小鼠Doc-1R基因的克隆及其表达

背景与目的:Doc-1R基因是1999年克隆的一种新的基因,已有的研究表明Doc-1R基因可能是一种潜在的抑癌基因。为了进一步研究此基因的功能,我们首先克隆了小鼠的Doc-1R基因,并对此基因的表达进行了初步的研究。方法:根据小鼠的Doc-1R基因cDNA序列,设计合成基因组特异引物,应用巢式PCR对小鼠基因组步移文库进行扩增。对测序结果进行序列分析及剪接位点的鉴定。另外应用RT-PCR的方法研究了Doc-1R基因在小鼠肝、脾、胰、肾、肺、肠、心、脑、骨、肌肉、膀胱、卵巢、睾丸等13种组织的表达。结果:经二次基因组步移获得了小鼠Doc-1R基因组全长序列。基因组全长2787bp,含4个外显子和3个内含子,外显子与内含子接头符合GT/AG法则。RT-PCR结果表明,Doc-1R基因在小鼠13种组织和器官中均有表达。结论:成功克隆了小鼠Doc-1R基因,为进一步研究此基因的功能奠定了基础。RT-PCR表达结果提示此基因可能是对维持组织器官的功能具有重要的作用的管家基因。

人P15基因真核表达重组体的构建和鉴定

将含人ｐ１５ｃＤＮＡ质粒ｐＢＳ－ＳＫ－ｐ１５以ＥｃｏＲＩ和ＸｈｏＩ进行双酶切，再与真核表达载体ｐＣＲＴＭ３经相同酶切点连接，转化感受态细菌、筛选、鉴定得到可在真核细胞中表达人ｐ１５基因的重组质粒ｐＣＲ－ｈｐ１５。