miR-365b-3p靶向结合FLI1抑制胶质瘤细胞血管拟态生成

目的本研究旨在探讨miR-365b-3p调控胶质瘤血管生成拟态的潜在机制。方法应用实时定量PCR检测miR-365b-3p在胶质瘤细胞系U87细胞中的表达水平;应用双荧光素酶报告基因分析系统检测miR-365b-3p和FLI1的结合作用;应用CCK-8法、Transwell法、体外管形成实验检测miR-365b-3p或FLI1表达变化对U87细胞增殖、迁移、侵袭和管形成能力的影响。结果miR-365b-3p在U87细胞中低表达,过表达miR-365b-3p显著抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及管形成能力。FLI1在U87细胞中高表达,沉默FLI1抑制胶质瘤细胞的管形成能力。miR-365b-3p通过靶向结合FLI13′UTR,抑制其mRNA和蛋白的表达。结论miR-365b-3p通过靶向结合FLI1抑制胶质瘤细胞血管拟态生成。

β-榄香烯抑制恶性黑色素瘤生长和侵袭

目的研究β-榄香烯(β-E)对恶性黑色素瘤细胞B16增殖和侵袭的影响及其相关机制。方法培养B16细胞,建立体外恶性黑色素瘤模型,应用MTT法检测β-E对B16细胞增殖能力的影响,应用Transwell方法检测β-E对B16细胞侵袭能力的影响,应用qRT-PCR和western-blot检测β-E对B16细胞MMP2mRNA和蛋白表达的影响。结果成功建立体外恶性黑色素瘤模型,β-E显著抑制B16细胞增殖和侵袭能力,抑制B16细胞中MMP2mRNA和蛋白表达,DDP也显著下调上述指标,且以上指标中与DDP组没有显著性差异。结论β-E显著抑制B16细胞增殖和侵袭能力,降低MMP2表达,提示β-E可能在抑制B16细胞增殖和侵袭能力过程中起重要作用。

MIAT过表达载体的构建及其对血肿瘤屏障通透性的影响

目的构建长链非编码RNA心肌梗死相关转录物(MIAT)过表达载体pcDNA3.1-MIAT,并研究其对血肿瘤屏障通透性影响。方法从与脑胶质细胞U87共培养的人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3(GECs)提取总RNA,用反转录聚合酶链式反应技术扩增出MIAT基因片段,通过无缝连接技术克隆到pcDNA3.1载体中进行序列分析,转染重组质粒pcDNA3.1-MIAT到GECs中,real-time PCR检测转染效率,应用跨内皮电阻测量系统和辣根过氧化物酶渗漏实验分析血肿瘤屏障通透性的变化。结果成功扩增出MIAT基因,成功构建pcDNA3.1-MIAT表达载体,Blast序列分析与GenBank中NR00349一致。转染pcDNA3.1-MIAT后,96h转染效率最高,过表达MIAT组跨内皮阻抗值最低,辣根过氧化物酶流量最高,血肿瘤屏障通透性最高。结论成功构建pcDNA3.1-MIAT表达载体,过表达MIAT使血肿瘤屏障通透性升高。

β-榄香烯抑制B16恶性黑色素瘤细胞的EPHA2表达和血管生成拟态

目的研究β-E对B16恶性黑色素瘤细胞上皮细胞激酶(epithelial cell kinase,EphA2)表达和血管生成拟态的影响及其相关机制。方法培养B16细胞,建立体外恶性黑色素瘤模型,应用qRT-PCR法和Western-blot法检测β-E对B16细胞EPHA2mRNA和蛋白表达影响,应用Matrigel诱导血管生成实验检测β-E对B16细胞血管生成拟态生成能力的影响。结果成功建立体外恶性黑色素瘤模型,β-E显著抑制B16细胞EPHA2mRNA和蛋白表达,抑制B16细胞血管生成拟态生成能力。结论β-E可在治疗恶性黑色素瘤中起重要作用。