实验室超纯水机的规范应用与维护技术

目的:探索实验室超纯水机的规范操作与保养措施。方法:在总结超纯水机应用实践的基础上,研究超纯水机集成过滤、超滤、离子交换及微滤等技术的原理与操作保养的相互关系,完善必要的配套设施,制定操作流程规范、质量控制和保养措施。结果:超纯水机的规范操作降低了实验室超纯水机的故障发生率,保证产水质量,纯水柱的更新周期延长,节省资金。结论:规范超纯水机的应用及保障合格水质的提供,需在掌握膜分离等技术原理的基础上,严格执行仪器技术操作流程和日常与定期维护措施,实施全技术流程的监测与管理。

医学实验室中离心机的应用与技术保障

目的:规范医学实验室离心技术的应用与仪器维护。方法:正确选择与应用离心技术,掌握相对离心力(RCF)、S值及K值等常用离心参数的运用与计算方法,合理配置离心转头与离心容器,根据材质的理化耐受性选用和处理离心容器,制定基于风险控制的操作规范、监测、维护、保养以及生物安全等系列措施,建立实验室离心机技术保障。结果:通过规范医学实验室离心技术的应用,使实验室离心机的故障率降低,工作效率得到提升。结论:保障离心机正常使用,必须坚持从实验应用到工程维护的全技术流程管理。

手背部皮肤纹理老化定量评价指标研究

目的:开展手背部皮肤老化形态学定量评价指标的研究,为客观评价皮肤老化提供手段。方法:利用图像分析软件测量个体手背部皮肤形态学的数字成像资料。分析各测量指标与Beagl ey-Gi bson手部老化分级标准的一致性。结果:手部皮肤纹理的最大纹理间距、纹理间距均值、网格数、平均角度个数、最大角度和角度差值与年龄的相关性较强。其中网格数和平均角度个数随老化级别的增加而减小,其他指标随老化级别的增加而增加。结论:手部皮肤纹理的网格个数,纹理间距,角度个数及角度值能够较客观地应用于皮肤老化的评价。

脆性组氨酸三联体基因与脊索瘤的相关性研究

目的:脆性组氨酸三联体基因(FHIT)是第一个与肿瘤相关的包含脆性位点的基因,本研究探索FHIT基因改变与脊索瘤发生的关系。方法:应用RT-PCR方法,对18例脊索瘤患者的肿瘤和瘤旁正常组织的FHIT基因转录本进行检测。结果:11例(61.1%)存在FHIT转录本缺失,缺失片段范围100～500bp,其中1例同时含有正常和异常转录本。对其中2例进行测序,证实1例转录本缺失全部E5～E7外显子及部分E8外显子和部分E10外显子等两个片段;另1例转录本缺失全部E5～E9外显子及绝大部分E10外显子。结论:FHIT基因缺失是脊索瘤发生的重要事件之一,与脊索瘤的发生机制有关。

肿瘤细胞线粒体靶向表达Dm-dNK基因的实验研究

目的:探讨线粒体基质内核苷酸类似物的磷酸化水平,及Dm-dNK作为新的自杀基因杀伤肿瘤细胞的效果。方法:克隆线粒体信号于Dm-dNK序列N端,与绿色荧光蛋白(GFP)形成融合蛋白以确定基因的亚细胞水平表达位点,构建质粒转染骨肉瘤细胞及胰腺癌细胞,测定转染细胞Dm-dNK的活性和其对于嘌呤核苷酸类似物araC、dFdC、BVDU及araT的细胞毒性。结果:在所测试的细胞株中,线粒体基质内表达Dm-dNK具有较高的酶活性,转染肿瘤细胞对araC、araT及dFdC的敏感性增加。结论:Dm-dNK可以定位表达于肿瘤细胞线粒体并保持酶的活性,可能成为肿瘤基因治疗新的靶向作用位点。

mRNA-DD法鉴定、筛查脊索瘤相关基因的实验研究

目的:本研究采用mRNA-DD法鉴定、筛查与脊索瘤发生的相关基因,为脊索瘤的分子机制、基因诊断和基因治疗的研究提供靶基因。方法:应用mRNA-DD方法,对1例脊索瘤肿瘤和瘤旁正常组织的差异条带进行扩增、纯化、测序分析,鉴定与脊索瘤相关的基因,并应用R T-PCR方法对18例脊索瘤进行筛查。结果:mRN A-DD检测结果在1例脊索瘤中发现9条差异片段,对其中2条进行测序分析,发现分别与RNF-11和CTC-50DM5基因具有高度同源性。对全部18例脊索瘤筛查结果显示RNF-11和CTC-50DM5基因在脊索瘤和瘤周正常组织中表达差异均具有统计学意义(P<0.001),其中RNF-11基因表达在瘤周组织中明显增高,而CTC-50DM5基因表达在脊索瘤组织中明显增高。结论:RNF-11基因可能是与脊索瘤相关的肿瘤抑制基因,而CTC-50DM5基因可能是与脊索瘤相关的癌基因。

PRDM14在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理因素的关系

背景与目的锌指蛋白转录抑制因子(positive regulatory domain zinc finger protein,PRDM)是一个有关人类肿瘤形成的转录调节因子家族,在细胞分化和恶性变中发挥重要作用。PRDM14是PRDM家族的成员之一。本研究的目的是检测PRDM14在非小细胞肺癌组织中的表达情况并探讨其与非小细胞肺癌的临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学方法检测70例非小细胞肺癌标本和7例癌旁组织中PRDM14的表达。采用Western blot方法检测42例非小细胞肺癌组织和癌旁肺组织中PRDM14蛋白的表达。结果 7例癌旁肺组织中PRDM14弱表达,在70例非小细胞肺癌组织标本中,有8例为PRDM14阴性表达(11.43%),9例为PRDM14弱阳性表达(12.86%),36例PRDM14阳性表达(51.43%),有17例PRDM14强阳性表达(24.29%),PRDM14的表达情况与非小细胞肺癌的分化程度(P=0.046)和组织学类型(P=0.047)有关,PRDM14在高分化腺癌、鳞癌中表达最高,在中分化腺癌、鳞癌中表达次之,在低分化腺癌、鳞癌表达最低,PRDM14在腺癌中的表达高于鳞癌。Western blot结果表明PRDM14的蛋白在癌旁肺组织和肺腺癌、鳞癌组织的表达水平存在显著差异,PRDM14在非小细胞肺癌组织中的表达水平高于癌旁肺组织(P<0.001),而且与非小细胞肺癌的分化程度有关(P=0.017),在高、中分化腺癌、鳞癌中的表达高于在低分化腺癌、鳞癌中的表达。结论 PRDM14在癌旁肺组织中低表达,在非小细胞肺癌组织中高表达,其表达水平与非小细胞肺癌的分化、组织学类型有关,可能在非小细胞肺癌的发生发展中发挥作用。

改良的PEP方法在无创性产前基因诊断中的应用

应用显微操作技术获取孕妇外周血中的单个有核红细胞 ,改良的PEP方法扩增单个有核红细胞的全基因组DNA ;在此基础上 ,应用荧光标记聚合酶链反应扩增 9个微卫星片段 ,进行基因型分析判定单个有核红细胞来源。综合性别和DMD基因内的数个STR位点连锁分析进行DMD基因诊断 ,应用PCR -STR连锁分析进行PKU基因诊断。结果显示 ,对 10例DMD高危胎儿中的 6例成功地进行了无创性产前基因诊断。同时对 1例PKU也成功地进行了无创性产前基因诊断。改良的PEP方法扩增单个细胞的全基因组可以满足基因诊断的要求 。

多巴胺D4受体基因多态性与原发性夜间遗尿症的关联研究

目的研究多巴胺D4受体(dopamine D4 receptor,DRD4)基因的多态性及其组合分布与原发性夜间遗尿症(PNE)的相关性。方法选取无亲缘关系的PNE儿童86例以及无亲缘关系的健康儿童100例为对照组,提取静脉血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应及等位基因特异性扩增技术检测DRD4基因-1240L/S,-521C/T与-616C/G3个位点的基因型。结果PNE组与对照组DRD4-616C/G的等位基因频率及基因型频率差异存在显著性(χ2=8.13,P<0.05;χ2=6.23,P<0.05)。等位基因组合分布研究发现DRD4-1240L/S-616C/G-521C/T组合的单倍型LCT分布频率在PNE组明显高于正常对照组(χ2=5.88,P<0.05)。结论PNE儿童DRD4基因-616位点由G到C的转换可能影响DRD4基因的诱导及转录,DRD4基因启动子区3个功能多态位点构成的单倍型LCT可能进一步协同抑制了DRD4基因的转录活性,可能使DRD4蛋白表达降低,注意力缺陷,睡眠觉醒障碍,引起夜间遗尿。

Twist在肺癌中高表达并与肺癌的分化有关

背景与目的转录因子Twist是上皮-间质转变(EMT)过程中的重要调控因子,在肿瘤进展中发挥重要作用。本研究的目的是检测Twist在肺癌组织和细胞系中的表达情况,并探讨其与肺癌的临床病理因素和生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学方法检测68例肺癌及8例癌旁肺组织中Twist的表达;采用RT-PCR方法检测人支气管上皮细胞系(HBE)和8个肺癌细胞系Twist1和Twist2mRNA的表达水平;应用免疫荧光方法检测HBE和8个肺癌细胞系中Twist蛋白的表达和亚细胞定位。结果8例癌旁肺组织中Twist弱表达,在68例肺癌组织标本中,9例为Twist弱表达(13.24%),51例为Twist中高表达(75.00%),癌旁肺组织Twist弱表达。Twist高表达与肺癌分化程度(P=0.002)和患者年龄(P=0.012)有关。Twist1和Twist2的mRNA在不同组织学类型的肺癌细胞系中的表达水平均有差异(P<0.05)。免疫荧光显示Twist蛋白在HBE细胞系中弱表达,而在肺鳞癌和腺癌细胞系中高表达,主要定位于细胞浆。结论Twist在正常肺组织中低表达,在肺癌中高表达,其表达水平与肺癌的分化有关,可作为肺癌进展的生物学标志。

p73在骨巨细胞瘤中表达的意义

目的 :研究p73蛋白在骨巨细胞瘤中的表达 ,探讨其在骨巨细胞瘤发生、发展中的可能作用。方法 :应用免疫组化S P法检测 40例骨巨细胞瘤石蜡标本中p73蛋白的表达情况。结果 :p73在骨巨细胞瘤中表达阳性率为 30 .0 % ,对照组骨软骨瘤表达阳性率为 2 0 .0 % ,两组相比无显著差异 (P >0 .0 5 )。p73在骨巨细胞瘤Ⅰ～Ⅱ级组表达阳性率为 17.9% ,Ⅲ级组为 5 8.3% ,二者相比差异显著 (P <0 .0 5 )。结论 :p73在Ⅲ级骨巨细胞瘤中表达明显增高 ,提示其在骨巨细胞瘤发生、发展中可能发挥重要作用 ,并可作为骨巨细胞瘤Jaffe分级的辅助指标之一。

蛋白激酶B对小鼠1-细胞期受精卵卵裂的影响

目的:研究蛋白激酶B(PKB)的活性变化对小鼠受精卵早期发育的影响。方法:将野生型、持续激活型和激酶失活型PKB克隆至pBluescriptII/SK表达载体中,体外转录成mRNA,显微注射到1-细胞期受精卵中,观察受精卵分裂情况。结果:1-细胞期受精卵注射野生型或持续激活型PKB的mRNA后,卵裂率均增加,而持续激活型PKB的促进作用更为显著;相反注射激酶失活型PKB的mRNA后,卵裂率明显降低。结论:PKB能促进小鼠1-细胞期受精卵的发育,其活化对于小鼠受精卵的发育是必需的。

BAMBI在非小细胞肺癌中的分布和mRNA表达

背景与目的BAMBI(BMP and activin membrane-bound inhibitor)与TGF-βⅠ型受体具有相似的结构,从而广泛参与TGF-β信号的调控。通过检测BAMBI在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达分布情况,探讨其与NSCLC临床病理因素之间的关系。方法63例NSCLC及癌旁正常组织标本用于免疫组织化学检测。其中31例新鲜肺癌组织及癌旁正常肺组织标本,术后立即投入液氮速冻之后,于-70℃保存,用于RT-PCR检测。结果BAMBI mRNA在癌旁组织中有较弱的表达,其在癌组织中的表达高于相应的癌旁组织(0.358±0.135 vs 0.249±0.129),差异具有统计学意义(P=0.003)。BAMBI蛋白主要表达在胞膜和靠近胞膜的胞浆,其在癌组织中的表达高于癌旁组织,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。其蛋白和mRNA在NSCLC癌组织中的表达显著高于癌旁组织,其在肺鳞癌中的表达低于肺腺癌。结论BAMBI在非小细胞肺癌中表达明显增加,BAMBI的过表达与非小细胞肺癌的发生有关。

p27^(KIP1)和CyclinE在骨肉瘤中表达的意义

目的:研究p27KIP1和CyclinE蛋白在骨肉瘤中的表达,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的可能作用。方法:应用免疫组化S-P方法检测28例骨肉瘤石蜡标本中p27KIP1和CyclinE蛋白的表达情况。结果:p27KIP1蛋白在28例骨肉瘤中表达阳性率为42.9%,在对照组20例骨软骨瘤中为75.0%,骨肉瘤与骨软骨瘤相比有显著差异(P<0.05)。CyclinE蛋白在28例骨肉瘤中表达阳性率为67.9%,在20例骨软骨瘤中为10.0%,骨肉瘤与骨软骨瘤相比有显著差异(P<0.01)。p27KIP1蛋白在骨肉瘤中的表达阴性率为57.1%,与CyclinE蛋白在骨肉瘤中表达阴性率67.9%相比二者差异不显著(P>0.05)。结论:p27KIP1在骨肉瘤中表达降低,CyclinE在骨肉瘤中高表达,二者与骨肉瘤发生机制有关,且具有相关性。

Kleihauer抗酸染色法标记母血中的胎儿有核红细胞

以18例孕7～25周的孕妇外周血为材料,经Percoll不连续密度梯度离心初步富集胎儿有核红细胞。然后用Kleihauer抗酸染色法进行标记,结果阳性胎儿有核红细胞的胞浆呈深红色,而母亲的有核红细胞胞浆无色。显微操作法获取单个胎儿有核红细胞,经全基因组扩增后,产物进行性别鉴定及STR连锁分析检测,验证有核红细胞的来源,并完成9例杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)的无创性产前基因诊断。应用Kleihauer抗酸染色法标记胎儿有核红细胞,它是一种快速、简单、直接的化学染色方法,更易于推广到临床应用。

Akt/NF-κB信号转导通路在AngⅡ诱导的血管内皮细胞衰老中的表达及意义

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老的影响及其相关蛋白激酶B（PKB/Akt）、核转录因子-KB（NF-KB）表达的变化，阐明血管内皮细胞衰老对诊治动脉粥样硬化的重要意义。方法制备血管紧张素ⅡP．PMI1640培养液（10^-6mol/L）培养HUVECs，通过β-半乳糖苷酶（β-gal）染色、流式细胞仪检测细胞衰老，Western blotting测定Akt、磷酸化Akt、NF-KB蛋白水平。结果AngII诱导组β-gal阳性细胞数与对照组相比为（80．10±6．81）％；流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0～G，证实细胞衰老；与对照组相比，16、32和48hAkt磷酸化蛋白表达水平明显增高（P〈0．05），Akt磷酸化水平于32h达到最高峰（P〈0．01）；磷酸化Akt表达呈持续增加时，NF-KB呈显著上升趋势。结论血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的衰老可能与Akt/NF-KB信号转导通路有关。

多巴胺D4受体基因启动子区多态性与原发性夜间遗尿症的关联研究

目的研究多巴胺D4受体(dopamine D4 receptor,DRD4)基因-616C/G位点的多态性与原发性夜间遗尿症(PNE)的相关性。方法选取无亲缘关系的PNE儿童86例以及无亲缘关系的健康儿童100例为对照组,提取静脉血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应及等位基因特异性扩增技术检测DRD4基因-616C/G位点的基因型。结果PNE组与对照组DRD4-616C/G位点的等位基因频率及其基因型频率差异有显著性(χ2=9.022,P=0.003;χ2=7.987,P=0.018)。结论PNE儿童DRD4基因-616位点由C到G的转换可能影响DRD4基因的诱导及转录,使DRD4蛋白表达降低,多巴胺递质代谢通路异常,睡眠觉醒障碍,引起夜间遗尿。

遗尿症患儿视听整合持续操作测试对照研究

【目的】探讨原发性夜间遗尿症(primary nocturnal enuresis,PNE)患儿的反应控制力和持续注意力特征。【方法】采用视听整合持续操作测试系统对30例单纯PNE患儿分别与22例PNE+注意力缺陷行动障碍(at-tention deficit hyperactivity disorder,ADHD)患儿和30例正常儿童进行对照研究。【结果】单纯PNE组和对照组比较,综合反应控制商数、听觉反应控制商数、听觉谨慎商数、听觉一致性商数差异有显著性(P<0.05),综合注意商数、听觉注意力商数、听觉警醒商数和听觉注意集中商数差异有非常显著性(P<0.01);单纯PNE组和PNE+ADHD组比较,听觉反应控制商数和视觉速度商数差异有显著性(P<0.05),综合注意商数、听觉注意力商数、视觉注意力商数、听觉警醒商数和视觉警醒商数差异有非常显著性(P<0.01)。【结论】PNE本身即存在反应控制力和持续注意力的损害,伴有ADHD时注意力损伤更为严重,提示患儿注意力损伤可能与前脉冲抑制PNE比例下降有关。

乳腺导管扩张症30例临床分析

对2002年至2006年经手术和病理证实的乳腺导管扩张症30例的临床资料进行分析。

sonic hedgehog信号通路在血管平滑肌细胞中的表达及意义

目的研究sonic hedgehog(Shh)信号通路各蛋白在血管平滑肌细胞(VSMC)中的表达情况,探讨其是否与VSMC的增殖相关。方法应用免疫荧光、激光共聚焦检测Shh信号通路蛋白在体外培养的VSMC中的表达,MTT法及Ki67的表达情况联合评价细胞增殖。结果Shh信号通路的配体Shh蛋白、patched1受体及其下游转录因子Gli2在VSMC中有表达,MTT法及Ki67染色结果显示外源的Shh蛋白能够促进VSMC的增殖,而应用Shh信号通路的特异抑制剂Cyclopamine则能抑制细胞增殖。结论Shh信号通路与VSMC增殖密切相关。