胶体对大鼠肝脏低温保存及移植后微循环保护作用的研究

灌洗保存液中肢体渗透压的维持被认为是器官保存的必要条件之一。本研究应用大鼠原位肝移植模型采用生化检测、共焦激光扫描显微镜技术研究发现，保存液中加入羟乙基淀粉（HghroxyethylStarchHES）或低分子石旋糖酐Dex40能够有效地防止肝脏低温保存的肝血窦内皮细胞损伤，同时能改善移植后再灌注肝脏的微循环障碍，进而保护移植肝功能、DeX40的作用优于HES。结论：保存液中加入胶体成分，对防止肝脏的缺血再灌注损伤是有益的，可能与其能有效地维持胶体渗透压有关。Dex40可成功地替代HES作为维持胶体渗透压的有效成分。

钙离子超载对低温保存人肝细胞的损伤作用

目的 研究分离培养的成人肝细胞在低温保存状态下 (0～ 4℃ )的钙离子代谢特点和钙离子超载的损伤作用机理。方法 成人肝脏细胞分离和培养 ,用钙离子荧光探针检测保存液的钙离子浓度。结果 低温保存下 ,细胞内游离钙离子迅速升高 ,逐渐达到稳态水平 ,随细胞内钙离子的升高 ,细胞的存活率也逐渐下降 ,但在含0 .5 m MCa Cl2 的保存液组 ,保存效果明显好于其它两组 ;在含 1.5 m MCa Cl2 的保存液组 ,继发的钙离子超载峰值出现早而且要高于原发的钙超载峰。结论 低温保存可以引起成人肝细胞的钙超载 ,细胞外钙是细胞钙超载的主要来源 。

降温方式对大鼠肝脏功能的影响

目的 :研究降温方式对大鼠肝脏功能的影响 ,以确定大鼠肝脏的最适降温方式。方法 :采用单纯低温保存方法及建立大鼠肝脏移植模型 ,观察降温速率对大鼠肝脏功能的影响 ,初灌洗液温度分别为 4℃及 16℃。保存时限为 10 h,10 h后行原位肝移植术。检测酶学、能量指标及组织形态学变化。结果 :( 1)保存 10 h的灌出液及移植后2 h的血液标本中 AST、L DH水平 ,快速降温组明显高于渐进降温组 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1) ;( 2 )保存 10 h及移植后 2 0 m in快速降温组之肝脏能量指标明显低于渐进降温组 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1) ;( 3)快速降温组之肝脏形态学损害亦较渐进降温组重。结论 :快速降温对实验大鼠肝脏有损害作用 ,应采取渐进降温方式。

胰、肾联合移植六例报告

目的 探讨胰、肾联合移植治疗糖尿病合并糖尿病肾病的疗效。方法 回顾分析近期施行的 6例胰、肾联合移植手术的方法、疗效及并发症的防治。结果 6例患者分别于移植胰腺恢复血液循环后 2 3h、第 9d、17h、19h、第 5d及 1.5h停用外源性胰岛素 ,移植肾功能于术后第 2～ 4d恢复正常 ;术后并发症有排斥反应和血尿 ,其中 1例术后 5d发生加速性排斥反应 ,抗排斥治疗无效 ,于术后 11d切除移植胰、肾 ,其余 5例均痊愈出院。结论 胰、肾联合移植是治疗胰岛素依赖型糖尿病及达到胰岛素依赖期的非胰岛素依赖型糖尿病合并糖尿病肾病的有效方法 ;加强围手术期管理是术后减少各种并发症。

原位肝移植治疗肝门部胆管癌二例报告

目的探讨肝门部胆管癌是否为肝移植的适应证。方法为２例肝门部胆管癌的患者施行了同种原位肝移植术。供肝切取采用腹腔器官联合快速切取法，灌洗液及保存液为ＵＷ液。无肝期采用ＢｉｏＭｅｄｉｃｕｓ转流泵行体外静脉转流。术后免疫抑制治疗，例１采用环孢素Ａ、泼尼松和硫唑嘌呤三联用药，例２采用霉酚酸酯代替硫唑嘌呤。结果移植后肝功能恢复正常，黄疸减退，但例１术后４天因血液浓缩而出现脑栓塞，肺内感染，术后１２天死于多器官功能衰竭；例２移植后４周顺利出院，但５个月后死于肿瘤复发。结论肝门部胆管癌ＢｉｓｍｕｔｈⅣ型仍不失为肝移植的适应证，但术前判定是否有微转移灶及术前、术中与术后有效的辅助治疗。

胰肾联合移植3例报告

目的 探讨胰肾联合移植治疗糖尿病伴糖尿病肾病的疗效。方法 总结了近期施行的 3例胰肾联合移植手术的方法、疗效及并发症的防治。结果 3例病人移植后分别于术后 2 0小时、第 9天、15小时停用外源性胰岛素 ,于术后第 2天及第 4天肾功能恢复正常。术后仅出现排斥反应和血尿并发症。均痊愈出院 ,定期随访。结论 胰肾联合移植是治疗糖尿病伴糖尿病肾病的最有效方法。供胰肾原位灌注、快速整块切取、以预防为主、加强围手术期管理是减少各种并发症 。

大鼠原位肝移植后微循环障碍及前列腺素E_1对其保护作用的实验研究

目的研究大鼠肝脏微循环变化及 PGE_1对其的作用,同时观察血清酶 ALT、LDH 变化及超微结构变化。方法通过供肝切取前静脉输注前列腺素 E_1(PGE_1)(0.5μg/kg/min)及灌洗保存液中加入 PGE_1(1mg/L),以三袖套法建立大鼠原位肝移植模型,共焦激光扫描活体显微镜技术,生化检测技术、透射电镜技术。结果 1.移植再灌注后,鼠肝微循环紊乱,部分小叶无灌注,肝窦内可见大量白细胞粘附;实验组则好于对照组;实验组灌注指数及灌流率分别高于对照组(P<0.05)。2.移植后血清 ALT、LDH 升高,实验组较对照组有明显降低。(P<0.05)。3.实验组电镜下的形态学改变明显轻于对照组。结论肝移植过程中,缺血再灌注损伤可造成肝脏微循环紊乱,是供肝失活的一个重要原因。供体肝脏切取前静脉应用 PGE_1及灌洗保存液中加入 PGE_1能改善肝脏微循环,减轻缺血再灌注损伤,对供肝有保护作用。

核因子-κB对大鼠移植肝血管内皮细胞活化的影响

目的 探讨大鼠肝移植后肿瘤坏死因子 α(TNF α)早期释放、核因子 κB(NFκB)活化对内皮细胞E selectin、ICAM 1表达和中性粒细胞粘附积聚的影响。方法 建立大鼠肝移植和假手术模型 ,实验组供、受鼠分别于术前 1h注射己酮可可碱 (PTX ,5 0mg/kg) ,对照组注射等量生理盐水 ,测定肝组织和血清TNF α浓度、NFκBp6 5蛋白含量、ICAM 1和E selectinmRNA表达、髓过氧化物酶(MPO)活性、血清丙氨酸转氨酶 (ALT)、门冬氨酸转氨酶 (AST)、乳酸脱氢酶 (LDH)含量及肝脏水肿程度 (W /D)。结果 移植后 1hTNF α达较高水平 ,3h达高峰 ;NFκBp6 5 3h达高峰 ,持续至 6h ;E se lectinmRNA、ICAM 1mRNA分别于移植后 6h和 12h达高峰 ;移植后 12hMPO活性明显增高。应用PTX组 ,TNF α浓度、NFκBp6 5含量、E selectin和ICAM 1mRNA表达量、MPO活性均降低 (P <0 .0 5 )。移植后 6h ,应用PTX组AST、ALT、LDH、W /D水平也显著降低 ,和对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 PTX通过减少TNF α早期释放 ,抑制NFκB活化 ,从而下调内皮细胞粘附分子表达和减少中性粒细胞浸润 ,来减轻肝脏缺血再灌注损伤。

维拉帕米和Na^+-K^+通道阻滞剂对低温保存成人肝细胞能量代谢的影响

目的 研究维拉帕米及Na+ K+通道阻滞剂四乙基胺、奎尼丁和阿米洛利对低温保存成人肝细胞能量代谢的影响和对细胞的保护作用。方法 用胶原酶消化法制备成人肝细胞 ,置于分别加入维拉帕米、四乙基胺 +奎尼丁 +阿米洛利、四乙基胺 +奎尼丁 +阿米洛利 +维拉帕米的保存液中保存 ,高效液相色谱仪检测各组肝细胞中ATP、ADP及AMP的含量。结果 在维拉帕米实验组 ,ATP水平在实验过程中始终高于低温保存对照组 ;前 4个小时ADP平稳升高 ,以后逐渐减低 ;AMP呈缓慢升高趋势 ,至 12h达峰值 ;总腺苷酸含量总体呈下降趋势 ,但平台期延长 ,下降缓慢 ;能量转换率的变化与总腺苷酸含量相似。在加用维拉帕米和Na+ K+通道阻滞剂的联合用药组 ,ATP缓慢降低到初期的 5 0 %以下 ;ADP初期缓慢上升 ,4h后逐渐下降 ;AMP呈缓慢上升趋势 ;总腺苷酸含量和能量转换率均较维拉帕米组高 ,提示细胞的活性保持良好。结论 在低温保存成人肝细胞时加入维拉帕米和Na+ K+通道阻滞剂可降低肝细胞的能量消耗 ,它们对细胞的保护具有协同作用。

低温保存人肝细胞膜Na^+、K^+通道特性的研究

目的 研究低温 (0～ 4℃ )保存人肝细胞膜Na+ 、K+ 、Na+ /H+ 交换、Na+ /K+ / 2Cl- 协同转运通道以及Na+ /K+ ATP酶的状态。方法 胶原酶循环灌注分离人肝细胞 ;对照组保存液中不加任何其它试剂 ,实验组保存液中加入不同的离子通道阻滞剂 ,分别为 :氨氯吡咪 (Amiloride ,A组 ) ,丁苯氧酸 (Bumetanide,B组 ) ,利多卡因 (Lidocaine,L组 ) ,奎尼丁 (Quinidine,Q组 )及Na+ /K+ ATP酶阻滞剂哇巴因 (Ouabain ,O组 )。台盼兰染色测定各组的细胞存活率 ;原子吸收法测定细胞内Na+ 、K+ 浓度。结果 (1 )细胞存活率 :B组与对照组比较差异不显著 ;A组保存 1h、Q组、L组保存1 2h后 ,细胞存活率较对照组显著升高 ;(2 )细胞内Na+ 浓度 :对照组及B组细胞保存的初始阶段显著增高 ,随着时间的推移又逐渐降低 ,两组比较 ,各保存时段差异均不显著 ;L组保存 1 5min内显著增高 ,但低于对照组 ;O组各保存时段均显著高于对照组 ,A组各保存时段均显著低于对照组 ;(3)细胞内K+ 浓度 :对照组保存 1h内降低 ,以后逐渐趋于平稳 ;O组各保存时段均显著高于对照组 ,Q组则低于对照组。结论 各种离子通道阻滞剂对细胞的保存 ,在不同的方面有着特定的作用。 0～ 4℃保存的人肝细胞膜上 ,短时间内Na+ 、K+ 通道开放 ,而Na+ /H+

钙离子超载对低温保存人肝细胞的损伤作用的研究

目的 研究分离培养的成人肝细胞在低温保存状态下 ( 0～ 4℃ )的钙离子代谢特点和钙离子超载的损伤作用机制。方法 胶原酶消化法制备分离的成人肝细胞 ,钙离子荧光探针Flou - 3标记 ,流式细胞仪检测。结果 低温保存下 ,细胞内游离钙迅速升高 ,逐渐达到稳态水平 ;随细胞内钙离子的升高 ,细胞的存活率也逐渐下降 ,但在含 0 5mmol/LCaCl2 的保存液组 ,保存效果明显好于其它两组 ;在含 1.5mmol/LCaCl2 的保存液组 ,继发的钙离子超载峰值出现早 ,而且要高于原发的钙超载峰。结论 低温保存可以引起成人肝细胞的钙超载 ,细胞外钙是细胞钙超载的主要来源 ,继发超载是缺血再灌注损伤的主要原因。

供肝的保存

安全有效的供肝保存是肝移植成功的先决条件，保存目的是使离体缺血的肝脏保持活力，以完成运送、供受体配型及手术。肝脏是生命支持器官．移植后必须立即恢复功能，所以对保存质量要求很高。

锌——热休克蛋白诱导剂对鼠肝低温保存作用的实验研究

1.材料与方法:雄性Wistar大鼠(体重250±20 g)根据术前预处理因素及剂量不同随机分为五组:对照组(C 组):无预处理;锌组-1(Zn-1组)、锌组-2(Zn-2组)、锌组-3(Zn-3组),均于术前24 h腹腔注射0.5% ZnSO4注射液,剂量分别为Zn2+ 5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg;热休克组(H组):术前24 h接受热休克(42.5℃×15 min).采用单纯低温保存模型,每组按不同保存时限分3个亚组,即6 h、12 h、24 h,每亚组6只大鼠.检测移植肝脏灌注液中AST、LDH值.利用免疫印记(Western Blot)方法检测预处理24 h后肝脏组织中HSP含量,并利用凝胶成像及半定量分析系统进行半定量分析.光镜HE染色观察组织形态学的变化.统计学处理采用方差分析,q检验,结果采用盨表示.