脑线粒体膜钙通道检测方法的实验研究

目的建立线粒体膜钙通道的检测方法,为分离纯化钙通道蛋白提供更可靠的手段。方法采用分光光度技术,于吸光度540nm波长下测定30例沙士鼠脑线粒体膜钙通道在不同温度(30～35℃)、pH值(6.5～7.6)、蛋白质量浓度(0.2～0.6mg/ml)下的渗透性变化,以吸光度及达到平衡所用的时间反映膜钙通道变化。结果pH值7.4、0.5mg/ml线粒体蛋白含量以及25℃为线粒体膜钙通道的最佳检测方法。结论建立了鼠脑线粒体膜钙通道的最佳检测方法;可用于进一步分离纯化钙通道蛋白。

氢化可的松对NK-92MI细胞杀伤活性及凋亡的影响

为了探讨氢化可的松(hydrocortisone,HC)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响,用不同浓度的HC处理NK-92MI细胞;采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。结果显示,作用NK-92MI细胞24、48、72 h后,7.5μg/dl和15μg/dl的HC对其增殖无明显抑制作用(P>0.05),30μg/dl、60μg/dl、120μg/dl、240μg/dl的HC对其增殖均有明显抑制作用(P<0.05),且呈浓度时间依赖性;效靶比为5∶1时,7.5μg/dl和15μg/dl的HC对NK-92MI细胞杀伤活性无显著影响(P>0.05),30μg/dl、60μg/dl、120μg/dl、240μg/dl的HC对其杀伤活性抑制作用显著(P<0.05),呈浓度依赖性;60μg/dl、240μg/dl的HC可诱导NK-92MI细胞发生凋亡;与对照组相比,60μg/dl HC 24 h组Bcl-2基因表达降低(P<0.05),Bax基因表达增高(P<0.01)。提示,应激浓度的HC可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK-92MI细胞凋亡,而后者与Bax/Bcl-2基因表达增高有关。