法医学损伤时间推断:过去、现在与未来

损伤时间(wound age)是指人体器官组织损伤后至检验时所经历的间隔时间。就被鉴定对象而言,损伤时间推断(wound age estimation)包括人体死亡前形成的损伤和活体上的损伤所经历的时间推断。有些情况下机体内源性因素导致的器官组织损害,如脑出血或梗死、蛛网膜下腔出血、硬脑膜下或硬脑膜外出血、心肌梗死、粥样硬化斑块、血栓、肿瘤等病变的形成时间也需要在法医学鉴定中加以判断,均属于损伤时间推断的范畴。

静脉血栓形成时间推断的法医学研究进展

静脉血栓脱落导致的肺血栓栓塞症(pulmonary thromboembolism,PTE)是法医学实践中常见的猝死原因之一。对于一些机体受创伤后因PTE死亡,或是以非血栓相关疾病收治入院期间因PTE死亡的案例,需要法医病理学工作者分析创伤或医疗行为与静脉血栓发生之间的时间顺序,进而分析其因果关系。本文总结了法医学领域有关静脉血栓形成时间推断的研究成果,并对今后的研究进行了简要展望,以期为PTE的法医学鉴定提供参考,并为后续的研究指引方向。

小鼠骨骼肌挫伤修复过程中周细胞数量变化及其与损伤时间相关性

目的观察小鼠骨骼肌挫伤后不同时间段周细胞数量变化规律,并探讨其在损伤时间推断中的作用。方法制作小鼠腓肠肌挫伤模型,应用免疫荧光染色法对小鼠骨骼肌挫伤后1、3、5、7、9、14、28d的周细胞形态及数量进行检测。结果与正常骨骼肌周细胞细长形态相比,挫伤区周细胞体积增大、形态变圆,胞核呈圆形,其中部分周细胞表达卫星细胞标记物配对盒转录因子(paired-box transcription factor,Pax7)或生肌决定因子(myoblast determination,MyoD) 1。挫伤后骨骼肌周细胞数量变化具有时间规律性,并随损伤时间延长呈单峰性分布。挫伤中心区周细胞数量于挫伤后5d达到峰值,挫伤周边区周细胞数量在挫伤后5d和7d达到峰值。结论小鼠骨骼肌挫伤后,挫伤区周细胞数量变化具有一定的时间规律性,提示其可能作为肌肉损伤时间推断的一个参考指标,并参与骨骼肌损伤后的肌肉修复再生过程。

人脑皮质挫伤后不同细胞Nrf2的表达

目的观察核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid derived 2-related factors,Nrf2)在人脑皮质挫伤后不同时间段不同细胞内的表达变化,并探讨其在脑损伤时间推断中的应用。方法选取36例人脑组织,其中6例为对照,30例为不同时间段的脑皮质挫伤,分成伤后0~1h、3~6h、1~3d、5~7d、10~14d组,每组6例。石蜡切片,HE染色,观察损伤后的病理形态学变化,应用免疫荧光双染色法检测Nrf2在神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达情况,计数阳性细胞数并进行统计分析。结果外伤后1~3d神经元出现死亡,Nrf2在伤后的神经元内表达增高,阳性细胞率在1~3d达到高峰。星形胶质细胞伤后1~3d活化,5~7 d达到高峰,10~14 d软化灶形成。伤后小鼠抗人胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic pro?tein,GFAP)阳性细胞逐渐增多,伤后5~7d达高峰,而Nrf2在GFAP阳性细胞比例相对稳定。外伤后,小鼠抗人离子钙接头蛋白分子1(ionized calcium-binding adapter molecule 1,IBA1)阳性细胞逐渐增多、激活,Nrf2在IBA1阳性细胞中的表达比例逐渐增高,伤后5~7d达到高峰,之后开始下降。结论Nrf2在不同细胞内的表达参与不同细胞损伤后的生物学功能,其在单种细胞的动态表达存在时间规律性,有望为人脑挫伤后损伤经过时间推断提供新的参考指标。

小鼠脑挫伤后CB2R的表达变化与损伤时间的关系

目的检测小鼠脑挫伤后不同时间点大麻素2型受体(cannabinoid type 2 receptor,CB2R)的表达情况,并探索其与损伤时间的相关性。方法通过PCI3000精密颅脑损伤撞击器建立小鼠脑挫伤模型,利用免疫组织化学染色、免疫荧光染色和Western印迹法检测不同损伤时间点损伤区周围CB2R的表达变化。结果免疫组织化学染色结果显示,假手术组脑皮质中仅少量细胞呈CB2R阳性表达,脑挫伤后CB2R阳性细胞率逐渐升高,于伤后12h和伤后7d两次达到高峰,随后逐渐下降,至伤后28d基本恢复至正常水平。Western印迹法检测结果与免疫组织化学染色结果一致。免疫荧光染色结果显示,脑挫伤后CB2R阳性神经元、CB2R阳性单核细胞、CB2R阳性星形胶质细胞数与总细胞数的比值变化均呈单峰模式,分别于伤后12h、1d、7d达到高峰。结论小鼠脑挫伤后CB2R在神经元、单核细胞及星形胶质细胞中的表达提示,其可能参与调节这些细胞的生物学功能。脑挫伤后CB2R的动态表达存在时间规律性,有望成为法医学脑挫伤损伤时间推断的生物学指标。

小鼠骨骼肌挫伤愈合过程中神经肌肉接头降解及再生与损伤时间的关系

目的研究小鼠骨骼肌挫伤愈合过程中神经肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)降解及再生的形态学变化,探讨NMJ降解及再生与损伤时间的相关性。方法将50只健康成年雄性小鼠随机分为10组,其中9组为实验组,1组为对照组。应用免疫荧光染色技术,以高分子量神经丝蛋白(neurofilament protein-H,NF-H)标记神经丝,突触囊泡蛋白(synaptophysin,Syn)标记突触前膜,乙酰胆碱受体(acetylcholine re?ceptor,AChR)标记突触后膜,检测小鼠骨骼肌挫伤后不同时间点NMJ再生的形态学变化。结果骨骼肌挫伤后挫伤交界区NMJ突触前膜及神经丝开始降解,3d左右降解完全,之后逐渐再生,至21d左右再生大致完成,基本达到对照组水平。突触前膜和后膜数量之比呈现先下降后上升、最终与对照组水平相当的趋势。结论小鼠骨骼肌挫伤修复过程中,挫伤交界区NMJ的形态学变化与损伤时间具有相关性,有望成为法医学骨骼肌损伤时间推断的生物学指标之一。

外伤性迟发性脾破裂损伤时间推断1例

1案例1.1简要案情李某,男,40岁。某年3月13日10:00许,因琐事被他人脚踢左上腹部一下,之后数日常感不适,未予治疗。3月20日李某又被另一人踢右臀部一脚。当晚22:00许,李某开始感觉腹部明显疼痛。次日凌晨04:00许,李某上厕所时摔倒在地,被送至医院。经检查确诊为脾破裂,于当日行脾摘除手术,治愈后出院。因案件需要,相关部门委托本中心对李某脾破裂的损伤时间进行法医学鉴定。1.2病史摘要李某于某年3月21日17:00因"左上腹外伤8d,腹痛伴头晕乏力1d"被收治入院。腹部彩超示:脾内可见范围约9.8cm×7.4cm的混合性回声,形态不规则,其内可见血流显示;腹腔可见游离液性暗区。腹部CT示:脾增大,其内密度不均匀,腹腔积液。

基于玻璃体液代谢物的水中大鼠淹没时间推断

目的采用LC-MS/MS代谢组学技术结合数据分析,检测水中大鼠尸体死后早期玻璃体液中代谢谱变化及差异,探讨其用于早期死后淹没时间(postmortemsubmersioninterval,PMSI)和死亡原因推断的可行性。方法于自然湖水中造模,将100只SD大鼠随机分为溺死组(50只)和死后[二氧化碳(CO_(2))窒息]即刻入水组(50只),分别于死后0、6、12、18及24 h从每组中取10只大鼠提取玻璃体液进行代谢组学检测,其中8只构建训练集模型、2只作为测试集样本。通过PCA及PLS多元统计分析探索训练集样本中不同PMSI及死因间的代谢谱差异,进而应用随机森林(randomforest,RF)算法筛选生物标志物并以此构建模型。结果PCA及PLS分析可观察到玻璃体液代谢谱变化具有时间规律性,但不同死因间未发现明显差异。应用RF算法最终筛选到13种时间相关性较好的小分子生物标志物,基于该指标集构建了简化PMSI推断模型,测试数据表明模型预测的平均绝对误差为0.847h。结论水中大鼠尸体玻璃体液中筛选出的13种代谢标志物与早期死后淹没时间具有良好的时间相关性,应用RF构建的简化PMSI推断模型可用于PMSI的推断。此外,玻璃体液代谢物不能用于早期水中尸体的死因鉴别。