大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养及其生物学行为初步探讨

本文旨在探讨建立稳定的大鼠原代脑微血管内皮细胞的培养方法,并对其血脑屏障特性进行初步研究。通过匀浆、葡聚糖高速梯度离心提取大鼠脑皮层微血管段,用胶原酶消化后,在37℃,5%CO2孵箱中进行原代及传代细胞培养,以跨内皮阻抗值分析其血脑屏障特性随传代次数的改变。结果证明:原代培养后7～10d沿微血管段生成单层"铺路石"样细胞,经VIII因子证实95%以上的培养细胞是血管内皮细胞,通过传代可以进一步纯化,得到稳定的脑微血管内皮细胞系,原代培养的脑微血管内皮细胞表现出很强的屏障特性,与内皮细胞株之间有显著差异,随着传代次数的增加脑微血管内皮细胞的跨内皮阻抗减弱。以上结果表明,采用匀浆、梯度离心、胶原酶消化是获取大鼠脑微血管内皮细胞稳定的方法,原代培养的脑微血管内皮细胞是研究血脑屏障的最佳技术手段。

神经胶质瘤nNOS和cGMP表达水平与其病理级别相关关系的研究

目的：分析神经胶质瘤中神经元型一氧化氮合酶（nNOS）和cGMP表达水平与病理级别的相关关系。方法：免疫组化法和Westem blot法测定标本中nNOS的表达水平；放射免疫法测定相同组织中cGMP的表达水平。结果：HE染色显示，36例神经胶质瘤中Ⅰ级为11例，Ⅱ级为14例，Ⅲ级为11例。免疫组化结果显示，在病理级别为I、Ⅱ和Ⅲ级的神经胶质瘤中，nNOS的平均光密度值（OD）分别为0．1717±0．013 6、0．2744±0．0150和0．3684±0．015 0，Ⅰ、Ⅱ级比较及Ⅱ、Ⅲ级比较，差异均有统计学意义，P值均为0．000；神经胶质瘤中nNOS表达水平与其病理级别Ⅰ～Ⅲ级显著正相关，r=0．984，P=0．000，呈Ⅰ〈Ⅱ〈Ⅲ级。Westem blot结果显示，在病理级别为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的神经胶质瘤中，nNOS与β-actin的整合光密度值（IDV）之比分别为1．0900±0．0347、1．2242±0．0292和1．5398±0．0433，Ⅰ、Ⅱ级比较及Ⅱ、Ⅲ级比较，差异均有统计学意义，P值均为0．000；神经胶质瘤中nNOS表达水平与其病理级别Ⅰ～Ⅲ级显著正相关，r=0．953，P=0．000，呈Ⅰ〈Ⅱ〈Ⅲ级。放射免疫结果显示，在病理级别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的神经胶质瘤中，cGMP的浓度分别为（0．0034±4-0．0009）、（0．0063±0．0013）和（0．0132±0．0049）pmol／mg，Ⅰ、Ⅱ级比较及Ⅱ、Ⅲ级比较，组间差异均有统计学意义，P值分别为0．017和0．000；神经胶质瘤中以MP表达水平与其病理级别Ⅰ～Ⅲ级显著正相关，r=0．796，P=0．000，呈Ⅰ〈Ⅱ〈Ⅲ级。结论：神经胶质瘤中nNOS和cGMP表达水平与其病理级别Ⅰ～Ⅲ级显著正相关，提示利用缓激肽（bradykinin，BK）及其类似物开放血肿瘤屏障的疗效差异可能与两者表达水平有关。

神经生长因子与降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western印迹法和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组手术侧顶叶皮质CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组;NGF组和CGRP组顶叶皮质CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组;NGF组和CGRP联合应用时CREB与p-CREB的表达更高。结论:NGF与CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,NGF和CGRP有协同作用。

miR-29s家族对人脑胶质瘤干细胞生物学行为的影响

目的研究miR-29s家族在胶质瘤干细胞(GSCs)中的表达水平,以及对GSCs生物学行为的影响是否存在差异。方法 8例胶质瘤患者术中取肿瘤标本,制备成GSCs。应用实时PCR方法检测miR-29a、miR-29b和miR-29c的内源性表达。CCK-8方法检测GSCs增殖,Transwell小室方法检测GSCs的迁移侵袭,流式细胞仪检测GSCs的凋亡。结果 miR-29a、miR-29b和miR-29c在GSCs中低表达,外源性提高表达量后,可以抑制GSCs的增殖、迁移和侵袭能力,促进GSCs的凋亡。结论 miR-29s家族在GSCs中起抑癌基因的作用,家族成员中以miR-29a的抑癌能力最强且起到主导作用。

哮喘时豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位 Trk A 的表达以及神经生长因子对其影响

目的：探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制。方法：应用免疫组织化学方法检测豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位 NGF 高亲和力受体酪氨酸激酶 A(TrkA),用 Western blot 蛋白印迹方法检测豚鼠肺、脊神经节和脊髓背角 NGF 和 TrkA 的表达。结果：(1)与对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓背角内 TrkA 阳性反应产物的平均灰度值均明显降低；哮喘+NGF 抗体组则明显高于哮喘组。(2)哮喘组豚鼠肺、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓样品中 TrkA 或 NGF 目标带的 IDV 与内参照 IDV 的比值均明显升高,而哮喘+NGF 抗体组则明显低于哮喘组。结论：NGF 可上调 TrkA 的表达,TrkA 介导的细胞内信号传导系统可能是 NGF 参与哮喘发病的主要途径之一。

降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fos mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fosmRNA及蛋白表达的影响。方法:在脑缺血后再灌注模型上,应用原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法检测c-fosmRNA及蛋白表达。结果:缺血组大鼠纹皮质较假手术组c-fosmRNA和蛋白表达非常显著增加;CGRP组和NGF组c-fosmRNA和蛋白表达分别显著弱于缺血组;CGRP和NGF合用组c-fosmRNA和蛋白表达非常明显弱于缺血组、CGRP组和NGF组。结论:CGRP和NGF分别抑制脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fosmRNA及蛋白表达,联合应用则能显著抑制脑缺血后再灌注大鼠纹皮质cfosmRNA及蛋白表达,二者对保护缺血神经元可能有协同作用。

miR-194对人脑胶质瘤U87细胞恶性生物学行为的影响

目的研究miR-194在人脑胶质瘤组织及人U87细胞中表达,以及其对U87细胞增殖、迁移、侵袭能力和凋亡率的影响。方法应用实时荧光定量PCR方法分别检测23例人脑胶质瘤组织及5例对照脑组织(脑出血及外伤脑组织)中miR-194的表达水平;将miR-194激动剂、拮抗剂及其各自的空白对照分别转染至U87细胞中,应用CCK-8方法检测转染miR-194后U87细胞增殖能力;Transwell实验检测U87细胞迁移、侵袭能力。流式细胞技术检测转染miR-194后细胞凋亡率。结果与对照组比较,人脑胶质瘤组织中miR-194表达量显著下调(P<0.05);过表达miR-194后能够明显抑制U87细胞增殖、迁移及侵袭能力,并显著促进U87细胞凋亡。结论 miR-194在胶质瘤组织中表达下调,过表达miR-194能够显著抑制U87细胞增殖、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡。

神经导航辅助下经单鼻孔-蝶窦入路切除复发垂体腺瘤的疗效分析

回顾性分析中国医科大学附属盛京医院神经外科2013年9月至2016年8月收治的17例复发垂体腺瘤病例,所有病例均在神经导航辅助下经单鼻孔-蝶窦入路切除肿瘤。复发垂体腺瘤再次经蝶入路定位困难,解剖结构混乱,应用神经导航技术可有效辅助术者精确定位肿瘤位置,提高肿瘤全切率和手术安全性。

LBL与PBL教学模式在胸外科医学教学中的应用效果对比

目的对比研究LBL与PBL教学模式在胸外科医学教学中的应用效果。方法选取胸外科医学生98名作为研究对象,将其随机分为两组,每组均为49名,A组学生采用LBL模式教学,B组学生采用PBL模式教学,在教学内容完成后分别对两组学生的考核成绩进行对比,同时,通过自拟调查问卷调查两组学生对不同教学模式的满意度。结果教学内容完成后,B组学生的理论知识、操作技能考核得分及其总分均显著高于A组学生,同时,其对各项满意度评价指标的调查结果比较也有B组优于A组的情况,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在胸外科医学教学中应用PBL模式更有利于激发学生的学习兴趣和主动性,无论是理论知识的学习效果还是实践操作能力的培养效果都更好,值得推广应用。

神经生长因子对哮喘豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2表达的影响

目的 探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在哮喘豚鼠内脏感觉传入部位的表达及神经生长因子（NGF）对MMP-2的调节作用。方法 应用免疫组织化学方法检测豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2免疫反应的变化。用Western blot蛋白印迹方法检测豚鼠C7～T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和MMP-2的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。结果 ①免疫组织化学结果显示：豚鼠C7～T5段脊神经节和相应节段脊髓背角内MMP-2阳性免疫反应产物的平均灰度值（0-深色，255-浅色），生理盐水组（175．50±4．67、166．47±6．20）与单纯致敏组（172．63±9．51、165．20±5．14）比较没有显著差异（P〉0．05）；哮喘组（139．87±4．88、125．93±4．49）明显低于生理盐水组和单纯致敏组（P〈0．01）；哮喘＋NGF抗体组（鼻腔吸入NGF抗体，169．73±6．24、152．37±8．67）则明显高于哮喘组（P〈0．01）。②Western blot结果显示：与生理盐水组和单纯致敏组比较，哮喘组豚鼠C7-T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中MMP-2和NGF阳性产物的IDV（Integrated Density Value）与β-actin IDV的比值均明显升高（P〈0．01），而哮喘＋NGF抗体组则明显低于哮喘组（P〈0．01），表明NGF可上调豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2的表达。结论 C 7～T5段脊神经节以及相应节段脊髓背角内的MMP-2可能也参与哮喘的发病过程，NGF诱发MMP-2的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一，NGF抗体抑制哮喘时MMP-2的表达有可能廷缓气道重塑的发生，可能是治疗哮喘的新途径。

神经胶质瘤缓激肽B2受体和nNOS表达水平与胶质瘤病理级别相关关系的研究

目的分析神经胶质瘤缓激肽B2受体和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达水平与胶质瘤病理级别的相关关系。方法HE染色进行脑肿瘤的病理诊断及分级,免疫组化法测定不同病理级别神经胶质瘤缓激肽B2受体和nNOS的表达水平。结果神经胶质瘤B2受体和nNOS表达水平均与胶质瘤病理级别呈显著正相关,各病理级别神经胶质瘤B2受体和nNOS的表达水平均为:Ⅰ级(Ⅱ级(Ⅲ级。结论神经胶质瘤B2受体和nNOS表达水平均随着其病理级别的增加而升高,提示二者可作胶质瘤病理分级的标示物。

神经生长因子对实验性哮喘豚鼠降钙素基因相关肽的调节作用

目的探讨实验性哮喘时神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对降钙素基因相关肽(calcitoningenerelatedpeptide,CGRP)的调节机制。方法应用放射免疫分析方法检测卵蛋白致敏致喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位CGRP含量的变化。结果哮喘组豚鼠气管、支气管、肺、C7～T5段脊神经节和相应节段脊髓后角、结状神经节及孤束核区CGRP含量(pg/g)分别为71.72±17.82,75.56±19.23,82.85±23.33,83.83±21.29,74.47±22.25,77.65±20.21和69.95±12.27,显著高于生理盐水对照组(48.06±12.32,53.36±15.22,62.39±20.25,67.76±20.29,60.63±14.45,65.54±17.27,59.33±21.22),差异有显著性意义(P<0.01)。在哮喘+NGF抗体组,上述部位内CGRP含量(pg/g)分别为35.25±8.76,42.26±10.96,58.89±18.83,62.67±22.24,56.55±16.69,60.34±17.97和54.46±16.62,明显低于哮喘组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论实验性哮喘时NGF可上调下呼吸道和感觉神经节等内脏感觉传入部位的CGRP水平,两者可能参与支气管哮喘的发病过程。

BLOOM立体教学体系在神经外科学临床教学中的应用研究

目的探讨BLOOM立体教学体系在神经外科学的临床教学中的应用效果。方法选取在中国医科大学附属盛京医院神经外科进行神经外科学临床实习的学生100名,随机分为两组,分别接受传统教学模式和BLOOM立体教学体系,并在学习任务完成后,对两组学生的理论知识掌握和临床实践综合能力进行测试和对比分析。结果 BLOOM组学生的期末考试的平均成绩高于传统教学组学生,而且BLOOM组学生的临床实践综合能力更好,具备更强的临床实践操作技能。结论 "BLOOM"立体教学体系能够全方位地提升临床医学专业学生的综合素质,显著改善神经外科学的临床教学的效果。

神经胶质瘤中缓激肽B_(2)受体的表达水平与病理级别的相关性

目的分析神经胶质瘤中缓激肽B2受体表达水平与病理分级的相关关系,为缓激肽及其类似物的临床应用提供实验依据.方法采用神经胶质瘤患者术后标本,用H&E染色进行神经胶质瘤的病理诊断及分级,用免疫组化法和Western Blot法测定不同病理分级的神经胶质瘤中缓激肽B2受体的表达水平.结果H&E染色显示26例神经胶质瘤中Ⅰ级为9例,Ⅱ级为9例,Ⅲ级为8例,Ⅳ级为0例.胶质瘤边缘水肿带不表达缓激肽B2受体,B2受体位于胶质瘤细胞.Western Blot结果显示在三组不同病理分级的神经胶质瘤中,B2受体表达水平为Ⅰ级与Ⅱ级(39480.88±5119.96对51354.25±6168.77,n=8,t=2.447,P＜0.05),Ⅰ级与Ⅲ级(39480.88±5119.96对73032.13±8802.71,n=8,t=7.710,P＜0.001),Ⅱ级与Ⅲ级(51354.25±6168.77对73032.13±8802.71,n=8,t=5.704,P＜0.001);神经胶质瘤中缓激肽B2受体表达水平与其病理分级Ⅰ级～Ⅲ级呈显著正相关(r=0.895,P＜0.001),呈Ⅰ级＜Ⅱ级＜Ⅲ级状况.免疫组化法显示在三组不同病理分级的神经胶质瘤中,B2受体阳性区域面积占切片面积的百分比值为Ⅰ级与Ⅱ级(3.54%±1.51%对8.47%±3.45%,n=8,t=3.698,P＜0.01),Ⅰ级与Ⅲ级(3.54%±1.51%对15.94%±1.68%,n=8,t=15.562,P＜0.001),Ⅱ级与Ⅲ级(8.47%±3.45%对15.94%±1.68%,n=8,t=5.505,P＜0.001);神经胶质瘤中缓激肽B2受体阳性区域面积占切片面积的百分比值与其病理分级Ⅰ级～Ⅲ级呈显著正相关(r=0.878,P＜0.001),呈Ⅰ级＜Ⅱ级＜Ⅲ级状况.结论神经胶质瘤B2受体表达水平与其病理分级Ⅰ级～Ⅲ级呈显著正相关,提示利用缓激肽及其类似物开放血肿瘤屏障的疗效差异可能与B2受体表达水平有关.

反转课堂结合PBL在神经系统整合课程教学中的应用

目的本研究将反转课堂与以问题为基础的学习(PBL)相结合,研究其在神经系统整合课程的教学中的效果。方法随机选择两个大班的临床医学专业的学生,分别通过传统的教学模式和反转课堂结合PBL教学模式接受神经系统整合课程的教学。通过问卷调查的方式了解学生的教学模式的满意度,并对比两组学生在期末考试中的成绩。结果与传统教学方法相比,学生对反转课堂结合PBL的教学方法满意度更高。而且接受反转课堂结合PBL教学法的学生的成绩更好。结论反转课堂结合PBL教学法能够激发学生的求知欲望,提高自主学习能力,显著提高神经系统整合课程的教学效果和效率。

案例教学法在神经整合课程教学中的应用

目的对比研究传统的以教师讲授为基础的教学法(LBL)与案例教学法(CMT)在神经整合课程教学中的应用效果。方法针对神经整合课程,选取临床医学专业的学生作为研究对象,将其随机分为两组,分别采用LBL及CMT教学法,在课程结束后对两组学生的考核成绩进行对比,并调查两组学生对不同教学模式的满意度。结果与LBL组相比,CMT组学生的考试成绩提高,差异具有统计学意义(P<0.05),且CMT组学生对各项满意度评价指标的调查结果也均优于LBL组学生。结论在神经整合课程教学中,应用CMT教学法既能够提高学生学习效果,又有助于培养学生临床诊治能力。

CGRP和NGF对脑局部缺血再灌注大鼠脑组织神经元凋亡及PKCmRNA表达的调节作用

目的研究大鼠脑缺血再灌注后蛋白激酶C信使RNA(PKCmRNA)的表达,探讨降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对脑组织缺血再灌注的保护作用及机制。方法采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型,采用TUNEL法、原位杂交方法及显微图像分析检测海马及皮质内神经元凋亡和PKCmRNA的表达。结果大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数及PKCmRNA反应产物较正常组增多(P<0.05),而注射CGRP或NGF后神经元凋亡数及PKCmRNA反应产物明显低于缺血再灌注组(P<0.01),二者联合应用效果更加显著(P<0.05)。结论CGRP和NGF抑制缺血神经元凋亡,参与PKCmRNA的调节,二者对缺血神经元有协同修复作用。

神经营养因子4/5的研究进展

神经营养因子 - 4/ 5属于神经营养因子家族 ,对神经元的生长、分化有促进作用。本文总结了近些年来NT 4/ 5的研究进展 ,包括NT 4/ 5的分子结构、分布、基因和受体 ,对前后角神经元的分化和存活及对小胶质细胞的调节作用 。

神经生长因子对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质tau蛋白磷酸化的影响

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western Blotting和图像分析方法检测大鼠缺血侧顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达。结果缺血再灌注组顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白表达比假手术组显著升高(P<0.05);NGF组大鼠顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平显著低于缺血再灌注组和高于假手术组,NGF组总tau表达也下降但仍高于假手术组(P<0.05)。结论NGF明显减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质tau蛋白磷酸化程度,NGF可能通过降低tau蛋白磷酸化水平对缺血神经元起保护作用。

神经生长因子与降钙素基因相关肽减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化

为探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western Blotting和图像分析方法检测大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达,以及NGF与CGRP对tau蛋白过度磷酸化的影响。结果显示:缺血再灌注组同侧海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白明显升高(P<0.05);NGF组及CGRP组大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平明显低于缺血再灌注组,总tau也下降(P<0.05);NGF与CGRP合用组海马tau蛋白磷酸化水平进一步降低,分别低于NGF组和CGRP组(P<0.05)。以上结果表明NGF及CGRP明显减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化程度,二者合用作用更强,降低缺血神经元tau蛋白磷酸化水平可能对缺血神经元起保护作用。