞周期进程

为了研究PKC在NIH3T3细胞中G2/M期作用,检测了PKC的激动剂1-oleoty-2-acetyl-sn-glycerol（OAG）对G2/M期关键的调控因子MPF活性变化及细胞周期进程的影响。细胞同步化处理用Aphidicolin。用 PI（Propidium Iodide）染料与DNA结合,流式细胞仪检测细胞周期的改变。同时测定OAG加入后G2期 PKC和MPF的活性改变。结果表明Aphidicolin同步在G1/S期的细胞,释放后在经过1-2h的恢复期后,约在7h左右到达早G2期,并在10h达到G2末期。OAG在浓度为50μmol/L,100μmol/L,150μmol/L时都可激活 PKC,而CalphostinC在300nmol/L时最大限度地抑制PKC活性。50μmol/L的OAG至少1150see没有改变细胞内钙。50μmol/L的OAG在G2期使MPF活性降低,而300nmol/L calphostin C可以使MPF活性升高。在G2早期加入 OAG50μmol/L可以引起NIH3T3细胞阻滞在G2/M期交界。

人新的精子结合蛋白HBRP新功能的研究

目的:探讨新发现的人睾丸组织中与精浆蛋白BSP相关的新基因的生物学功能。方法:利用真核重组表达质粒pcDNA3/HBRP转染人胚肾HEK293细胞,建立稳定的真核表达细胞系,并用放射自显影检测该细胞系的PKC活性。结果:HBRP蛋白对PKC活性有明显的抑制作用。结论:确定了人新的精子结合蛋白HBRP的功能之一是抑制PKC活性。

蛋白激酶CK_2-β在SACC-83及SACC-LM细胞中的表达

通过对蛋白激酶CK2-β在涎腺腺样囊性癌及涎腺腺样囊性癌肺转移细胞中表达的研究,探讨蛋白激酶CK2-β与涎腺腺样囊性癌肺转移的关系。利用Western blot方法对两种细胞进行蛋白检测分析。蛋白激酶CK2-β在两种细胞的细胞核中的表达都高于在细胞质中的表达,与SACC-83细胞相比,SACC-LM细胞的细胞核及细胞质中蛋白激酶CK2-β都有较高表达。蛋白激酶CK2-β的表达与涎腺腺样囊性癌的肺转移呈正相关。

ELISA法测定人血液中组织激肽释放酶含量的研究

作者建立了Ｓ－和Ｃ－ＥＬＩＳＡ两种测定人血中组织激肽释放酶含量的方法。该法灵敏度高，特异性强，两种ＥＬＩＳＡ法只与人血液中组织激肽释放酶反应，与其它类型激肽释放酶无交叉反应。并测定了正常人血浆和血清值，建立了正常参考值。

实验化学性肝纤维化中贮脂细胞、Ⅳ型胶原的变化

通过皮下注射四氯化碳复制化学性肝纤维化大鼠模型，分别于注射后４、８、１２周处死动物。电镜下观察贮脂细胞的变化，免疫组化法检测Ⅳ型胶原在肝内分布的变化。结果表明，贮脂细胞在肝纤维化过程中经历了一个动态的变化，逐渐拉长、变形，成为肌成纤维样细胞，并分泌大量胶原。Ⅳ型胶原是肝纤维化中形成毛细血管化的主要胶原。

PKC在Ca^(2+)信号调节MPF活性中的作用

用Fura-2AM作为染料,用F-2000荧光分光光度计测细胞内Ca2+浓度的改变。用A23187-Ca2+载体提高细胞内Ca2+浓度,同时用PKC的特异性抑制剂calphostin C作用细胞来阻断PKC途径,观察MPF活性改变。结果表明:300nmol/L的Calphostin C可以最大限度地抑制PKC活性。Calphostin C不能影响A23187引起的细胞内Ca2+浓度的升高。A23187处理前加入300nmol/L光激活Calphostin C不能降低MPF的活性,而A23187单独却可以引起MPF的活性降低。与对照组相比,差异不显著,p<0.05。

铅对大鼠神经肉瘤C_6细胞[Ca^(2+)]_i及内质网相关调节机制的影响

目的 :观察不同时间铅暴露后大鼠神经肉瘤 C6 细胞 [Ca2 +]i、内质网 Ca2 +- ATP酶、Na+,K+- ATP酶活性变化 ,探讨不同时间铅暴露对 [Ca2 +]i及内质网相关调节机制的影响。方法 :Wistar大鼠神经肉瘤 C6 细胞培养于含醋酸铅培养液中 ,分别于不同时间终止染铅 ,检测 [Ca2 +]i、内质网 Ca2 +- ATP酶、Na+,K+- ATP酶活性。结果 :( 1) 0 .2 μm ol/ L 染铅组 :[Ca2 +]i轻度升高 ,内质网 Ca2 +- ATP酶、Na+,K+- ATP酶活性缓慢增高 ,2 d达最高 (分别为未染铅前酶活性的 2 .9倍、5 .2倍 ) ;( 2 ) 1.0μmol/ L染铅组 :[Ca2 +]i 于染铅后 0 .5 h升至最高 ,以后逐渐降低 ,波动于 16 0～ 190 nm ol/ L 之间 ;内质网 Ca2 +- ATP酶、Na+,K+- ATP酶于染铅后 0 .5 h升至最高 (分别为未染铅前酶活性的 10 .8倍、19.8倍 ) ,两天后降至正常水平。结论 :铅可使 Wistar大鼠神经肉瘤 C6 细胞 [Ca2 +]i 及内质网Ca2 +- ATP酶、Na+,K+- ATP酶活性增高 ;内质网 Ca2 +- ATP酶、Na+,K+- ATP酶活性增高是急性铅暴露时维持[Ca2 +]i 相对稳定的重要机制。