锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞凋亡的影响

目的:研究锌离子(Zn)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)凋亡的影响,从而为锌离子在腹透相关腹膜炎中的应用提供理论基础。方法:胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:(1)对照组;(2)LPS组;(3)ZnSO4组;(4)ZnSO4/LPS组。应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测RPMC凋亡率,并采用Westen Blot方法检测P-Akt,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶3(caspase3),天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶8(caspase8)蛋白表达;酶联免疫吸附方法(ELISA)检测上清液TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL的表达。结果:与对照组相比,LPS组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白(caspase3,caspase8)表达升高。与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白(caspase3,caspase8)表达明显降低。LPS组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL浓度显著高于对照组;ZnSO4作用组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和sFasL浓度显著低于LPS组。与LPS组相比,ZnSO4作用组P-Akt的表达明显升高。结论:ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC凋亡,对腹膜透析相关腹膜炎过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过PI3K/Akt通路而发挥作用。

锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞凋亡的影响及机制

目的研究锌离子对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)凋亡的影响及机制的探索,从而为锌离子在腹膜透析中的应用提供实验基础。方法胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:①对照组;②LPS组;③ZnSO4组;④ZnSO4/LPS组。应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测RPMC凋亡率,并采用Westen Blot方法检测细胞外信号调节激酶(PERK),BAX,凋亡诱导因子(AIF),天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶3(caspase3),天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶9(caspase9)蛋白表达。应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS蛋白表达情况。结果与对照组相比,LPS组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白(BAX,AIF,caspase3,caspase9)表达升高(P<0.01)。与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白表达明显降低(P<0.01)。LPS组ROS显著高于对照组而ZnSO4作用组ROS显著低于LPS组(P<0.01,P<0.01)。与LPS组相比,ZnSO4作用组P-ERK的表达明显升高(P<0.01)。结论 ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC凋亡,对腹膜透析相关腹膜炎过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过ERK通路而发挥作用。

乙型肝炎病毒核酸探针压电晶体传感器的初步研究

核酸探针压电晶体传感器 ,即由特异的单链DNA片断与压电晶体镀膜电板交联固定制成探针 ,并与标本中待测的变性DNA杂交成双链 ,杂交前后DNA量的变化 ,可通过压电晶体振荡频率的改变判定。从含pBR3 2 2 -HBVDNA的大肠杆菌HB10 1中提取纯化重组质粒DNA ,制成乙型肝炎病毒核酸探针压电晶体传感器 ,检测 12例乙型肝炎感染者血清标本 ,结果显示 5例阳性 ,与PCR检测结果一致 ,提示其具有良好的特异性与敏感性 ,并且更快速、简便。

β-榄香烯对卵巢癌细胞凋亡的影响及机制

目的研究β-榄香烯对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响及机制的探索,从而为β-榄香烯在卵巢癌中的应用提供实验基础。方法常规培养人卵巢癌SKOV-3细胞,传代,分组。应用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪以及TUNEL方法检测人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡率,并采用Westen blot方法检测caspase 3、caspase 8、caspase 9、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Cyto-c及p-Akt蛋白表达。结果与对照组相比,β-榄香烯处理组凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9及Cyto-c蛋白表达水平明显升高。与对照组相比,P-Akt及HIF-1α蛋白表达水平明显升高,而加入LY294002(PI3K/Akt/m TOR抑制剂),p-Akt及HIF-1α蛋白的表达水平明显降低。结论β-榄香烯抑制宫颈癌细胞增殖和诱导细胞凋亡可能与上调凋亡蛋白及Cyto-c蛋白表达及活化PI-3K信号通路进而诱导HIF-1α高表达相关。

小檗碱对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化及TGF-β/Smad通路的影响

目的研究小檗碱(BBr)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化(EMT)及TGF-β/Smad通路的影响。方法常规培养肾小管上皮细胞、传代、分组:1正常对照组;2TGF-β1组(10ng/ml TGF-β1作用48h);3小檗碱作用组(30μM小檗碱作用24h后加10ng/ml TGF-β1作用48h)。采用相差显微镜观察各组细胞表型改变,免疫荧光及Western Blot方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Smad2、Smad3、磷酸化的Smad2、3(P-Smad2、3)蛋白表达;应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS蛋白表达情况。结果 TGF-β1处理可导致NRK-52E细胞的α-SMA蛋白表达明显升高,E-cadherin蛋白表达降低。而小檗碱处理能够减少肾小管上皮细胞α-SMA的高表达,提高E-cadherin蛋白的表达;同时,小檗碱可有效降低由TGF-β1引起的NRK-52E细胞中ROS的过多产生。此外,小檗碱可有效抑制Smad2/3的活化。结论小檗碱可逆转TGF-β1所致的肾小管上皮细胞的EMT,其作用机制可能是通过抑制氧化应激及TGF-β/Smad信号通路而发挥作用。

锌离子对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的研究锌离子对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)的影响。方法常规培养肾小管上皮细胞、传代、分组:①正常对照组;②TGF-β1组(10ng/ml TGF-β1作用48h);③ZnSO_4作用组(30μM ZnSO_4作用24h后,加10ng/ml TGF-β1作用48h)。采用相差显微镜观察各组细胞表型改变,免疫荧光及Western blotting方法检测波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Ⅰ型胶原酶(collagenⅠ)蛋白表达。应用Western blotting检测p-Akt蛋白表达。结果 TGF-β1可以导致肾小管上皮细胞vimentin、collagenⅠ和p-Akt蛋白表达增高,使E-cadherin蛋白表达降低。ZnSO_4作用后可有效降低由TGF-β1导致的肾小管上皮细胞vimentin、collagenⅠ及p-Akt的高表达,同时使E-cadherin蛋白表达增多。结论 ZnSO_4阻抑TGF-β1所致的肾小管上皮细胞的EMT,其作用可能与PI-3K/Akt信号通路相关。