中枢神经系统血管母细胞瘤临床病理特征

目的:探讨中枢神经系统血管母细胞瘤临床病理特征。方法:回顾性分析59例中枢神经系统血管母细胞瘤病例,分析其临床特点及组织形态学和免疫组织化学特征。结果:59例血管母细胞瘤病例中,男∶女为1.68∶1,平均年龄为45.5岁。52例(88.1%)发生于小脑。组织学特点:肿瘤与正常脑组织间界限清楚,由富于脂质的泡沫状间质细胞及丰富的血管构成。免疫组化结果显示:肿瘤的间质细胞对Vimentin、NSE及Inhibin-a等多呈阳性表达,而对CK、EMA、GFAP等多呈阴性表达。结论:血管母细胞瘤是少见的中枢神经系统肿瘤,组织形态多样,应注意与中枢神经系统其他肿瘤及转移性肾透明细胞癌等鉴别。

Rsf-1在星形细胞瘤中的表达及其与临床病理因素的关系

目的:星形细胞瘤是中枢神经系统最常见的神经上皮性肿瘤,高级别的星形细胞瘤呈浸润性生长并且预后不良,重塑因子-1(Rsf-1)是位于人类染色体11q13.5区域的RSF基因的表达产物,在多种恶性上皮性肿瘤中都有异常高表达的现象,并且与多种肿瘤的恶性进展及不良预后相关,本文旨在研究Rsf-1在星形细胞瘤中的表达及其与患者临床病理因素的关系。方法:选取2006年至2012年间星形细胞瘤术后石蜡标本130例,WHO组织学分级Ⅰ-Ⅳ级,通过免疫组织化学染色检测Rsf-1在星形细胞瘤中的表达水平。应用卡方检验统计Rsf-1的表达与患者临床病理因素的关系,Kaplan-Meier分析Rsf-1的表达与患者预后的关系。结果:Rsf-1在部分的星形细胞瘤中异常高表达(63/130),并且其高表达与肿瘤大小、WHO分级及Ki-67指数呈正相关(P<0.01),而与年龄、性别和肿瘤的发生部位没有明显关系(P>0.05),Kaplan-Meier曲线表明Rsf-1的高表达与星形细胞瘤患者不良预后呈正相关(P<0.001)。结论:Rsf-1的在星形细胞瘤中异常高表达,并且与肿瘤大小、WHO分级、Ki-67指数及不良预后等关系密切,Rsf-1可能在星形细胞瘤的发生发展中发挥作用。

hsa-miR-125a-5p通过上调Rock-1表达促进肺癌细胞侵袭

背景与目的MicroRNAs(miRNAs)是广泛存在于真核生物体中的内源性非编码的小分子RNA,通过与靶mRNA不完全互补连接的方式转录后调控靶基因的表达,影响了生物的许多复杂的生命过程。本研究探讨了hsa-miR-125a-5p促进肺癌细胞侵袭的作用机制。方法应用microRNA.org靶基因预测资源预测hsa-miR-125a-5p的靶基因及其结合位点,并进一步根据预测结果用RT-PCR和Western blot的方法检测了Rock-1的mRNA及蛋白的表达情况。用Rock-1抗体阻断的方法,检测转染正义的hsa-miR-125a-5p2’-O-甲基寡核苷酸后A549细胞侵袭能力的变化。结果转染正义的hsa-miR-125a-5p2’-O-甲基寡核苷酸36h后,A549细胞中Rock-1 mRNA和蛋白表达均增加,在转染反义的hsa-miR-125a-5p2’-O-甲基寡核苷酸的A549细胞中则减少。Transwell小室的结果显示,与未阻断组相比较,阻断Rock-1后,转染正义的hsa-miR-125a-5p2’-O-甲基寡核苷酸的A549细胞侵袭能力减弱。结论hsa-miR-125a-5p能够上调Rock-1的表达,并促进肺癌细胞侵袭。

HIF-1α和HIF-2α上调非小细胞肺癌中CCR7的表达

背景与目的CCR7与非小细胞肺癌的淋巴结转移密切相关,但CCR7的上调机制却不是很清楚。本研究通过观察趋化因子受体CCR7和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子2α(HIF-2α)在非小细胞肺癌组织中的表达及相互关系,探讨非小细胞肺癌CCR7上调机制。方法应用免疫组织化学染色(SP法)检测94例非小细胞肺癌组织中CCR7、HIF-1α和HIF-2α的表达,并联合运用RNAi技术沉默人肺腺癌A549细胞中HIF-1α、HIF-2α表达,采用RT-PCR和免疫荧光方法观察CCR7的变化情况,分析CCR7表达与HIF-1α、HIF-2α之间的关系。结果免疫组织化学结果显示:CCR7主要表达于癌细胞质和(或)胞膜,HIF-1α、HIF-2α主要表达于癌细胞核和(或)细胞质,非小细胞肺癌中CCR7、HIF-1α和HIF-2α的表达率分别为75.53%(71/94)、54.25%(51/94)和70.21%(66/94),χ2检验显示CCR7表达与非小细胞肺癌的临床病理分期(P<0.001)和淋巴结转移(P=0.001)有密切关系,而与年龄、性别、组织学类型无关(P>0.05)。此外,CCR7和HIF-1α、HIF-2α表达正相关(r=0.272,P<0.01)(r=0.225,P<0.05)。向A549细胞中转染HIF-1α、HIF-2α特异性siRNA,分别抑制HIF-1α、HIF-2α表达后发现CCR7的mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05)。结论CCR7表达与非小细胞肺癌侵袭转移密切相关,CCR7在NSCLC中过表达受HIF-1α和HIF-2α调控。

缝隙连接蛋白Connexin 26在乳腺导管上皮癌变中的调节作用

目的研究缝隙连接蛋白Connexin 26(Cx26)与乳腺癌发生的相关性。方法选取手术切除的人乳腺导管内癌和浸润性导管癌标本88例,应用免疫组化S-P法及Western blot研究癌组织和癌旁组织中Cx26蛋白表达,统计学分析癌组织和癌旁组织中Cx 26蛋白表达的差异,探讨Cx26表达与乳腺癌发生的相关性。结果癌旁组织中Cx26蛋白弥散于细胞浆中,在癌组织中Cx26蛋白明显减弱或消失,卡方检验表明Cx26蛋白在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达差异具有统计学意义(P<0.05),Western blot结果亦清楚显示在癌组织中Cx26蛋白表达减弱(P<0.001)。结论Cx 6蛋白减弱或缺失参与调控乳腺导管癌的发生过程。

酵母双杂交技术筛选肺癌组织中MCM7蛋白结合蛋白

背景与目的微小染色体维持蛋白(mini-chromosome maintenance proteins,MCM)MCM7为MCM复合体成员之一,在启动DNA复制、合成中起关键作用,但对能够与其结合的蛋白所知甚少。本研究应用酵母双杂交方法筛选肺癌组织中MCM7蛋白的结合蛋白。方法构建MCM7全长cDNA-pGBKT7质粒,与含肺癌组织cDNA文库-pACT2质粒转化酵母AH109,在涂有X-a-gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长,挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠杆菌提取质粒DNA后测序,进行生物信息学分析。结果筛选出11种与MCM7蛋白特异性相互作用的蛋白,其中细胞骨架蛋白5种,各种酶、激酶以及相关受体6种。结论克隆到的基因对进一步研究MCM7蛋白的功能有一定提示作用。

MMP-2 VEGF在肺腺癌细胞中的表达及其意义

目的研究探讨基质金属蛋白酶2（MMP-2）及血管内皮生长因子（VEGF）在胸腔积液、痰液中肺腺癌细胞的不同表达及二者在肺癌细胞侵袭转移过程中的相互关系。方法选择胸腔积液、痰液共计264例癌性及异型增生细胞标本经免疫细胞化学方法分别检测MMP-2 VEGF的表达情况。结果免疫细胞化学结果显示：MMP-2在胸腔积液中腺癌细胞、异型增生上皮细胞的表达率分别为71.7%（99/138）、16.7%（6/36）,在胸膜炎和结核病变典型良性胸腔积液增生上皮细胞中不表达;在痰腺癌细胞中的表达率为39.1%（27/69）,统计结果显示MMP-2在恶性胸腔积液腺癌细胞中的表达率明显高于在异型增生的上皮、增生的上皮及痰腺癌细胞的表达率（P均〈0.05）。VEGF在胸腔积液中腺癌细胞、异型增生上皮细胞的表达率分别为89.1%（123/138）、33.3%（12/36）,在胸膜炎和结核病变典型良性胸腔积液增生上皮细胞中不表达;在痰腺癌细胞中的表达率为47.8%（33/69）,VEGF在恶性胸腔积液腺癌细胞中表达率明显高于在异型增生的上皮细胞、增生的上皮细胞及痰腺癌细胞的表达率（P均〈0.05）,且MMP-2同VEGF总阳性表达率之间成正相关（r=0.867,P=0.049）。结果 MMP-2 VEGF在胸水腺癌细胞中高表达,可能与肺腺癌的转移、侵袭有关;两者联合做免疫细胞化学检查对肺腺癌细胞病理诊断有辅助意义。

缺氧对肺癌细胞CCR7表达及其侵袭力的影响

背景与目的缺氧可通过多种机制促进肿瘤的侵袭和转移,但缺氧与CCR7的关系目前未见报道。本研究探讨缺氧对人肺癌细胞趋化因子受体CCR7(Chemokine receptor7)表达及其侵袭能力的影响。方法将A549细胞分为常氧组和缺氧组,分别置于常氧(37℃,5%CO2,21%O2)和低氧(37℃,5%CO2,1%O2)条件下培养4h、12h、24h,应用RT-PCR和Westernblotting方法对CCR7mRNA和蛋白表达水平进行检测;同时采用Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力的变化。结果RT-PCR和Western blotting结果显示:人肺腺癌A549细胞有CCR7表达,随着培养时间的延长,常氧及缺氧状态下A549细胞CCR7相对表达量依次升高,此外,不同时间点的常氧组与缺氧组CCR7mRNA和蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.01);Transwell侵袭实验结果表明,缺氧组侵袭细胞数与常氧组相比明显增加,差异有统计学意义(t=0.006,P<0.01),加入CCR7抗体后细胞侵袭力降低(t=0.09,P<0.01)。结论缺氧可显著上调A549细胞CCR7表达及其侵袭能力,其侵袭力的增加可能与CCR7表达水平增高有密切关系。

RhoC及其调节因子RhoGDIa在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

背景与目的RhoC在许多癌组织中过表达,而且与肿瘤的转移密切相关。RhoGDIα(Rho GDP dissociation inhibitor)被认为是Rho的负性调节因子,但目前其在肿瘤中的研究有限,而且在不同肿瘤中结果不一。本研究旨在探讨RhoC及其调节因子RhoGDIa在非小细胞肺癌的表达、二者间的关系及临床意义。方法应用免疫组织化学、Western blot、RT-PCR分别检测100例石蜡包埋肺癌组织、60例新鲜肺癌组织、正常支气管上皮细胞、肺癌细胞系中RhoC、RhoGDIa蛋白和mRNA的表达;分析其与临床病理参数间的关系。结果RhoC、RhoGDIa蛋白和mRNA在非小细胞肺癌组织和肺癌细胞系中的表达均明显高于相应的正常肺组织及正常支气管上皮细胞。在肺巨细胞癌高侵袭转移能力亚型BE1中,RhoC和RhoGDIa表达高于低侵袭转移能力亚型LH7。RhoC和RhoGDIa表达与淋巴结转移和临床分期有关。RhoC、RhoGDIα的过表达与患者的生存率低相关,在一定程度上提示患者的不良预后。RhoC的表达与RhoGDIα的表达正相关。结论RhoC、RhoGDIa可能参与肺癌的发生、发展。二者的表达与肺癌细胞的转移相关,可分别作为影响肺癌预后的独立风险因素。

肝癌细胞中Connexin32蛋白可调控表达亚克隆的建立

目的:利用Tet-off基因表达体系建立人间隙连接蛋白Connexin32基因可调控表达的肝癌细胞系,为探讨Connexin32蛋白表达与肝癌细胞的增殖、运动和侵袭能力的相关性奠定基础。方法:利用基因重组方法建立人Connexin32cDNA的逆病毒表达载体pRevTRE-Cx32;利用逆病毒感染法将Connexin32表达载体和调控质粒pRevTet-off转入人肝癌细胞系HuH7中,筛选出稳定整合了两种载体的细胞克隆;western-blot法检测Connexin32蛋白表达的诱导率。结果:建立了可以通过向细胞培养液中添加或去除Doxycycline调控Connexin32蛋白表达的肝癌细胞HuH7亚克隆,western-blot结果显示当从细胞培养液中去除Doxycycline后,Connexin32表达明显升高,呈现4倍左右的诱导率。结论:成功建立了Connexin32蛋白可诱导表达的肝癌细胞HuH7 Tet-offCx32亚克隆。

MicroRNA-34a对多种肿瘤细胞迁移的影响及其作用机制探讨

MicroRNA-34a是p53信号通路的核心成分,在多种肿瘤中表达下调,被认为是一种抑癌的microRNA,并且与肿瘤干细胞有着密切的联系。MicroRNA-34a可直接抑制多种信息调控因子、细胞周期蛋白的表达,进而抑制细胞增殖、抑制细胞迁移和侵袭、促进细胞衰老和凋亡,从而达到抑癌效果。细胞迁移是肿瘤细胞侵袭和转移的先决条件,是肿瘤发生发展的重要过程。MicroRNA-34a的低表达常见于乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、胃癌、结肠癌、骨癌等,这种低表达往往与细胞迁移能力增强有关,最终加剧肿瘤转移扩散。本文总结了近期关于microRNA-34a对不同种类肿瘤细胞迁移的影响及其作用机制,并进行了分析与归纳。

肺癌干细胞研究进展

肺癌是当今世界上对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一,肺癌的发病率和死亡率近年来呈明显上升趋势,严重威胁着人类健康。在我国的许多省市和地区,肺癌的发病与死亡近十年来一直居恶性肿瘤之首位。虽然临床上已经联合应用手术、化疗、放疗等治疗方案，但肺癌患者五年生存率仍不高，寻找新的治疗途径可能有利于肺癌的预后。

慢性髓性白血病和急性淋巴细胞白血病细胞中Wnt信号通路活性的差异

目的:探讨慢性髓性白血病(CML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞中Wnt信号通路活性是否存在差异。方法:利用慢病毒基因转染法在经BCR-ABL融合基因诱导形成的CML和ALL细胞中建立Wnt信号通路报告系统BAT-RED,检测2种白血病细胞中Wnt信号通路活性;PCR方法检测2种细胞中BAT-RED基因整合情况;通过向培养细胞中添加氯化锂,人为增强Wnt信号活性,反向验证Wnt信号通路活性在2种细胞中存在差异。结果:PCR结果显示2种白血病细胞都稳定整合了Wnt信号通路报告基因BAT-RED,在42%(188/448)的慢性粒细胞白血病细胞中可以检测到Wnt信号通路被激活,而ALL细胞仅散在少数细胞中可以检测到Wnt信号通路报告基因BAT-RED被激活;添加氯化锂后,ALL细胞中Wnt信号通路活性增强。结论:CML细胞中Wnt通路活性明显高于ALL细胞,提示Wnt信号通路在2种类型白血病细胞的增殖和演进过程中具有不同作用。

间隙连接蛋白Connexin32对肝癌侵袭和转移能力的影响

目的:探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32对肝癌细胞体内侵袭和转移能力的影响。方法:利用可以通过增减细胞外环境中Doxycycline调控Connexin32蛋白表达的肝癌细胞HuH7Tet-off Cx32亚克隆,将之原位移植到重度联合免疫缺陷鼠肝脏浆膜下,通过饮用水中添加(去除)Doxy-cycline调控动物体内Connexin32的表达,8周后处死小鼠,观察肿瘤形成及转移情况,蛋白质印迹法及免疫组织化学方法检测其与对照组的Connexin32蛋白表达情况。结果:移植HuH7Tet-off Cx32细胞的小鼠,在饮用水中去除Doxycycline诱发Connexin32高表达条件下,形成明显的肝内转移灶和腹膜转移灶;而饮用水中添加了Doxycycline的小鼠没有发现明显的转移灶形成。免疫组化证实,高表达的Connexin32蛋白定位于细胞质。蛋白质印迹法结果显示,Doxycycline在小鼠体内呈现较好的诱导性。结论:细胞质内异位蓄积的Connexin32蛋白明显增强肝癌细胞的体内侵袭和转移能力。