实验性慢性氟中毒大鼠垂体生长激素细胞的超微结构及酶细胞化学研究

本实验以饮用含100mg/L高氟水的方法复制了雄性大鼠实验性慢性氟中毒模型。用透射电镜观察了高氟对大鼠垂体生长激素(GH)细胞及其硫胺素焦磷酸酶(TPPase)活性的影响。结果表明:氟中毒大鼠垂体中大多数GH细胞的细胞器不如对照组发达;线粒体有破坏,基质密度增高,出现空泡或嵴减少;溶酶体增多,分泌颗粒数量增多但较小,说明GH细胞处于机能不活跃状态。电镜酶细胞化学研究结果显示氟中毒大鼠垂体GH细胞的TPPase活性受到抑制。结果提示高氟可能抑制垂体GH细胞的TPPase活性并影响其超微结构。

骨肉瘤组织中survivin与VEGF的表达及相关关系的研究(英文)

目的检测survivin与VEGF在骨肉瘤中的表达,探讨二者对骨肉瘤血管生成和转移的作用及其关系.方法采用原位杂交、免疫组织化学技术检测38例骨肉瘤组织survivin mRNA表达及VEGF、CD34蛋白表达,计数微血管密度(MVD)、,并与主要临床病理参数进行比较.结果骨肉瘤中survivin mRNA和VEGF表达率均为65.8%,二者表达呈正相关(r=0.546,P＜0.01);骨肉瘤MVD均值为71.5(28～152),高MVD组survivin表达率显著高于低MVD组(P＜0.01).骨肉瘤中survivin mRNA、VEGF表达及MVD与组织学分级无关,与组织学分型(WHO分型)和转移有关.结论survivin基因选择性高表达于骨肉瘤组织,通过抑制细胞凋亡,参与骨肉瘤的发生发展;其对骨肉瘤血管生成和转移的作用可能与VEGF存在密切相关;survivin可能是评价骨肉瘤预后的重要参考指标.

碱性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增生的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对人血管内皮细胞 (EC)增生的影响及其机制 ,明确 b FGF对烟曲霉素衍生物 (TNP- 4 70 )及地塞米松 (Dex)作用的影响。 方法 培养人脐静脉内皮细胞 (HU VEC) ,采用 MTT法测定 EC生长活性 ,免疫组织化学方法检测 EC中核因子 (NF-κB)和 ki- 6 7的表达。 结果 b FGF有显著促进 EC增生的作用 ,可使核内 NF-κB和 ki- 6 7表达增强 ;TNP- 4 70及 Dex可抑制 EC增生 ,使核内 NF-κB和 ki- 6 7表达减少 ;b FGF逆转二者的抑制效应。 结论 b FGF能促进 EC增生 ,其机制可能是通过激活 NF- κB,使细胞由静止期进入增殖期 ,促进 DNA合成 ,细胞分裂增殖。 TNP- 4 70及 Dex可抑制 NF- κB活化 ,b

人脐带静脉内皮细胞的继代培养

人脐带静脉内皮细胞继代培养25代。应用光镜、电镜及Ⅷ因子相关抗原的免疫荧光方法进行鉴定与观察。在RPMI-1640培养液中加入20%人血清,内皮细胞生长因子200μg/ml,肝素100μg/ml及培养皿的明胶覆膜是人内皮细胞长期培养的重要条件。

脂质过氧化和维生素E对培养人内皮细胞的影响

用联胺作用于培养人内皮细胞,激发并促进了脂质过氧化。随联胺浓度增加,内皮细胞过氧化脂质浓度增加,前列环素合成减少。其形态变化主要为细胞收缩,质膜泡形成,内质网扩张,线粒体肿胀,细胞空泡化及坏死脱落。抗氧化剂维生素E能显著降低联胺引起的过氧化脂质的升高,增加前列环素的合成并明显减轻内皮细胞的形态损伤。但在高浓度联胺时,维生素E无明显保护作用。这些结果提示,脂质过氧化可能通过损伤内皮细胞而在动脉粥样硬化发生中起重要作用,维生素E由于保护内皮细胞的氧化性损伤而可能有防治动脉粥样硬化的作用。

建立血管壁模型的一种新方法及其应用

为探讨建立血管壁模型的新方法，采用胰蛋白酶和胶原酶处理人胎儿羊膜，将人血管内皮细胞及平滑肌细胞分别培养在羊膜的两侧面，用联胺诱发脂质过氧化，观察单核细胞迁移的情况。结果显示，内皮细胞及平滑肌细胞可分别培养在经过处理的羊膜的两面，以构建成类似于机体的血管壁模型。该模型上的内皮细胞及平滑肌细胞发生脂质过氧化后，大量单核细胞迁移入平滑肌细胞层。通过此模型可观察如单核细胞等其它血细胞在血管壁内的情况，该构建血管壁模型的新方法对血管壁生理、动脉粥样硬化及炎症等方面的研究都很有意义。

辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达

目的观察辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机分组:对照组、低密度脂蛋白(25 mg/L)组、氧化型低密度脂蛋白(255、0和100 mg/L)组和氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)+辛伐他汀(1和10μmol/L)组,通过逆转录聚合酶链反应和Western blot蛋白印迹分析检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,并在相差显微镜下观察细胞形态变化。结果氧化型低密度脂蛋白上调血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.05)。辛伐他汀明显抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.05),且高浓度组较低浓度组的抑制作用更强(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白可能通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体导致内皮功能障碍,辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达是其非调脂抗动脉粥样硬化机制之一。

骨肉瘤中survivin基因与核因子-κB的表达

目的 探讨survivin基因和核因子 κB (nuclearfactor κappaB ,NF κB)对骨肉瘤发生发展的影响。方法 采用原位杂交、免疫组织化学技术检测 38例骨肉瘤、 15例骨软骨瘤、 5例正常骨组织survivinmRNA及NF κBp6 5蛋白表达 ,并与骨肉瘤主要临床病理学参数进行比较。结果 正常骨和骨软骨瘤组织survivinmRNA及NF κBp6 5表达不明显 ,骨肉瘤组织中其表达率分别为 6 5 .8%、 6 0 .5 % ,survivinmRNA表达与骨肉瘤分型和转移有关 ,NF κB p6 5表达与骨肉瘤转移有关 ,骨肉瘤中survivin与NF κB表达正相关。结论 凋亡抑制基因survivin与核因子 κB在骨肉瘤细胞中均异常活化 ,进而参与了骨肉瘤的发生和发展 ,二者对骨肉瘤的作用可能存在密切的关联。

脂质过氧化对血管内皮细胞促增殖活性的影响

为探讨脂质过氧化对血管内皮细胞源生长因子的影响，以氢过氧化枯烯作用于培养的牛主动脉内皮细胞后，收集内皮细胞条件培养基，并用肝素亲和层析法处理，分组测定其对3T3细胞3H-胸腺嘧啶核苷掺入率的影响，并用放射免疫法测定各脂质过氧化作用组内皮细胞培养基中内皮素的含量。结果发现．氢过氧化枯烯使培养的内皮细胞的脂过氧化物蓄积增加，且内皮细胞条件培养基对3T3细胞的DNA合成有促进作用．对Swiss3T3细胞的促增殖活性主要存在于非肝素结合部分。氢过氧化枯烯作用后的内皮细胞的内皮素分泌水平比对照组增加。由此推测脂质过氧化作用引起的内皮细胞对平滑肌细胞的促增殖活性可能与内皮素等非肝素结合的分子有关。

脂质过氧化对血管内皮细胞源性生长因子合成和基因表达的影响

本研究以氢过氧化枯烯作为脂质过氧化反应的引发剂，作用于培养的牛主动脉内皮细胞，制备内皮细胞条件培养液，测定其对Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成的影响；并以抗血小板源性生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）抗体中和实验和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析测定了脂质过氧化作用对内皮细胞ＰＤＧＦ产生的影响。结果表明：氢过氧化枯烯使内皮细胞内脂过氧化物蓄积；氢过氧化枯烯组内皮细胞条件培养液作用的Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞［３Ｈ］－ＴｄＲ的掺入量明显高于正常对照组；以抗ＰＤＧＦ－ＡＡ、抗ＰＤＧＦ－ＢＢ中和抗体处理后，氢过氧化枯烯作用组的内皮细胞条件培养液对Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞的增殖促进活性未见减弱；并且以氢过氧化枯烯作用后内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ的水平比正常组有所减低。提示，由氢过氧化枯烯引发的脂质过氧化反应，使内皮细胞源性生长因子的分泌增加；并且可能为ＰＤＧＦ以外的分子物质。

骨肉瘤组织中Survivin基因表达及其与细胞周期蛋白D1表达的关系

目的 :探讨骨肉瘤中抗凋亡基因Survivin的表达状态及其与细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达的关系。方法 :采用原位杂交、免疫组织化学技术、DNA原位末端标记 (TUNEL)法检测 3 8例骨肉瘤、15例骨软骨瘤、5例正常骨组织中SurvivinmRNA表达及骨肉瘤组织中cyclinD1表达和细胞凋亡情况 ,比较SurvivinmRNA表达与骨肉瘤临床病理参数及cyclinD1表达的关系。结果 :SurvivinmRNA在正常骨和骨软骨瘤组织无明显表达 ,但显著表达于骨肉瘤中 65 8% ( 2 5 /3 8) ,其表达率与骨肉瘤组织学分级无关 ,与WHO分型及转移有关 ,P <0 0 5 ;骨肉瘤细胞凋亡指数(AI)均值为 8 3 % ( 0～ 17% ) ,Survivin阴性组AI值显著高于阳性组 ,P <0 0 1;骨肉瘤中cyclinD1过度表达 ( 71 1% ,2 7/3 8) ,其与Survivin表达正相关 ,rs=0 3 70 ,P <0 0 5。结论 :Survivin选择性表达于骨肉瘤组织 ,通过抑制细胞凋亡 ,并与cyclinD1协同作用参与骨肉瘤的发生发展 ,Sur

TNP-470抑制肿瘤血管内皮细胞增殖的作用机制

肿瘤血管形成是一个复杂的过程 ,包括内皮细胞增殖、迁移、分化 ,最后形成管状结构 ,肿瘤的生长和侵袭离不开血管新生。TNP 470O (氯乙酰 氨甲酰基 )烟曲霉醇 ,是一类人工合成的烟曲霉素类衍生物 ,它可抑制肿瘤微环境中新生血管形成 ,从而发挥其强有力的抗肿瘤生长及转移的能力。此外 ,TNP 470还能增强放、化疗的效果 。

抗氧化剂对脂质过氧化内皮细胞表达细胞粘附分子的影响

为探讨抗氧化剂维生素Ｅ和元素硒对脂质过氧化诱导内皮细胞表达细胞粘附分子及单核细胞粘附的影响，用联胺诱发培养内皮细胞脂质过氧化，检测维生素Ｅ和元素硒对单核细胞粘附的影响，用免疫组化及共焦显微镜观察维生素Ｅ和元素硒对内皮细胞表达血管细胞粘附分子１ 及内皮细胞白细胞粘附分子１ 的影响。结果显示抗氧化剂维生素Ｅ和元素硒可抑制内皮细胞脂质过氧化，抑制血管细胞粘附分子１ 及内皮细胞白细胞粘附分子１ 表达，减少单核细胞粘附。提示抗氧化剂有可能通过抑制内皮细胞表达细胞粘附分子。

生存素反义寡核苷酸促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡

目的:探讨生存素(survivin)反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN)对顺铂(diamminedichloroplatinum,DDP)诱导骨肉瘤细胞凋亡的促进作用。方法:通过合成靶向survivin的ASODN转染骨肉瘤OS732细胞并与DDP联合作用,同时设空白对照组、正义(SODN)组及DDP组进行比较。采用RTPCR、免疫细胞化学法检测各组细胞survivinmRNA和蛋白表达状态,流式细胞仪(flowcytometry,FCM)、吖啶橙/溴化乙锭(acridineorange/ethidiumbromide,AO/EB)染色法检测各组细胞凋亡水平和形态,MTT法检测细胞生长抑制情况。结果:与空白对照组、SODN组及DDP组相比,ASODN转染组细胞survivinmRNA及蛋白表达明显减弱,细胞凋亡水平较空白对照组、SODN组相应提高,细胞萎缩、染色质浓缩呈典型凋亡改变,细胞生长相对受抑;上述指标在ASODN+DDP组变化更为明显,其细胞凋亡指数(apoptoticindex,AI)和细胞生长抑制率(inhibitionratio,IR,61.36%)明显高于各单“药”组(SODN组6.81%、ASODN组31.82%和DDP组41.35%)及SODN+DDP组(45.45%),P<0.05。结论:ASODN能够特异性封闭骨肉瘤OS732细胞中survivin基因表达,使其功能相应受抑,增加细胞对DDP敏感性,进而增进DDP诱导骨肉瘤细胞凋亡效应。

脂质过氧化对器官培养动脉内皮细胞的损伤及抗氧化药物的保护作用

本实验建立了稳定的动脉器官培养方法并以联胺作用于培养的动脉引发脂质过氧化反应,系统地观察硒、维生素E及人参皂甙对内皮细胞脂质过氧化损伤的保护作用。结果表明:联胺激发和促进了脂质过氧化反应引起脂质过氧化物含量增加,内皮细胞生物膜系统损伤及PGI_2合成功能降低。而预先用200 ppb硒、50μg/ml维生索E、10μg/ml人参皂甙作用于动脉,可抑制联胺引起的组织脂贡过氧化物含量升高,使内皮细胞生物膜系统损伤程度减轻并增加PGI_2合成能力。表明硒、维生素E、人参皂甙在一定程度上对内皮细胞过氧化损伤有保护作用,可能对动脉粥样硬化有防治作用。这为抗氧化剂特别是人参皂甙作为抗氧化药物在临床上合理应用提供一定的理论依据。