骨髓源性血管内皮前体细胞与出生后生理性和病理性血管形成

Endothelial progenitor cells (EPCs) exist in bone marrow, umbilical cord blood and peripheral blood of adult mammals, including humans. Furthermore, the discovery of EPCs has led to the notion of adult vasculogenesis, in which bone marrow (BM)-derived EPCs home to and incorporate into sites of new blood vessel formation, where they differentiate into endothelial cells, which is consistent with postnatal vasculogenesis. It has become apparent that circulating BM-derived EPCs are involved in promoting physiologic and pathologic neovascularization, such as wound healing and tumor growth. They are of great clinical importance in pro- or anti-angiogenic therapies. [

人成骨细胞与脐静脉血管内皮细胞直接混合培养的实验研究

目的探讨人成骨细胞(MG-63)与人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共同培养后,对成骨细胞功能的影响。方法取MG-63与人HUVECs直接联合培养于培养皿中,通过对人成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)定量测定,观察HUVECs对人成骨细胞功能的影响。结果人成骨细胞与HUVECs直接联合共培养后,两种细胞均生长良好,人成骨细胞内ALP活性和OC定量测定结果,共培养组明显高于对照组。结论HUVECs在体外与人成骨细胞直接联合共培养中,有促进人成骨细胞活性的作用。

实验性慢性氟中毒大鼠垂体生长激素细胞的超微结构及酶细胞化学研究

本实验以饮用含100mg/L高氟水的方法复制了雄性大鼠实验性慢性氟中毒模型。用透射电镜观察了高氟对大鼠垂体生长激素(GH)细胞及其硫胺素焦磷酸酶(TPPase)活性的影响。结果表明:氟中毒大鼠垂体中大多数GH细胞的细胞器不如对照组发达;线粒体有破坏,基质密度增高,出现空泡或嵴减少;溶酶体增多,分泌颗粒数量增多但较小,说明GH细胞处于机能不活跃状态。电镜酶细胞化学研究结果显示氟中毒大鼠垂体GH细胞的TPPase活性受到抑制。结果提示高氟可能抑制垂体GH细胞的TPPase活性并影响其超微结构。

人脐带静脉内皮细胞的继代培养

人脐带静脉内皮细胞继代培养25代。应用光镜、电镜及Ⅷ因子相关抗原的免疫荧光方法进行鉴定与观察。在RPMI-1640培养液中加入20%人血清,内皮细胞生长因子200μg/ml,肝素100μg/ml及培养皿的明胶覆膜是人内皮细胞长期培养的重要条件。

成纤维细胞生长因子促进小鼠皮肤伤口愈合的研究

为了探索成纤维细胞生长因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＦＧＦ）对创伤愈合的作用设计了本实验。于小鼠背部皮肤制成无菌手术切割伤口。实验组用ＦＧＦ溶液（含ＦＧＦ３００μｇ／ｍｌ，肝素１００μｇ／ｍｌ）０．５ｍｌ，对照组用生理盐水０．５ｍｌ，分别滴入伤口处，然后用无菌纱布包扎，每天换药一次。术后１，３，５，７和１０天观察伤口愈合情况。结果显示：实验组毛细血管和成纤维细胞增生较对照组明显，并提前２～３天达最高峰。表明ＦＧＦ能强有力地促进肉芽组织增生和伤口愈合。

剪切力改变后动脉内皮细胞通透性的变化

目的 :研究剪切力改变后内皮通透性及其超微结构。方法 :饲以普通或高脂肪食的兔腹主动脉狭窄 6 0 7% ,高速摄像微粒子示踪技术血流分析 ,依万斯蓝和苏丹Ⅳ动脉染色 ,辣根过氧化物酶法电镜观察。结果 :距狭窄近侧 1mm的动脉前、后壁剪切力分别为 74dyn/cm2 和 317dyn/cm2 ,为高剪切力区 ;狭窄远侧 3mm前、后壁分别为 - 18dyn/cm2 和 - 71dyn/cm2 ,为返流、涡流、湍流和停滞的低剪切力区。狭窄近、远段内皮通透性均增高 ,在蓝染或苏丹Ⅳ阳性区 ,狭窄远段内皮细胞连接部完全开放型的百分率 (88 5 %或 88 1% )明显大于近段 (2 2 7%或 30 % )(P <0 0 1) ,远段标记HRP小胞的密度 (2 5 7± 1 14)× 10 12 /m2 或 (2 72± 1 81)× 10 12 /m2 明显高于近段 (1 2 4± 1 0 6 )× 10 12 /m2 或 (1 90± 1 47)× 10 12 /m2 (P <0 0 1)。结论 :低剪切力更易导致内皮细胞对大分子物质通透性增高和动脉硬化形成。

基质金属蛋白酶与动脉粥样硬化及斑块破裂的关系

基质金属蛋白酶是一组能够降解血管细胞外基质成分的酶类。在动脉粥样硬化斑块的特定区域过度表达 ,可引起斑块基质的降解 ,从而导致斑块破裂 ,引发急性冠状动脉综合征。本文就基质金属蛋白酶在动脉粥样硬化及斑块破裂中的作用作一综述。

氢过氧化枯烯对培养人血管内皮细胞的损伤作用

本实验用氢过氧化枯烯作用于培养的人脐带静脉内皮细胞,探讨脂质过氧化对血管内皮细胞的作用。结果表明,氢过氧化枯烯激发和促进了内皮细胞的脂质过氧化过程,使内皮细胞的过氧化脂质含量升高。在形态结构上内皮细胞出现收缩和生物膜系统的损伤。用放射免疫方法测定,内皮细胞培养液中的6-keto-PGF_1α含量减少,表明PGI_2的产生受到抑制。上述变化可认为:内皮细胞对脂质过氧化的作用是敏感的,提示脂质过氧化通过损伤内皮细胞,可能在动脉粥样硬化发病机理中起重要作用。

碱性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增生的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对人血管内皮细胞 (EC)增生的影响及其机制 ,明确 b FGF对烟曲霉素衍生物 (TNP- 4 70 )及地塞米松 (Dex)作用的影响。 方法 培养人脐静脉内皮细胞 (HU VEC) ,采用 MTT法测定 EC生长活性 ,免疫组织化学方法检测 EC中核因子 (NF-κB)和 ki- 6 7的表达。 结果 b FGF有显著促进 EC增生的作用 ,可使核内 NF-κB和 ki- 6 7表达增强 ;TNP- 4 70及 Dex可抑制 EC增生 ,使核内 NF-κB和 ki- 6 7表达减少 ;b FGF逆转二者的抑制效应。 结论 b FGF能促进 EC增生 ,其机制可能是通过激活 NF- κB,使细胞由静止期进入增殖期 ,促进 DNA合成 ,细胞分裂增殖。 TNP- 4 70及 Dex可抑制 NF- κB活化 ,b

脂质过氧化和维生素E对培养人内皮细胞的影响

用联胺作用于培养人内皮细胞,激发并促进了脂质过氧化。随联胺浓度增加,内皮细胞过氧化脂质浓度增加,前列环素合成减少。其形态变化主要为细胞收缩,质膜泡形成,内质网扩张,线粒体肿胀,细胞空泡化及坏死脱落。抗氧化剂维生素E能显著降低联胺引起的过氧化脂质的升高,增加前列环素的合成并明显减轻内皮细胞的形态损伤。但在高浓度联胺时,维生素E无明显保护作用。这些结果提示,脂质过氧化可能通过损伤内皮细胞而在动脉粥样硬化发生中起重要作用,维生素E由于保护内皮细胞的氧化性损伤而可能有防治动脉粥样硬化的作用。

建立血管壁模型的一种新方法及其应用

为探讨建立血管壁模型的新方法，采用胰蛋白酶和胶原酶处理人胎儿羊膜，将人血管内皮细胞及平滑肌细胞分别培养在羊膜的两侧面，用联胺诱发脂质过氧化，观察单核细胞迁移的情况。结果显示，内皮细胞及平滑肌细胞可分别培养在经过处理的羊膜的两面，以构建成类似于机体的血管壁模型。该模型上的内皮细胞及平滑肌细胞发生脂质过氧化后，大量单核细胞迁移入平滑肌细胞层。通过此模型可观察如单核细胞等其它血细胞在血管壁内的情况，该构建血管壁模型的新方法对血管壁生理、动脉粥样硬化及炎症等方面的研究都很有意义。

骨肉瘤组织中survivin与VEGF的表达及相关关系的研究(英文)

目的检测survivin与VEGF在骨肉瘤中的表达,探讨二者对骨肉瘤血管生成和转移的作用及其关系.方法采用原位杂交、免疫组织化学技术检测38例骨肉瘤组织survivin mRNA表达及VEGF、CD34蛋白表达,计数微血管密度(MVD)、,并与主要临床病理参数进行比较.结果骨肉瘤中survivin mRNA和VEGF表达率均为65.8%,二者表达呈正相关(r=0.546,P＜0.01);骨肉瘤MVD均值为71.5(28～152),高MVD组survivin表达率显著高于低MVD组(P＜0.01).骨肉瘤中survivin mRNA、VEGF表达及MVD与组织学分级无关,与组织学分型(WHO分型)和转移有关.结论survivin基因选择性高表达于骨肉瘤组织,通过抑制细胞凋亡,参与骨肉瘤的发生发展;其对骨肉瘤血管生成和转移的作用可能与VEGF存在密切相关;survivin可能是评价骨肉瘤预后的重要参考指标.

辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达

目的观察辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机分组:对照组、低密度脂蛋白(25 mg/L)组、氧化型低密度脂蛋白(255、0和100 mg/L)组和氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)+辛伐他汀(1和10μmol/L)组,通过逆转录聚合酶链反应和Western blot蛋白印迹分析检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,并在相差显微镜下观察细胞形态变化。结果氧化型低密度脂蛋白上调血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.05)。辛伐他汀明显抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.05),且高浓度组较低浓度组的抑制作用更强(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白可能通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体导致内皮功能障碍,辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达是其非调脂抗动脉粥样硬化机制之一。

脂质过氧化对血管内皮细胞促增殖活性的影响

为探讨脂质过氧化对血管内皮细胞源生长因子的影响，以氢过氧化枯烯作用于培养的牛主动脉内皮细胞后，收集内皮细胞条件培养基，并用肝素亲和层析法处理，分组测定其对3T3细胞3H-胸腺嘧啶核苷掺入率的影响，并用放射免疫法测定各脂质过氧化作用组内皮细胞培养基中内皮素的含量。结果发现．氢过氧化枯烯使培养的内皮细胞的脂过氧化物蓄积增加，且内皮细胞条件培养基对3T3细胞的DNA合成有促进作用．对Swiss3T3细胞的促增殖活性主要存在于非肝素结合部分。氢过氧化枯烯作用后的内皮细胞的内皮素分泌水平比对照组增加。由此推测脂质过氧化作用引起的内皮细胞对平滑肌细胞的促增殖活性可能与内皮素等非肝素结合的分子有关。

LDL和HDL对培养的人血管内皮细胞的影响

本文以不同胆固醇浓度的低密度脂蛋白和高密度脂蛋白或将其混合,施加于培养呈融合状态的人脐带静脉血管内皮细胞。通过相差显微镜、扫描电镜和透射电镜观察,发现LDL对内皮细胞有损伤作用,并随所含胆固醇浓度的增高,其损伤程度加重,损伤机制可能与脂质过氧化物的增加有关。HDL对内皮细胞有保护作用,可使其免遭LDL的损伤,可能与HDL可阻止LDL所引起内皮细胞膜中胆固醇的过多或毒性堆积等有关。

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对人内皮细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响

为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对人内皮细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响 ,体外培养人脐静脉内皮细胞 ,分别应用蛋白印迹法和酶谱法检测基质金属蛋白酶 2的含量和活性。结果发现 ,与对照组相比 ,不同浓度 (5、2 5和 5 0 μg/L)粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子可使人内皮细胞基质金属蛋白酶 2的蛋白表达和活性增强 ,且随粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子剂量增加而增强。提示粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子可通过刺激人内皮细胞基质金属蛋白酶 2蛋白的表达 ,并增强其活性 ,促进内皮细胞对细胞外基质的降解 ,从而易于动脉粥样硬化斑块内炎性细胞的渗入 ,内皮细胞的迁移及新血管的形成 。

骨肉瘤中survivin基因与核因子-κB的表达

目的 探讨survivin基因和核因子 κB (nuclearfactor κappaB ,NF κB)对骨肉瘤发生发展的影响。方法 采用原位杂交、免疫组织化学技术检测 38例骨肉瘤、 15例骨软骨瘤、 5例正常骨组织survivinmRNA及NF κBp6 5蛋白表达 ,并与骨肉瘤主要临床病理学参数进行比较。结果 正常骨和骨软骨瘤组织survivinmRNA及NF κBp6 5表达不明显 ,骨肉瘤组织中其表达率分别为 6 5 .8%、 6 0 .5 % ,survivinmRNA表达与骨肉瘤分型和转移有关 ,NF κB p6 5表达与骨肉瘤转移有关 ,骨肉瘤中survivin与NF κB表达正相关。结论 凋亡抑制基因survivin与核因子 κB在骨肉瘤细胞中均异常活化 ,进而参与了骨肉瘤的发生和发展 ,二者对骨肉瘤的作用可能存在密切的关联。

慢性氟中毒大鼠垂体生长激素细胞及下丘脑生长抑素神经元的免疫细胞化学研究

本实验对慢性氟中毒大鼠垂体生长激素(GH)细胞及下丘脑生长抑素(SS)神经元进行了免疫细胞化学染色,并用图像分析仪对GH及SS进行了半定量分析。结果表明:同对照组相比,氟中毒垂体GH细胞中的阳性反应颗粒细小并弥散地分布,半定量分析表明其GH含量明显低于对照组。未见下丘脑SS神经元及其SS含量有明显改变。本研究结果提示高氟可直接作用于垂体GH细胞影响其合成分泌功能。

脂质过氧化对血管内皮细胞源性生长因子合成和基因表达的影响

本研究以氢过氧化枯烯作为脂质过氧化反应的引发剂，作用于培养的牛主动脉内皮细胞，制备内皮细胞条件培养液，测定其对Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成的影响；并以抗血小板源性生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）抗体中和实验和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析测定了脂质过氧化作用对内皮细胞ＰＤＧＦ产生的影响。结果表明：氢过氧化枯烯使内皮细胞内脂过氧化物蓄积；氢过氧化枯烯组内皮细胞条件培养液作用的Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞［３Ｈ］－ＴｄＲ的掺入量明显高于正常对照组；以抗ＰＤＧＦ－ＡＡ、抗ＰＤＧＦ－ＢＢ中和抗体处理后，氢过氧化枯烯作用组的内皮细胞条件培养液对Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞的增殖促进活性未见减弱；并且以氢过氧化枯烯作用后内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ的水平比正常组有所减低。提示，由氢过氧化枯烯引发的脂质过氧化反应，使内皮细胞源性生长因子的分泌增加；并且可能为ＰＤＧＦ以外的分子物质。