PBL教学模式在病原生物学、免疫学及感染病学课程整合改革中的探索与实践

探讨问题导向教学(PBL)方法在病原生物学、免疫学及感染病学课程整合改革中的教学效果及意义。以中国医科大学2009级七年制临床系学生240人为研究对象,随机分为实验组和对照组各120人。实验组采用PBL教学方法,教学内容采用病原生物学、免疫学及感染病学整合,对照组采用传统教学方法,教学内容为传统病原生物学课程,2组由相同教师授课,采用期末考试和教学效果自评调查问卷的方式评价教学效果。实验组与对照组相比,期末考试成绩无统计学差异(P>0.05),但病例分析题成绩有统计学差异(P<0.01)。2种学生的自评调查问卷中,实验组的自学能力、团队协作能力及发现问题解决问题的能力均显著高于对照组(P均<0.01)。PBL教学模式能有效提高教学质量,具有一定的示范及推广价值。

搞好“病原生物学”教学及促进学科发展的实践与体会

将“医学微生物学”和“人体寄生虫学”整合为“病原生物学”符合现代医学教育的取向。中国医科大学是将两个教研室从形式到实质性合并为"病原生物学"教研室,并且将两门课完全融合成一门课程和一套教师队伍进行教学的少数院校之一。本文总结了在这一新学科教学和促进学科发展中的经验和体会。

微孢子虫的生物学及其实验检测

微孢子虫是一种原生生物,呈世界性分布。随着HIV感染人群的增加及检测手段的改进,微孢子虫病的病例报道不断增加。该文就近年来有关微孢子虫的生物学及其实验检测方面的研究进展进行综述。

CircRALB对宫颈癌细胞株Hela细胞生物学行为影响的研究

探讨circRALB对宫颈癌细胞株Hela细胞生物学行为的影响。化学合成circRALB干扰序列si_RALB以及无关序列si_nc,瞬时转染Hela细胞。荧光定量PCR法检测干扰序列si_RALB对Hela细胞中circRALB表达的影响;细胞计数、MTS法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验检测circRALB对Hela细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果显示,瞬时转染效率为(89.67±3.1)%。干扰序列si_RALB转染Hela细胞,circRALB表达量为si_nc组的(47.3±1.5)%,差异有统计学意义;si_RALB转染组细胞增殖活性明显低于si_nc对照组,差异有统计学意义;si_RALB转染组细胞凋亡率为(9.17±1.17)%,si_nc对照组细胞凋亡率为(7.2±0.32)%,空白对照组细胞凋亡率(5.63±0.31)%,尽管si_RALB细胞凋亡率大于si_nc对照组细胞凋亡率,但差异无统计学意义;si_RALB转染组与si_nc转染组相比,划痕间距缩小不明显;si_RALB转染组Hela细胞穿膜数为(21.33±2.19)个,显著低于si_nc组(45.33±1.76)个和空白对照组(52±1.53)个。化学合成的circRALB干扰序列转染Hela细胞后,能显著降低细胞中circRALB的表达量。CircRALB表达下调可显著抑制宫颈癌细胞系Hela细胞的增殖、迁移和侵袭能力,但对其凋亡无明显影响。结果提示CircRALB的表达与宫颈癌细胞的生物学行为有关,可能成为有效的宫颈癌治疗靶标。

间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs25中国分离株高度保守

目的 研究我国单纯间日疟流行区 3 1例患者 (湖北 18例、浙江 13例 )间日疟原虫分离株传播阻断疫苗候选抗原Pvs2 5基因多态性 ,并与 14例孟加拉间日疟原虫株进行比较分析。 方法 从干燥滤纸血膜提取疟原虫基因组DNA ,对Pvs2 5基因进行聚合酶链反应 (PCR)扩增、纯化和直接序列分析。 结果 与间日疟原虫标准株Sal I相比 ,获得的 45个Pvs2 5全长序列中有 3处点突变 ,引起相应氨基酸的替换。并且核苷酸多态性 (π值 )检验结果显示 ,Pvs2 5在不同流行区或同一流行区不同分离株之间核苷酸及其相应的氨基酸序列高度保守。 结论 与红前期和红内期候选抗原相比 ,Pvs2 5具有有限的抗原多态性 ,提示以Pvs2

吉林地区HFRS病原体基因型分析

为调查吉林地区褐家鼠中汉坦病毒病原体基因型及其分布情况,采用免疫荧光法检测吉林市区及吉林市所属各县市收集的鼠肺标本,对汉坦病毒抗原阳性标本以巢式RT-PCR法扩增S基因片段上的核苷酸序列并测序,将扩增片段的核苷酸序列与已知病毒序列进行同源性分析及系统进化树分析。序列分析发现吉林地区褐家鼠携带的汉坦病毒均为汉城病毒,S3亚型;未发现普马拉病毒存在。结果表明吉林市褐家鼠主要携带S3亚型的汉城型汉坦病毒。

流感大流行期病原学快速检测方法的建立

目的 为了确定 1996年和 1998年沈阳地区发生的严重流行性感冒的病原 ,建立快速、敏感的诊断流感的方法。方法 用反转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法 ,对门诊疑似流感病人咽拭子标本进行狗肾传代细胞 (MDCK)短时培养后流感病毒基因检测。结果 1996年流感流行期甲型流感病毒阳性率为 6 0 % ;1998年流感流行时甲型流感病毒阳性率为 83% ,说明 1996年和 1998年流感大流行皆为甲型流感病毒所致。结论 研究显示短时细胞培养后检测咽拭子标本中的流感病毒基因 。

生物因素所致农民职业病

有资料表明,我国是世界上职业病危害最严重的国家之一,当前我国职业病发病情况整体趋重。据了解,目前接触职业病危害因素的人数超过2亿人,而在这2亿人群中,农民工就占了九成之多。尽管如此,仍旧有很多的农民工走进恶劣的工作环境。一方面,外出务工农民患病事件接连发生;另一方面,与长期从事某些农业劳动有关的职业危害亦在增加。农民职业病已成为一个不可回避的社会问题。从有关调查情况看,目前,农民职业病类型主要包括6大类8种病①肺类病包括蘑菇肺病和发霉肺病;②大棚病;③中毒伤害病;④虫类病包括螨虫类病和钩虫类病;⑤丹毒病;⑥药类白血病。尘肺虽不在农民职业病范畴,但因近年外出务工农民尘肺病高发,已引起社会的关注。有专家认为,目前,作为高发人群的农民工,其绝大多数职业病尚无根治手段,我国每年为此失去大量劳动力,同时也导致许多家庭因此陷入贫困。面对当前职业病的严峻形势,有关防治专家建议从多方面着手,加强农民工职业病的防护工作。本刊作为一本面向农村的刊物,有责任和义务为保护农民的健康竭尽绵薄之力。为此,本期特邀各方专家对目前农民及农民工常见的职业病及职业危害作一介绍,以期提高本刊读者对农民职业病特点及危害的认识,在农村防病治病的工作中,为控制和预防农民职业病作出努力。(李雅娟)

RNA干扰技术在真核细胞型病原体研究中的应用

RNA干扰是由与靶基因序列同源的双链RNA介导的序列特异性的靶基因沉默过程,具有高特异性、高效性、可扩散性和可遗传性等特点,能相对快速、简便地提供基因功能的信息,为原虫和真菌基因功能的研究提供强有力的工具。该文综述了RNA干扰技术在原虫及机会致病真菌等真核细胞型病原体研究中的应用现状与进展。

CRISPR及其在原核生物防御系统中的作用

近来在众多原核生物的基因组中,人们发现一类成簇的、有规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)结构家族。CRISPR由一类DNA重复单元构成,在功能上与DNA的重组、修复及原核生物的免疫防御系统关系密切。通过对CRISPR和其相关系统(CASS)基因的比较性分析,CRISPR独特的结构和功能引起人们的广泛关注。实验表明CASS的插入序列来源于细胞内的许多染色体外遗传物质,并且以一种类似于真核生物中RNA干扰(RNAi)系统的机制,在原核生物抵抗入侵的噬菌体和质粒的防御系统中发挥着重要作用。本文对CRISPR的结构、片段来源和功能进行综述。

内眼手术患者术前结膜囊细菌分布及药物敏感性分析

目的探讨内眼手术患者术前结膜囊细菌分布情况以及药物敏感性,为临床预防性用药和术后眼内炎的治疗提供依据。方法采用前瞻性病例对照研究设计,连续收集2015年2—8月于沈阳市第四人民眼科住院拟行内眼手术的非感染性眼病患者,在术前预防性使用抗生素等处理前进行结膜囊标本采集并进行需氧菌和厌氧菌培养,观察结膜囊细菌培养阳性率和菌种分布情况。采用全自动微生物药物敏感试验分析系统对培养阳性的需氧菌进行眼科常用抗菌药物的敏感性试验。结果本研究共纳入患者192例192眼,其中男88例,占45.83%;平均年龄(58±15)岁。结膜囊标本需氧菌培养阳性81例,阳性率为42.19%。共分离需氧菌91株,主要为革兰阳性菌占91.21%;其中表皮葡萄球菌,占64.84%,其次为缓慢葡萄球菌和金黄色葡萄球菌,分别占7.69%和3.30%。革兰阴性菌包括克氏枸橼酸杆菌、摩根菌、变形杆菌和阴沟肠杆菌。凝固酶阴性的葡萄球菌(CNS)占所有阳性需氧菌的80.22%。厌氧菌培养阳性标本28例,占14.58%,主要为疮疱丙酸杆菌和大芬戈尔德菌,分别占71.43%和10.71%。药物敏感性试验结果显示,大多数CNS对庆大霉素和万古霉素敏感,耐药率小于10%,而普遍对红霉素和头孢他啶耐药,耐药率分别占69.86%和63.01%。对于眼科常用的左氧氟沙星、环丙沙星和莫西沙星,细菌耐药性分别是42.47%、39.73%和17.81%。对3种及以上抗生素同时耐药的CNS占38.36%。结论内眼手术患者结膜囊存在较高比例的需氧菌及厌氧菌生长。CNS是常见的分离菌种,且相当一部分对眼科常用的抗生素耐药。根据地区常见菌种和药物敏感试验结果调整预防性措施或治疗性用药对于提高手术安全性和治疗有效性具有重要意义。

免疫活性地龙肽的制备及其对小鼠巨噬细胞活性的影响

分离纯化免疫活性地龙肽并研究其对小鼠巨噬细胞活性的影响。通过抽提、离心、超滤及色谱等步骤提取小分子量免疫活性地龙肽;通过体外实验测定其对巨噬细胞吞噬活性的影响。结果表明,一定浓度的3种免疫活性地龙肽在体外均可明显增强小鼠巨噬细胞的吞噬活性,提示其具有免疫调节功能。

双歧杆菌、大肠杆菌菌体外多糖对iIEL激活作用的对比研究

目的 :对比研究双歧杆菌、大肠杆菌菌体多糖对iIEL的激活作用。方法 :采用Percoll非连续密度梯度离心法从小鼠小肠提取小肠上皮间淋巴细胞 (iIEL) ;应用有机溶剂提取的双歧杆菌、大肠杆菌菌体多糖与iIEL细胞共同孵育作用后 ,检测iIEL细胞的自然杀伤活性、IFNγ和IL 2产生能力。结果 :大肠杆菌、双歧杆菌菌体外多糖均能显著增强iIEL细胞的自然杀伤活性、IFNγ和IL 2的产生能力 (P <0 0 1) ,双歧杆菌组的作用显著高于大肠杆菌组 (P <0 0 1)。结论 :双歧杆菌和大肠杆菌菌体外多糖均对iIEL细胞具有免疫激活作用 ,但双歧杆菌菌体多糖的作用强。

单核细胞增生性李斯特氏菌种、株随机扩增DNA多态性研究

目的 分析单核细胞增生性李斯特氏菌种、株基因组DNA多态性 ,为其分型、鉴定提供理论依据。方法 应用随机扩增多态性DNA技术对李斯特氏菌基因组DNA进行扩增 ,根据DNA指纹图谱分析单核细胞增生性李斯特氏菌种、株的遗传多样性 ,同时构建相似性系数矩阵和树状图。结果 不同序列的随机引物扩增的RAPD图谱的多态性程度不同 ,其中单一引物P-7与复合引物P-1P-3 、P-4P-9扩增产生的指纹图谱对单核细胞增生性李斯特氏菌种、株均具有良好的区分能力。由该 3种引物扩增的RAPD图谱计算出的相似性系数矩阵及由此构建的聚类树状图均能得到李斯特氏菌的系统发育关系。结论 RAPD技术可用于李斯特氏菌的快速鉴定。

从患者脑脊液中检出广州管圆线虫发育期雄性和雌性成虫

本文报道和描述了送检脑膜脑炎病人脑脊液中的虫体。也是我国大陆首次于脑脊液中同时检出广州管圆线虫未发育成熟雄虫和雌虫。

肺癌患者耶氏肺孢子菌的隐性感染研究

目的检查肺癌患者的耶氏肺孢子菌(Pneumocystisjiroveci,P.jiroveci)的隐性感染情况,为癌症患者的化疗、肺孢子菌肺炎的预防提供参考依据。方法收集了50份未接受化疗的肺癌患者的肺癌旁肺组织标本及其相关信息,采用Giemsa、GMS病原学染色法和PCR扩增技术检测该组患者P.jiroverci的自然隐性感染率。并对感染者的年龄及性别进行了相关性分析。结果Giemsa、GMS、PCR三种方法检测到P.jiroveci的隐性感染率分别为Giemsa法2%;GMS法10%;PCR法为16%。X2检验结果显示三种不同检测方法的检测结果具有显著性差异(P<0.05)。对患者的年龄及性别的相关性分析结果表明,该组患者的P.jiroveci隐性感染情况无性别及年龄相关性。结论肺癌患者携带P.jroveci病原体,感染率为16%,提示这类患者存在发生肺孢子菌肺炎和成为传染源的潜在危险。对比本实验采用的三种检测方法,以PCR技术较为敏感。

肺炎支原体P1黏附蛋白基因的克隆与表达

目的对肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,Mp)3’端的P1黏附蛋白基因片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和表达产物的免疫性分析,为临床诊断试剂和疫苗的研制打下基础。方法应用PCR技术直接从MpFH株染色体DNA中扩增894bp的3’端p1基因片段(p1’),将此基因片段插入表达载体pGEX-6P-1后,转入大肠杆菌BL21扩增后提取重组质粒进行酶切、PCR扩增及核苷酸测序进行鉴定。诱导阳性克隆株表达重组蛋白后纯化,用兔抗Mp多克隆血清通过免疫印迹实验鉴定其免疫反应性。结果插入重组质粒的p1基因片段经测序后,与GenBank中p1基因核苷酸序列(AF290001、AF290002、AF286371、AE000002、M21519、M18639)比较,其同源性为99.66%～100%。氨基酸序列同源性为99.32%～100%。经SDS-PAGE分析,重组蛋白的相对分子量约为59kDa。免疫印迹实验证实重组蛋白是P1黏附蛋白抗原。结论成功构建了pGEX-6P-1-p1’重组质粒并获得表达。此p1’基因重组质粒表达的蛋白具有免疫反应性,有希望成为特异性抗原诊断试剂和疫苗的候选抗原。