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人LY6D基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
1
作者
邱宇
宁可
+1 位作者
李丰
李妍
《现代肿瘤医学》
CAS
2019年第14期2425-2429,共5页
目的:构建人LY6D真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达和定位。方法:提取HEK293T细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增LY6D基因的CDS序列,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具...
目的:构建人LY6D真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达和定位。方法:提取HEK293T细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增LY6D基因的CDS序列,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞HEK293T中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。然后利用激光扫描共聚焦显微镜观察LY6D在HEK293T细胞内的定位,最后Q-PCR检测过表达LY6D真核表达载体影响EMT关键基因的表达。结果:LY6D基因cDNA的编码区序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片断为387 bp,并进一步测序成功。Western blot检测到了pEGFP-LY6D融合蛋白的表达,分子量约为41 kDa。pEGFP-LY6D融合蛋白在HEK293T细胞中主要定位于细胞膜和细胞质。过表达LY6D真核表达载体减少E-cadherin的表达。结论:成功构建了LY6D基因cDNA的CDS序列的真核表达载体,pEGFP-LY6D蛋白在HEK293T细胞中主要定位于细胞膜和细胞质,LY6D过表达可以降低E-cadherin的表达。
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关键词
LY6D基因
质粒构建
基因表达与定位
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职称材料
题名
人LY6D基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
1
作者
邱宇
宁可
李丰
李妍
机构
中国医科大学生命科学学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室
出处
《现代肿瘤医学》
CAS
2019年第14期2425-2429,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:81372337)
文摘
目的:构建人LY6D真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达和定位。方法:提取HEK293T细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增LY6D基因的CDS序列,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞HEK293T中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。然后利用激光扫描共聚焦显微镜观察LY6D在HEK293T细胞内的定位,最后Q-PCR检测过表达LY6D真核表达载体影响EMT关键基因的表达。结果:LY6D基因cDNA的编码区序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片断为387 bp,并进一步测序成功。Western blot检测到了pEGFP-LY6D融合蛋白的表达,分子量约为41 kDa。pEGFP-LY6D融合蛋白在HEK293T细胞中主要定位于细胞膜和细胞质。过表达LY6D真核表达载体减少E-cadherin的表达。结论:成功构建了LY6D基因cDNA的CDS序列的真核表达载体,pEGFP-LY6D蛋白在HEK293T细胞中主要定位于细胞膜和细胞质,LY6D过表达可以降低E-cadherin的表达。
关键词
LY6D基因
质粒构建
基因表达与定位
Keywords
LY6D
plasmid construction
gene expression and localization
分类号
R730.2 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人LY6D基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
邱宇
宁可
李丰
李妍
《现代肿瘤医学》
CAS
2019
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