喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS-6抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS-6对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等方面的作用。方法:CCK8检测CWS-6对胰腺癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测CWS-6对胰腺癌细胞周期分布的影响;细胞划痕实验检测CWS-6对胰腺癌细胞迁移的影响;Transwell实验检测CWS-6对胰腺癌细胞侵袭的影响;激光扫描共聚焦显微(Confocal)实验检测CWS-6对胰腺癌细胞微丝的影响;Western blotting实验检测CWS-6对胰腺癌细胞PAK4激酶的活化及其下游与迁移侵袭相关蛋白表达的影响。结果:CWS-6对胰腺癌细胞的增殖以及周期影响不明显;在5μmol/L时对胰腺癌细胞的迁移及侵袭能力有显著的抑制作用;CWS-6对PAK4激酶的活性以及PAK4下游的细胞骨架相关靶蛋白的表达有抑制作用。结论:CWS-6是通过抑制PAK4激酶的活性来抑制细胞增殖以及通过影响PAK4下游细胞骨架相关蛋白抑制微丝的解聚从而抑制胰腺癌细胞的迁移及侵袭能力。

CRISPR/Cas9沉默PAK5抑制乳腺癌细胞增殖并促进细胞衰老

p21活化激酶5(p21-activated kinase 5,PAK5)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,调节多种细胞进程,包括细胞骨架重构、细胞增殖、迁移和侵袭。研究表明,PAK5是调控乳腺癌进程的关键因子,但与衰老关系的研究尚未见报道。本研究利用CRISPR/Cas9慢病毒感染方法,构建敲低PAK5的人乳腺癌MDA-MB-231和BT474稳转细胞系。通过CCK-8和克隆形成实验检测敲低PAK5对乳腺癌细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测敲低PAK5对细胞周期的影响;通过β-半乳糖苷酶染色观察敲低PAK5对细胞衰老的影响;Western印迹检测敲低PAK5的MDA-MB-231和BT474细胞衰老相关蛋白质p53、p21和p16的表达;使用CHX与MG132处理细胞,探究PAK5对p53蛋白质表达可能的调控机制。结果显示,敲低PAK5抑制细胞增殖(P<0.05),使细胞停滞在G0/G1期;而且,敲低PAK5通过上调细胞衰老相关蛋白质p53、p21及p16的表达(P<0.05)促进细胞衰老。进一步研究证明,PAK5可能泛素化降解p53。这些发现表明,敲低PAK5能够抑制乳腺癌细胞增殖,同时促进细胞衰老,为乳腺癌治疗提供新思路。

利用生物信息学分析LMO2在乳腺癌中的表达和功能

目的探讨LMO2在乳腺癌中的表达及其共表达基因的生物学作用。方法通过Oncomine数据库挖掘LMO2在多种肿瘤中的表达水平,并基于基因表达谱数据动态分析(GEPIA)及人类蛋白质表达图谱(HPA)数据库检索LMO2在乳腺癌组织与正常组织中的表达差异。采用KM plotter数据库评估LMO2在乳腺癌中的预后价值。利用Coexpedia数据库构建LMO2在乳腺癌中的共表达基因网络,并用FunRich软件对score>3的共表达基因注释;通过GEPIA筛选出差异有统计学意义的关键基因,进一步分析LMO2与这些关键基因的相关性,并对这些基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集。结果乳腺癌组织中,LMO2 mRNA和蛋白表达较正常乳腺组织均明显下调(P<0.05),LMO2低表达预示着乳腺癌患者更差的预后。LMO2的共表达基因主要有ADGRL4、GIMAP6、PECAM1、TGFBR2、MEF2C、CD93、S1PR1、LHFP、GMFG、A2M、LDB2、KCTD12、PTPRB和CAV1。其生物学功能主要富集于信号传导等方面。其中,表达显著上调的基因有CAV1,显著下调的基因有GIMAP6、TGFBR2、LHFP和PTPRB(P<0.05)。LMO2与GIMAP6(r=0.51)、TGFBR2(r=0.46)、LHFP(r=0.52)、PTPRB(r=0.48)和CAV1(r=0.43)等关键基因的表达呈显著正相关。结论LMO2在乳腺癌组织中呈低表达,LMO2与GIMAP6、TGFBR2、CAV1等关键基因共同参与了乳腺癌发生相关的功能与通路。

小分子化合物G-749抑制胃癌细胞增殖和迁移

目的 研究小分子化合物G-749对人胃癌细胞MGC803和SGC7901的增殖和迁移的影响。方法 分别用不同浓度的G-749处理MGC803和SGC7901两种人胃癌细胞,CCK8实验和克隆形成实验检测G-749对胃癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测化合物对细胞周期的影响,划痕实验检测G-749对胃癌细胞迁移的影响。结果 化合物G-749能够抑制人胃癌细胞MGC803和SGC7901的增殖并存在剂量依赖关系,抑制细胞G_(0)/G_(1)期向S期的转变,并能明显抑制胃癌细胞的迁移。结论 化合物G-749对胃癌细胞有抑制作用,有望应用于胃癌细胞的治疗。

DDX5通过上皮-间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭

目的探究DEAD box RNA解旋酶-5(DEAD-box helicase 5,DDX5)蛋白对乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移作用的影响及其机制。方法利用慢病毒感染法,构建过表达Flag-DDX5的人乳腺癌MCF-7稳转细胞系,划痕实验和Transwell实验检测DDX5蛋白过表达后对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响;Western blot实验检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮-钙黏蛋白(E-cadherin),纤维连接蛋白(Fibronectin),波形蛋白(Vimentin)的表达。结果成功构建了稳定过表达DDX5的乳腺癌MCF-7稳转细胞系;DDX5蛋白过表达后,乳腺癌细胞迁移和侵袭能力明显增强,乳腺癌细胞E-cadherin的表达明显下调,Fibronectin与Vimentin的表达明显上调。结论DDX5可能参与乳腺肿瘤细胞EMT过程,促进乳腺癌的恶性转移,进而影响乳腺癌的进程。

N^(6)-甲基化腺苷修饰在乳腺癌中的研究进展

表观遗传学在乳腺癌的恶性进展中起到重要作用,其中N^(6)-甲基化腺苷(m^(6)A)修饰是最丰富的RNA修饰,参与调节乳腺癌细胞恶性行为的通路及癌细胞所处的肿瘤微环境。同时,乳腺癌发病率居于我国女性恶性肿瘤首位,近年来首次发病年龄趋于年轻化,是严重危及我国女性健康的疾病之一。然而,乳腺癌早期治疗预后较好。当晚期出现转移后,患者5年生存率差。m^(6)A作为一种可能用于乳腺癌早筛的生物标志物及新的药物治疗靶点,给乳腺癌的早期治疗提供了新的研究方向。本文系统地综述了m^(6)A修饰相关因子及其在乳腺癌恶性行为中发挥的调控作用,并列出现已知的一些靶向药物和潜在的早筛方法,为乳腺癌的诊断、治疗、监测提供新的思路。

ELF5在乳腺癌的表达及意义

目的研究E74-like factor 5 (ELF5)在乳腺癌的表达,探讨ELF5的表达与不同分型乳腺癌预后的关系。方法利用Oncomine数据库挖掘ELF5在乳腺癌组织中的表达;利用Kaplan-Meier Plotter分析ELF5表达水平与雌激素受体阳性/阴性表达乳腺癌生存的关系。结果 Oncomine数据库分析ELF5在乳腺癌中表达降低(P=8.29e^(-10));KM plotter数据库分析结果显示ELF5表达量与雌激素受体阳性表达的乳腺癌无复发生存(RFS)呈正相关,即高表达ELF5的患者无复发生存较高(P=0.008)。结论 ELF5在乳腺癌组织中表达低于癌旁正常组织,其表达水平越高预后越好。