Caveolin-1在血管生成中的作用

Caveolin-1是细胞膜表面内陷结构Caveolae的标志性蛋白,识别并与多种信号蛋白分子相作用,在内皮细胞内表达量较高,在血管内皮细胞增殖、迁移和分化过程中具有重要作用,在小鼠动物模型中对血管生成、肿瘤生长起抑制作用,有可能成为抑制肿瘤血管生成的靶蛋白。

SARS-CoV S蛋白表位的表达及鉴定

目的:制备SARS冠状病毒S蛋白串联表位重组蛋白,为SARS的防治提供新型抗原蛋白。方法:应用抗原表位分析软件分析S蛋白的表位。选取其中16个表位,设计并合成表位串联重组蛋白编码基因Z,构建其原核细胞表达重组体,在大肠杆菌BL21(DE3)表达该重组表位蛋白Z,应用Ni离子亲合层析法纯化重组蛋白Z做抗原,采用皮下注射法免疫新西兰白兔。斑点杂交法测定抗Z-血清中S蛋白的抗体,ELISA法检测Z蛋白的抗原性。结果:构建了S蛋白重组表位蛋白Z的原核表达体,在BL21菌中表达了Z蛋白,Z蛋白免疫新西兰白兔后获得了抗Z血清。斑点杂交分析显示,抗Z血清识别哺乳动物细胞中表达的S蛋白。ELISA检测结果显示,抗Z血清识别SARS冠状病毒抗原。结论:建立了制备SARS冠状病毒S蛋白重组表位蛋白的方法,为防治SARS提供了新型抗原蛋白Z。

caveolin-1与内皮细胞的细胞周期关系研究

目的:研究caveolin-1与内皮细胞增殖和细胞周期的关系。方法:以腺病毒为载体,在内皮细胞内高表达caveolin-1蛋白,以H3-胸腺嘧啶掺入法检测caveolin-1与内皮细胞增殖的关系,应用流式细胞仪检测caveolin-1对内皮细胞周期的影响。结果:高表达caveolin-1导致内皮细胞H3-胸腺嘧啶掺入率降低了67%(P<0.05),处于G0/G1期的内皮细胞百分比增加(P<0.05)。结论:caveolin-1通过抑制内皮细胞于G/G期来抑制内皮细胞增殖。

Caveolin-1对KDR信号通路的作用

目的:研究Caveolin-1对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体KDR、p42/44MAPK的作用。方法:以腺病毒为载体介导在内皮细胞中表达外源Caveolin-1,应用Western-blotting检测KDR、p42/44MAPK的磷酸化水平。结果:与对照组相比,感染腺病毒表达外源Caveolin-1蛋白的内皮细胞中KDR1054酪氨酸残基和p42/44MAPK磷酸化水平分别降低了42.3%和43.5%。结论:Caveolin-1蛋白抑制KDR信号通路,对内皮细胞增殖可能具有抑制作用。

Caveolin-1对内皮细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究Caveolin-1蛋白在内皮细胞增殖中的作用,其与Ras-p42/44MAPK细胞信号通路的关系。方法:以腺病毒介导在内皮细胞中表达外源Caveolin-1蛋白,分析其对内皮细胞增殖和p42/44MAPK分子磷酸化水平的影响。结果:感染腺病毒表达外源Caveolin-1蛋白的内皮细胞中,血管内皮生长因子(VEGF)诱导的3H-胸腺嘧啶掺入量降低了35%(n=3,P=0.009),p42/44MAPK分子磷酸化水平降低了47.6%。结论:Caveolin-1蛋白抑制p42/44MAPK分子磷酸化水平,抑制内皮细胞增殖。

SARS冠状病毒S蛋白抗原表位串联基因的设计和表达

目的:表达严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒S蛋白的抗原表位序列,为研制新型的SARS病毒疫苗提供新思路。方法:应用生物信息学分析软件分析SARS冠状病毒S蛋白的抗原表位序列,设计全新的抗原表位编码基因序列,构建表达载体并在大肠杆菌中表达该基因。结果:设计并合成了SARS冠状病毒S蛋白的抗原表位序列的新基因序列,在大肠杆菌中实现了该基因的高表达。结论:可以重新设计新基因产生新型候选重组疫苗。

HSV-gB、gD糖蛋白重组串联抗原表位蛋白的表达及鉴定

目的制备HSV-gB、gD蛋白串联表位重组蛋白,为单纯疱疹病毒(HSV)疫苗的研制提供新型抗原蛋白以及新的抗原制备方法。方法应用生物信息学软件laser gene DNASTAR分析HSV1-gB、gD和HSV2-gB、gD蛋白的抗原表位。选取9个表位,设计并合成表位串联重组蛋白编码基因X,构建其原核细胞表达重组体,在大肠杆菌BL21(DE3)表达该重组表位蛋白X,Western blot法(抗His标签)鉴定重组蛋白。结果构建了HSV-gB、gD蛋白串联表位重组蛋白X的原核表达体,在BL21菌中表达了X蛋白,Western blot法(抗His标签)鉴定了重组蛋白X。结论建立了制备HSV-gB、gD蛋白重组抗原表位蛋白的方法,为HSV疫苗的研制提供了可能的新型抗原蛋白。