PCR-SSCP技术分析线粒体DNA多态性及其法医学应用

目的探讨SSCP法在线粒体DNA分析中的应用及其在法医实际检案中的意义。方法利用PCR方法直接扩增D-LOOP区的HVI16106-16297区域192bp片段作为目的片段,进行SSCP分型。检验150例随机个体、10例正常组织和5例甲醛固定石蜡包埋的组织。结果在150例随机个体中,SSCP检测发现9种单倍型,DP值为0.881。在10例正常组织中,各个组织的SSCP带型完全相同。5例包埋组织的SSCP分型与对照组织一致。结论 SSCP技术分析线粒体DNA有较高的鉴别能力,适用于陈旧降解检材的检验。

COMT基因与精神分裂症的相关性及法医学意义

儿茶酚氧位甲基转移酶(catechol-O-methyltransferase,COMT)基因编码产生儿茶酚氧位甲基转移酶,该基因的遗传变异可能影响COMT的表达量及代谢活性,致使中枢神经系统的儿茶酚胺神经递质的有效浓度发生变化,导致中枢神经系统功能异常而与精神分裂症相关。本文对COMT基因的遗传多态性、遗传变异进行了综述,包括COMT基因的SNP、单倍型与精神分裂症的关系,与攻击或暴力行为的关系,与精神分裂症患者额叶认知功能的关系等。COMT基因遗传变异与精神分裂症患者攻击或暴力倾向的相关性研究对于司法精神病鉴定具有潜在的应用价值。

中国北方汉族、维吾尔族、哈萨克族DYS19基因座的遗传多态性

目的 ::研究DYS19基因座在中国北方汉族、维吾尔族、哈萨克族群体中的遗传多态性及其法医学应用。方法 :应用聚合酶链反应后变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物结合银染显带的方法 ,对 10 1例北方汉族、5 6例维吾尔族、30例哈萨克族无关男性个体的DYS19基因座进行检测。结果 :DYS19基因座在 3个群体中共检出 5种等位基因 ,等位基因频率分布范围分别为 0 .0 6 9～ 0 .5 94 ,0 .0 71～ 0 .5 0 0 ,0 .10 0～ 0 .6 6 7;个人识别机率分别为 0 .6 0 0 ,0 .6 75 ,0 .4 91。χ2 检验表明等位基因分布具有明显的人群差异。家系调查符合单体父系遗传方式。结论 :DYS19基因座个人识别机率高 ,属较高鉴别能力的遗传标记系统 ,且具有明显的人群分布差异 。

FUT2/01基因座在中国北方汉族人群中的多态性

目的调查STR基因座FUT2/01在中国人群中的基因结构特征及其在中国人群中的多态性分布特点,并对其法医学应用前景进行探讨。方法应用PCR方法扩增FUT2/01基因,DNA测序确定所有等位基因的序列;常规聚丙烯酰胺凝胶电泳调查中国人群中FUT2/01基因座的多态性分布,同时应用荧光标记引物进行自动化检测分析和基因型鉴定。结果DNA测序结果仅显示核心序列的重复数目变化所导致的长度差异;在所调查的中国汉族人群162例个体中共发现9种等位基因和28种基因型,系统的个体识别率为0.9639,父权排除率为0.6266。此外,荧光标记引物经自动化检测可对该基因座进行良好的分型。结论FUT2/01基因座在中国汉族人群中表现出高度的杂合性和个体特异性,在法医学鉴定中具有较高的应用价值。

中国辽宁汉族DYS390、DYS389Ⅰ/Ⅱ基因座及单倍型研究

目的 :研究中国辽宁汉族群体 Y染色体特异基因座 DYS390、DYS389 / 的遗传多态性及其法医实践中的应用价值。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)后变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物结合银染显带的方法 ,对 DYS390、DYS389 / 基因座在 98例辽宁汉族无关男性个体的等位基因分布进行调查。结果 :DYS390基因座共检出 5种等位基因 ,频率分布在 0 .0 10～ 0 .480之间 ,个人识别机率为 0 .6 37;DYS389 基因座共检出 3种等位基因 ,频率分布在 0 .2 2 4～ 0 .439之间 ,个人识别机率为 0 .6 44 ;DYS389 基因座共检出 5种等位基因 ,频率分布在0 .0 2 0～ 0 .36 7之间 ,个人识别机率为 0 .72 3。上述基因座组成的单倍型在 98名无关男性中共观察到 31种 ,单倍型的个人识别机率达到 0 .948,家系调查符合单体父系遗传方式。结论 :DYS390、DYS389 / 基因座个人识别机率高 。

荧光标记LDR-PCR复合扩增方法对高度降解DNA检材的SNPs分型研究

目的构建一套基于连接酶检测反应(LDR)的荧光标记PCR复合扩增体系,为解决高度降解DNA法医学分析提供新的策略。方法选择8个单核苷酸多态性(SNPs)位点(rs10802248、rs10516197、rs10488372、rs2278945、rs4757318、rs4887255、rs4889002和rs9304473),设计合成各SNPs位点的LDR探针和连接产物PCR引物,通过LDR将连接产物进行PCR扩增,并将扩增产物进行毛细管凝胶电泳,构建复合扩增SNPs分型体系。结果使用荧光标记LDR-PCR复合扩增方法,对不同个体的8个SNPs位点进行分型,分型结果与测序结果完全一致;对于甲醛固定石蜡包埋组织(FFPET)检材高度降解的DNA样品,荧光标记LDR-PCR复合扩增体系能够实现8个SNPs位点的准确分型。结论荧光标记LDR-PCR复合扩增方法能够对8个SNPs位点进行一次性分型,结果准确、可靠,是一种简单、高效并且较为实用的SNPs分型新方法,适用于高度降解检材的检测。

中国藏族与维吾尔族Y染色体DYF155S1基因座的遗传多态性与民族差别

目的 :探讨Y染色体DYF15 5S1基因座的遗传多态性及民族间差异。方法 :应用小卫星可变重复序列PCR荧光显谱及DNA序列测定技术 ,对 12 2例中国藏族和维吾尔族男性个体的DYF15 5S1基因座的多态性进行检测。结果 :共检出 5种重复序列类型 ,包括 1型、3型、4型与新的 7型和未知型 ,7型是在 3型的基础上T2 2A置换所形成 ,在 72例藏族群体中发现 18例 ,维吾尔族群体中未检出 ,可作为民族特征性遗传标记。重复序列的排列方式以 3 13 4顺序多见 ,在藏族和维吾尔族群体中各占 61.1%和 48.0 % ,是黄种人的特点。 13 4顺序在维吾尔族群体中占第二位 ,为 3 2 .0 % ,3′端的 4型重复序列的平均数目在维吾尔族群体为 18.0条 ,明显高于藏族群体的 13 .3条 ,显示出维吾尔族群体有接近白种人的特点 ,同时存在黄种人与白种人混杂的痕迹。藏族群体的 2 5 .0 %为73 13 4排列。结论 :DYF15 5S1基因座具有非常高的遗传多态性和明显的民族差异 。

HTR1A基因与相应精神疾病的关联及法医学意义

五羟色胺受体1A基因的遗传变异通过影响受体的表达量或与配体结合的活性变化而增强或减弱5-HT的功能,在抑郁症及部分精神系统疾病的发病机制中起着重要的作用。文章通过对HTR1A基因遗传学多态性与部分精神系统疾病的关系进行综述。研究HTR1A基因与抑郁、恐慌、冲动易怒等情绪变化在法医司法精神病鉴定中的意义,并从基因-心理-社会模型的角度探讨犯罪行为的成因。

大鼠脑损伤后caspase-3表达的时间规律性研究

目的 :探讨大鼠脑损伤后半胱天冬酶 3(caspase 3)在神经元、神经胶质细胞表达的时间规律性。 方法 :以冲击应力σd为 35 5 .0 9kPa致大鼠脑损伤后不同时间段分别应用原位杂交、免疫组化、免疫组化双染色技术检测caspase 3mRNA和蛋白的表达强度 ,用图像分析系统测定阳性反应物平均灰度 ,进行统计学处理。结果 :caspase 3mRNA及蛋白在对照组为弥散分布 ,弱表达 ;分别于伤后 15 ,30min表达开始呈现增强趋势 ,至伤后 1d ,表达达到峰值 ,平均灰度值分别为 12 9.76± 2 .79,12 8.13± 1.97,与对照组、伤后 12h组比较均具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,并维持高水平表达分别至伤后 7d(12 3.34± 1.6 0 )、伤后 4d(12 0 .34± 2 .96 ) ,与对照组比较均具有显著性差异(P <0 .0 5 )。免疫组化双染结果显示 ,伤后阳性细胞包括神经元和星形胶质细胞。结论 :脑损伤后caspase 3mR NA及蛋白的表达具有一定的时间规律性 ,可运用于法医学推断脑损伤的形成时间。

福尔马林固定石蜡包埋组织中DNA提取

由于甲醛介导的DNA损伤和石蜡对DNA提取的阻碍作用,使得常规DNA提取方法很难从福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中获取高质量的DNA。近年来,众多学者的研究表明,通过改良预处理方法,优化蛋白酶K消化作用,简化DNA提取步骤,纯化DNA提取物等,可以有效提高FFPET中提取的DNA质量,为FFPET的DNA分析奠定了基础。

谷氨酸受体基因单核苷酸多态性与精神分裂症的关联

谷氨酸是人类神经系统中重要的兴奋性神经递质,通过与受体结合发挥生物学作用。当编码受体的基因异常时,可能导致精神疾病发生。本文通过回顾相关研究,发现诸如GRIN1、GRIN2B、GRM3等受体基因上的rs11146020、366C/G、rs1468412与精神分裂症相关联;同时也存在矛盾的研究结果,表明精神分裂症可能为多因素、多位点、多基因复杂遗传疾病。部分位点如GRIN2B上的366C/G、2664C/T,GRIK2上的rs1408766(C/T)的遗传多态性较好,可能成为法医学个人识别与亲权鉴定的新指标。该领域研究在司法精神病的鉴定工作中可能具有潜在的意义。

TAP的研究进展

抗原处理相关转运体蛋白(transporter associated with antigen processing,TAP)在内源性抗原提呈过程中有重要作用,负责内源性抗原从胞浆到内质网(ER)腔的转运。TAP异二聚体由TAP1和TAP2蛋白组成,每个亚基各有一个核酸结合区(NBD)和一个跨膜区(TMD)。TAP对抗原肽的转运可分为不依赖ATP的TAP与抗原肽的结合和ATP依赖性的抗原肽到内质网的转运两个基本步骤。人类TAP1和TAP2等位基因在不同种族和地区有不同的分布。TAP与一些自身免疫性疾病、肿瘤和病毒感染性疾病的发生有一定的相关性。

HGF,uPA在脑胶质瘤中的表达及意义

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在人脑胶质瘤细胞中的表达及与胶质瘤生物学行为的关系。方法:免疫组织化学SABC方法检测HGF、uPA的表达。结果:8例正常脑组织HGF、uPA表达阴性;62例脑胶质瘤组织中,随病理分级的增加,HGF、uPA表达增加,差别十分显著(P<0.01)。结论:HGF,uPA的表达可能在促进脑胶质瘤的细胞增殖、恶性演变和侵袭过程中起重要作用。

ABO血型A201等位基因表达A抗原活性的分析

目的了解ABO血型系统中A201等位基因表达的A抗原活性。方法采用血型血清学方法检测1个家系2代3人血液和唾液各1份标本的ABO血型表型;应用Identifiler法医基因分析试剂盒作亲缘关系鉴定;PCR扩增ABO基因所有外显子区后作DNA测序分析,PCR-RFLP法同步检测A201等位基因中的序列变异。结果亲缘关系鉴定显示在Identifiler的15个遗传标记系统中,父母均能够提供全部相应的等位基因给孩子,确定存在亲缘关系;然而采用不同来源的3份抗体作ABO血型检验时,出现其中之一的正定型试验否定母子关系、反定型不能排除母子关系的矛盾现象。3个标本ABO基因的测序:父、母、子的基因型分别为O01/O01、A201/B101和A201/O01,支持反定型结果,提示A201等位基因在AB和A表型中所表达的A抗原活性存在明显的差异。PCR-RFLP法成功地同步鉴定出A201等位基因中的2个主要变异点467C/T和1059-1061delC。结论 ABO血型A201基因在AB和A表型中表达A抗原活性可能因检测抗体不同表现出一定的差异;基因测序与PCR-RFLP法同步分析可简便快速地鉴定A201等位基因中的467C/T和1059-1061delC。

CCK受体基因多态性及与部分精神疾病症状的相关性

胆囊收缩素(CCK)不仅存在于消化系统,而且还广泛存在于中枢及外周神经系统,并以神经递质的形式通过其受体(CCK-R)发挥着重要的生理作用。CCK-R有两种类型,CCK-AR和CCK-BR。CCK-R基因具有遗传多态性,并通过影响或改变CCK对中枢神经系统的作用强度而与酒精中毒、精神分裂症、恐慌症等人类精神疾病密切相关。CCK-R基因遗传多态性的研究可能为法医学个人识别与亲权鉴定新提供新的遗传标记及为司法精神病鉴定提供参考性遗传学指标。

咳嗽变异性哮喘与肺炎支原体感染关系的Meta分析

目的探讨咳嗽变异性哮喘(CVA)的发生和肺炎支原体感染(MP)之间的关联,从而为咳嗽变异性哮喘的发病因素提供循证医学证据。方法按照统一的检索策略计算机检索PubMed、Cochorane、CNKI、万方数据库和维普数据库,搜集近10年有关咳嗽变异性哮喘与肺炎支原体感染关系的全文文献,以病例组和对照组患者血清MP-IgM滴度变化为效应指标,在全面文献回顾的基础上对文献进行筛选、评价和数据提取。应用Stata10.0软件中的Meta分析方法对各研究原始数据进行统计分析,计算合并OR值及95%CI,并进行敏感性分析和发表偏倚的估计。结果严格依照纳入标准和排除标准,共纳入文献21篇。病例组1467例患者,对照组1399例,病例组血清MP-IgM比对照组高4.32倍,95%CI为3.589～5.252。结论肺炎支原体感染患者中MP-IgM滴度的升高与咳嗽变异性哮喘发生的密切相关。

GRIN1基因-855G/C和-1140G/A位点遗传多态性

谷氨酸（glutamate．Glu）是哺乳动物脑内重要的兴奋性神经递质．Glu通过作用其受体发挥着重要的生物学功能。Glu受体基因存在单核苷酸多态性（single nueleotide polymorphism．SNP），为探讨其在法医学中的应用价值．本研究调查了Glu受体基因之一GRIN1启动子区域-855G／C与-1140G／A2个SNP位点在中国北方汉族群体中的频率分布。

百草枯诱导的SH-SY5Y细胞中核连蛋白2基因的表达变化

目的检测核连蛋白(NUCB)2在百草枯(PQ)诱导的SH-SY5Y细胞中的表达变化,分析NUCB2在PQ引起的SH-SY5Y细胞凋亡中的作用机制。方法采用MTT法进行SH-SY5Y细胞毒性分析。选择PQ作用的最佳浓度和时间点,进一步收取经PQ处理后的SH-SY5Y总RNA,首先采用RT-PCR方法观察NUCB2的表达趋势,然后采用real-time PCR方法进行NUCB2基因进行表达变化检测,采用ΔΔCt法进行定量比较分析。结果 MTT方法在酶标仪490 nm波长下,分析得到PQ的最佳作用浓度和时间是0.5 mmol/L作用24 h,此时细胞活力较对照组低约41.67%;采用ΔΔCt法进行定量比较分析,发现NUCB2在mRNA水平的表达量明显降低(P=0.001 6);Western印迹检测发现SH-SY5Y细胞经PQ诱导后引起了caspase-3酶原形式的表达量降低(P<0.05)。结论 NUCB2基因在经PQ诱导后的SH-SY5Y细胞中表达量明显降低,分析其可能在神经细胞的凋亡机制中发挥重要作用。