靶向REST基因TALEN质粒的快速构建与活性检测

目的针对人REST基因设计并构建特异性类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)质粒,快速获得具有较高突变效率的TALEN。方法根据REST的序列信息设计TALEN靶位,使用单元组装的方法快速构建TALEN质粒,在293T细胞中进行活性检测并计算突变效率。结果针对REST设计并成功构建5个TALEN质粒,组成6对TALEN并实现基因打靶,其中L1和R3组合的突变效率达到60.9%。结论成功获得了靶向人REST基因的高效TALEN,为进一步研究REST的基因功能及其在相关疾病中的作用奠定基础。

PEI-Fe_3O_4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞

目的探索使用PEI-Fe_3O_4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞(h AEC)。方法采用透射电子显微镜和动态光散射表征PEI-Fe_3O_4纳米颗粒。使用纳米颗粒标记原代培养的h AEC,普鲁士蓝染色评价其标记效率,台盼蓝染色法和CCK-8法检测细胞存活率和细胞毒性。结果 PEI-Fe_3O_4纳米颗粒呈紧凑的球形,平均粒径为13 nm,水动力学半径为17.56 nm,zeta电位为+34.5 m V。浓度大于20μg/ml的纳米颗粒对h AEC的标记效率达到91%。50(t=16.37,P<0.0001;t=10.39,P<0.0001)、100μg/ml(t=29.89,P<0.0001;t=16.86,P<0.0001)纳米颗粒浓度下的h AEC存活率和细胞活力均明显低于未标记时。结论 PEI-Fe_3O_4纳米颗粒可用于标记h AEC,在其工作浓度下未表现出显著的细胞毒性。