细胞浆内Connexin32蛋白增强肝癌细胞Li-7的运动和侵袭能力

目的:探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32对肝癌细胞运动和侵袭能力的影响。方法:利用逆病毒感染的方法在肝癌细胞系Li-7中建立Connexin32蛋白表达可通过doxycycline调控的Li-7 Tet-off Cx32稳定克隆,运用体外transwell migrationandinvasion assay方法验证Connexin32表达与肝癌细胞运动和侵袭能力的相关性。结果:建立稳定整合了Connexin32 cDNA和调控序列Tet-off的肝癌细胞Li-7亚克隆,Western-blot结果显示外源性Connexin32蛋白表达于细胞浆中,亚细胞定位分析证实Connexin32蛋白定位于高尔基复合体内,此细胞浆内Connexin32蛋白过表达显著增强肝癌细胞的体外运动和侵袭能力。结论:肝癌细胞浆内异位表达的Connexin32蛋白发挥促进肿瘤进展的作用。

非小细胞肺癌中过表达RNF146对Axin和β-catenin表达和定位的影响

目的:观察E3泛素连接酶RNF146表达对Axin和β-catenin蛋白表达的影响,探讨RNF146与Wnt/β-catenin信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学EnVision法检测133例NSCLC患者肺癌中RNF146、Axin和β-catenin的表达。构建RNF146过表达质粒,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和细胞免疫荧光方法研究RNF146在肺癌细胞株A549和LTE中过表达对Axin和β-catenin表达及定位的影响。结果:NSCLC患者肺癌组织中RNF146高表达72例(54.1%)中49例(68.1%)显示Axin表达减弱或缺失,19例(26.4%)出现β-catenin细胞核阳性表达;RNF146低表达61例(45.9%)中只有26例(42.6%)显示Axin表达减弱或缺失,7(11.5%)例出现β-catenin细胞核阳性。RNF146与Axin的表达呈明显的负相关(P=0.003),与β-catenin的细胞核表达呈正相关(P=0.047)。肺癌细胞系中过表达RNF146能够下调Axin蛋白的表达,诱导β-catenin蛋白表达和核内分布,但对Axin和β-catenin mRNA水平没有影响。结论:RNF146可能通过Wnt/β-catenin通路参与肺癌的发生发展。

shRNA沉默环指蛋白146基因对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及其相关蛋白表达的影响

目的:shRNA沉默环指蛋白146(RNF146)基因,观察非小细胞肺癌细胞中RNF146沉默对肺癌细胞迁移和侵袭及其相关蛋白表达的影响。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法用于筛选RNF146高表达肺癌细胞系。构建shRNA-RNF146真核表达载体,瞬时转染A549和H1299肺癌细胞,Western blot检测转染效率。划痕实验评价肺癌细胞体外迁移能力;Buyden小室实验检测肺癌细胞体外侵袭能力。Western blot检测肺癌细胞中迁移和侵袭相关蛋白的表达。结果:RT-PCR和Western blot方法筛选RNF146高表达肺癌细胞系,显示A549和H1299细胞中RNF146蛋白均高于其它细胞系。shRNA-RNF146转染A549和H1299细胞系后,划痕实验显示转染组细胞24小时迁移率明显低于空载体组和未转染组(P<0.01)。Buyden小室实验结果表明转染组比空载体组和未转染组穿膜细胞数目明显减少(P<0.05)。Western blot检测与细胞迁移和侵袭相关的调控蛋白(MMP2、MMP7、MMP9、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、TIMP-1等)的表达情况,结果显示干扰RNF146后A549细胞中MMP2和MMP7表达明显减少,而MMP9、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、TIMP-1等蛋白的表达变化不明显。结论:RNF146可能通过调控MMP2和MMP7的蛋白水平促进肺癌细胞迁移和侵袭。