PAK2真核表达载体的构建及在胃癌细胞内的表达与定位

目的构建PAK2真核表达载体及证实在胃癌细胞内的表达与定位。方法提取HeLa细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增PAK2全长编码基因,克隆至pcDNA3.1A表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到胃癌细胞SGC-7901中,Western blot检测蛋白表达,免疫荧光检测PAK2在胃癌细胞内的定位。结果 hPAK2全长基因序列克隆到了真核表达载体pcDNA3.1A中,酶切鉴定片段为2 000 bp。Western blot检测到重组质粒蛋白表达,分子量约为75 kDa。免疫荧光检测pcDNA3.1A-PAK2在胃癌细胞内的定位以细胞浆为主,细胞核内少许。结论成功构建hPAK2全长基因真核表达载体,重组质粒主要定位于胃癌细胞浆。

肌动蛋白亚型在巨噬细胞吞噬脑膜炎大肠杆菌中的作用

该研究利用诱导后的THP-1单核细胞系作为巨噬细胞的模式细胞,鉴定了在巨噬细胞中表达的肌动蛋白亚型,发现β-肌动蛋白和γ-肌动蛋白在巨噬细胞中表达;接着利用共聚焦显微成像发现,β-肌动蛋白和γ-肌动蛋白在巨噬细胞受到脑膜炎大肠杆菌感染时均出现了不同程度的聚集;进一步利用RNA干扰技术实现了对巨噬细胞中的β-肌动蛋白和γ-肌动蛋白的特异性下调,并发现单独下调β-肌动蛋白和γ-肌动蛋白以及联合下调β-和γ-肌动蛋白都使得巨噬细胞吞噬脑膜炎大肠杆菌的能力呈明显下降。这些结果表明,不同亚型的肌动蛋白在巨噬细胞吞噬脑膜炎大肠杆菌过程中发挥着重要作用。