管周毛细血管密度下降致低氧对慢性马兜铃酸肾病肾间质纤维化的影响

目的研究慢性马兜铃酸肾病(CAAN)管周毛细血管(PTC)密度下降致低氧对慢性马兜铃酸肾病肾间质纤维化进展的影响。方法将60只大鼠随机分为两组,CAAN组(n=30):给予关木通水煎剂灌胃8周;正常对照组(n=30)大鼠予饮用水灌胃8周。在第8、12、16周两组分别处死10只大鼠留取肾组织作病理、免疫组织化学染色和RT-PCR等检查。结果CAAN组不同时间点、不同组别低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、结缔组织生长因子(CTGF)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)、胶原-Ⅰ(Col-Ⅰ)和CD34表达间差异均有统计学意义(P<0·05);肾脏病理提示肾小管-间质损伤随时间呈进行性加重。PTC密度与HIF-1α、CTGF、TIMP-1、Col-I及相应mRNA的表达呈负相关。HIF-1α表达与CTGF、TIMP-1、Col-I及相应mRNA的表达呈正相关。结论CAAN肾脏PTC密度下降导致低氧与CAAN肾间质纤维化进展密切相关。

冬虫夏草对Heymann肾炎的疗效研究

用抗 FXIA 抗体将25只大白鼠造成被动 Heymann 肾炎,并随机分成实验组20只和对照组5只。实验组又分成 A 组10只,13组10只。A 组在造型前1天开始每天经口灌入心肝宝(每粒胶囊含冬虫夏草头孢茵丝0.25g)50mg/kg。B 组是在造型后7天开始按相同剂量和方法给药。从尿蛋白定量,血清肌酐及病理学几方面证明冬虫夏草对 Heymann 肾炎有疗效,特别是早期治疗的 A 组疗效更为显著。

4例抗中性粒细胞胞浆抗体相关性肾炎临床分析及文献复习

回顾分析4例抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性肾炎的临床表现,诊断,治疗及疾病的预后。ANCA相关性肾炎临床表现复杂多变,但以肾受累者多见。ANCA为其特异性血清学诊断工具,必要时需行肾活检病理诊断以确诊。环磷酰胺和糖皮质激素对该病有一定的疗效。

胰岛素对初发糖尿病大鼠肾小球山梨醇代谢变化的影响

目的：探讨胰岛素对肾小球内山梨醇代谢变化的影响，以进一步证实山梨醇代谢变化的发生机理。方法：采用高压气相色谱－质量分析的方法，对链脲菌素诱发的４周糖尿病大鼠组、糖尿病大鼠胰岛素治疗组肾小球内葡萄糖、山梨醇、果糖含量进行了检测。结果：糖尿病组已达到糖尿病诊断标准，肾小球内山梨醇代谢途径处于代谢亢进状态，胰岛素治疗纠正了肾小球内葡萄糖、山梨醇、果糖含量增加。结论：本研究提示在早期糖尿病状态下。

初发糖尿病大鼠肾小球山梨醇代谢异常──经高压气相色谱质谱联用仪的分析研究

通过高压气相色谱－质量分析的方法，对链脲菌素糖尿病发病４周后的大鼠肾小球内葡萄糖、山梨醇、果糖的含量进行了检测。其结果表明，糖尿病大鼠组已达到糖尿病诊断标准，在初发糖尿病阶段，肾小球内葡萄糖、山梨醇、果糖的含量明显增高。提示在糖尿病状态下，肾小球内整个山梨醇代谢途径处于代谢亢进状态。

慢性肾衰血透过程中血浆心房利钠因子水平的动态观察

本文研究了20例慢性肾衰(CRF)患者血透(HD)过程中血浆心房利钠因子(ANF)水平的动态变化和超滤量的关系.结果提示:CRF患者血浆ANF水平与肾功能衰竭程度有关,HD后血浆ANF的下降主要由于血容量减少所致.由于影响ANF的因素颇多.因此,HD前后血浆ANF变化幅度的大小难以准确地反映体内钠水潴留的纠正情况.

碘普罗胺对大鼠肾小球脏层上皮细胞的影响

目的探讨碘普罗胺诱导的大鼠对比剂肾病(CIN)发生的机制。方法 24只雌性SD大鼠随机分为正常对照组和对比剂肾病组(CIN组),各12只。CIN组采用尾静脉注射碘普罗胺的方法建立大鼠CIN模型;对照组尾静脉注射等量溶剂。所有大鼠均在注射后24 h处死。采用全自动生化分析仪测定24 h尿蛋白排泄量,免疫组化法测定肾小球上皮细胞细胞周期调控蛋白P21、P27、TGF-β1的阳性表达率,并用半定量评分法对各组大鼠的肾小球与肾小管间质的病理改变进行计量分析。应用TUNEL检测肾小球上皮细胞凋亡情况。结果与对照组相比,CIN组大鼠肾小球上皮细胞P21、P27、TGF-β1的阳性表达率显著增高,P21[(12.86±0.98)%vs(0.46±0.21)%,P=0.004 5],P27[(21.76±2.75)%vs(9.57±1.86)%,P=0.007 1]和TGF-β1[(12.85±5.54)%vs(7.63±0.84)%,P=0.003 7)];CIN组24 h尿蛋白显著性增加[(23.44±5.22)mg/d vs(2.13±0.52)mg/d,P=0.007 0];CIN组大鼠肾小球上皮细胞的病理损害更加严重和凋亡率明显增高[(52.5±6.4)%vs(4.2±0.3)%,P=0.007 5)],差异均有统计学意义。病理积分与24 h尿蛋白排泄量及P21,P27和TGF-β1的表达量呈正相关(r=0.765、0.701、0.842、0.651,P<0.01)。结论碘普罗胺可通过上调肾小球上皮细胞的P27、TGF-β1的表达及尿蛋白的排泄量,加重肾小球上皮细胞的病理损害及凋亡。

不同抗凝剂及透析膜对维持性血透患者止凝血状态的影响

目的 :观察不同抗凝剂及透析膜透析对维持性血液透析 (MHD)患者止凝血状态的影响。 方法 :10例MHD患者通过自身对照 ,先后给予普通肝素 (UFH)、低分子量肝素 (LMWH)抗凝以及醋酸膜 (CA)、聚砜膜 (PS)进行血液透析治疗。患者分为UFH CA组、UFH PS组、LMWH CA组、LMWH PS组等四组 ,检测其血浆D 二聚体 ,GMP 140及APTT、血清BUN水平。 结果 :透析前各组血浆D 二聚体、GMP 140水平及APTT间差异均不显著。透析后 ,各组血浆D 二聚体及GMP 140显著升高 (P <0 0 5 ) ,其中GMP 140升高幅度UFH CA组显著高于其他三组 (P <0 0 5 ) ,UFH抗凝组较LMWH抗凝组APTT明显延长 (P <0 0 5 )。透析器复用三次后 ,KT/V均明显下降 (P <0 0 1) ,UFH抗凝组较LMWH抗凝组下降明显 (P <0 0 5 )。 结论 :PS膜对血小板的活化作用弱于CA膜 ;与UFH相比 ,LMWH抗凝对纤溶系统、血小板及APTT的影响较小 。

锌离子对大鼠腹膜间皮细胞转分化及TGFβ/Smad通路的影响

目的研究锌离子对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)转分化(EMT)的影响,为锌离子在腹膜透析中的应用提供理论基础。方法胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代,经鉴定后分组:(1)对照组,(2)LPS组,(3)ZnSO4组,(4)ZnSO4/LPS组。应用Western blot方法、免疫荧光方法分别检测α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、上皮钙黏素(E cadherin)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、Smad2、Smad3、磷酸化的Smad2、3(P Smad2、3)蛋白表达;酶联免疫吸附方法检测上清液TNFα、TGFβ1的表达。结果与LPS组相比,ZnSO4/LPS组的αSMA的免疫荧光强度减弱;与对照组相比,LPS组RPMC的αSMA、collagenⅠ蛋白表达明显升高,而E cadherin蛋白表达降低。与LPS组相比,ZnSO4/LPS组RPMC的αSMA、collagenⅠ表达明显降低、E cadherin蛋白表达增多;LPS组上清液中TNFα、TGFβ1浓度显著高于对照组;ZnSO4/LPS组上清液中TNFα、TGFβ1浓度显著低于LPS组;与LPS组相比,ZnSO4/LPS组P Smad2、P Smad3的表达明显降低。结论 ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC的EMT,对腹膜透析过程中所导致的RPMCs损伤可能具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制TGFβ/Smad信号传导通路。

锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及机制

目的:研究锌离子(Zn)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转分化(EMT)的影响及机制,从而为Zn在腹膜透析(PD)中的应用提供理论基础。方法:胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:(1)正常对照组;(2)LPS组:100μmol/L作用48h;(3)ZnSO4作用组:30μmol/L ZnSO4作用24h后加100μmol/L LPS作用48h。应用RT-PCR方法和免疫荧光方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)基因表达。应用Western Blotting检测核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制蛋白(I-κB)、磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)、磷酸化的I-κB(p-I-κB)蛋白表达;应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS情况。结果:LPS培养48h后细胞形态开始发生变化,由典型的上皮逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞,而硫酸锌(ZnSO4)作用组细胞表型改变明显减轻。与对照组相比,LPS组RPMC的α-SMA、CollagenⅠ基因表达明显升高,而E-cadherin基因表达降低;与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC的α-SMA、CollagenⅠ表达明显降低、E-cadherin基因表达增多;LPS组ROS显著高于对照组,ZnSO4作用组ROS显著低于LPS组;与LPS组相比,ZnSO4作用组p-NF-κB、p-I-κB蛋白表达降低。结论:ZnSO4可逆转LPS所致的RPMC的EMT,对腹膜透析过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制氧化应激反应和NF-κB信号通路转导而发挥作用。

姜黄素对急性腹膜炎大鼠腹膜Toll样受体2和6表达的影响

目的:研究表皮葡萄球菌诱发大鼠急性腹膜炎的过程中,姜黄素对Toll样受体2和6(TLR2,TLR6)表达的影响。方法:采用腹腔注射表皮葡萄球菌制备大鼠急性腹膜炎模型,在制模前24h腹腔注射姜黄素[50mg/(kg·d)],然后分别在造模后3h,6h,12h,24h,48h不同时间点处死大鼠并取材,RT-PCR法检测各组大鼠腹膜组织TLR2和TLR6的表达;分别通过WestenBlot、免疫组织化学技术检测各组核因子κB(NF-κB)的表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:腹腔注射表皮葡萄球菌后,腹膜组织出现水肿和间皮细胞形态改变。RT-PCR结果显示模型组腹膜TLR2和TLR6的表达自感染后3～24h出现时间依赖性升高。姜黄素处理组较模型组TLR2、TLR6、NF-κB及TNF-α的表达均明显降低。此外,姜黄素处理组腹膜组织损伤轻于模型组。结论:姜黄素能够有效下调在表皮葡萄球菌诱发的急性腹膜炎早期免疫应答过程中TLR2,TLR6和TNF-α的过表达,其作用机制可能是通过NF-κB通路而发挥作用。

维持性血液透析患者外周血T细胞Annexin Ⅴ和FasL的表达研究

目的 :研究维持性血液透析患者外周血T细胞AnnexinⅤ和FasL的表达。 方法 :应用流式细胞术分别检测未透析肾衰 (ND)患者、醋酸纤维膜透析 (CA)患者、聚砜膜透析 (PS)患者及健康自愿者 (C)各 10名的外周血T细胞培养 2 4h后AnnexinⅤ和FasL的表达。 结果 :ND组和CA组外周血T细胞计数显著低于C组 ,而PS组与C组间差异不显著 ,ND组和CA组T细胞上AnnexinⅤ和FasL表达显著高于C组和PS组 ,各组AnnexinⅤ和FasL呈显著正相关 (P <0 0 5 ) 结论 :终末期肾衰 (ESRF)患者的低T淋巴细胞血症可能与T细胞凋亡增加有关。

锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞凋亡的影响及机制

目的研究锌离子对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)凋亡的影响及机制的探索,从而为锌离子在腹膜透析中的应用提供实验基础。方法胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:①对照组;②LPS组;③ZnSO4组;④ZnSO4/LPS组。应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测RPMC凋亡率,并采用Westen Blot方法检测细胞外信号调节激酶(PERK),BAX,凋亡诱导因子(AIF),天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶3(caspase3),天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶9(caspase9)蛋白表达。应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS蛋白表达情况。结果与对照组相比,LPS组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白(BAX,AIF,caspase3,caspase9)表达升高(P<0.01)。与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白表达明显降低(P<0.01)。LPS组ROS显著高于对照组而ZnSO4作用组ROS显著低于LPS组(P<0.01,P<0.01)。与LPS组相比,ZnSO4作用组P-ERK的表达明显升高(P<0.01)。结论 ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC凋亡,对腹膜透析相关腹膜炎过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过ERK通路而发挥作用。

锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞凋亡的影响

目的:研究锌离子(Zn)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)凋亡的影响,从而为锌离子在腹透相关腹膜炎中的应用提供理论基础。方法:胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:(1)对照组;(2)LPS组;(3)ZnSO4组;(4)ZnSO4/LPS组。应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测RPMC凋亡率,并采用Westen Blot方法检测P-Akt,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶3(caspase3),天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶8(caspase8)蛋白表达;酶联免疫吸附方法(ELISA)检测上清液TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL的表达。结果:与对照组相比,LPS组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白(caspase3,caspase8)表达升高。与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白(caspase3,caspase8)表达明显降低。LPS组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL浓度显著高于对照组;ZnSO4作用组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和sFasL浓度显著低于LPS组。与LPS组相比,ZnSO4作用组P-Akt的表达明显升高。结论:ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC凋亡,对腹膜透析相关腹膜炎过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过PI3K/Akt通路而发挥作用。

糖尿病动物模型制备及其临床特征演变

目的:利用链脲菌素制备Ⅰ型糖尿病大鼠实验模型,并检测其临床特征之演变。方法:腹腔注射链脲茵素制备糖尿病大鼠实验模型,于糖尿病发病2周、4周后经腹主动脉采血后放血处死,测量大鼠体重,双肾重量,血糖,24小时尿蛋白定量及血、尿肌酐,计算内生肌酐清率(Ccr)。结果:糖尿病大鼠2周、4周组血糖明显升高,体重减轻,尿量增多,已达到糖尿病诊断标准,此时 Ccr 比正常对照组高,肾重/体重比值增加,而尿蛋白无变化。结论:腹腔注射链脲菌素可成功制备糖尿病大鼠实验模型,糖尿病大鼠2周组处于初发糖尿病状态,糖尿病大鼠4周组则处于临床糖尿病肾病发病前阶段。

冬虫夏草对大鼠被动性Heymann肾炎肾小球基膜阴电荷分布的影响

目的 研究冬虫夏草对被动性Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＰＨＮ）肾小球基膜阴电荷分布的影响，为治疗提供线索。方法 以ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ（ＰＥＩ）为阳离子示踪剂，采取体外标记法检测ＰＨＮ不同时相肾小球基膜阴电荷分布。观察其与上皮下免疫复合物、蛋白尿之间的关系，并观察冬虫夏草对该模型的干扰作用。结果（１）ＰＨＮ一定时相的肾小球基膜阴电荷分布与上皮下免疫复合物沉积大小、数量及蛋白尿有直接关系。（２）冬虫夏草能够抑制ＰＨＮ肾小球上皮下免疫复合物的形成，维护肾小球基膜阴电荷屏障，使蛋白尿明显减轻。结论（１）肾小球基膜负电荷屏障的改变是造成ＰＨＮ肾损伤的重要因素之一。（２）冬虫夏草对ＰＨＮ具有一定的保护作用。