circTADA2A在肺腺癌组织和细胞中的表达及其对A549细胞迁移及侵袭影响的实验研究

目的:研究环状RNA TADA2A(circular RNA TADA2A,circTADA2A)在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LAD)组织和细胞中的表达及其对A549细胞迁移及侵袭的影响。方法:在Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中下载非编码RNA阵列分析文件GSE101586,并通过在线分析软件GEO2R分析GSE101586中5例肺腺癌及配对的癌旁组织中差异表达的环状RNA(circular RNAs,circRNAs);筛选差异表达的circRNAs并绘制热图;检测circTADA2A在GSE101586的5例肺腺癌及配对的癌旁组织中的差异性表达;qRT-PCR法检测circTADA2A在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系A549及人支气管上皮细胞系16HBE中的差异表达;在A549细胞中转染特异性circTADA2A干扰寡核苷酸(circTADA2A small interfering RNA,sicircTADA2A),同步转染错义对照寡核苷酸(small interfering scramble,siSCR),qRT-PCR法检测circTADA2A的差异表达;Transwell迁移及侵袭实验检测不同circTADA2A表达水平对A549细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:在GSE101586中,相比于癌旁组织,在肺腺癌组织中差异表达显著的circRNAs有39个(筛选标准:P<0.05且|logFC|≥1.2),其中上调的circRNAs有22个,下调的circRNAs有17个;相比于癌旁组织,circTADA2A在肺腺癌组织中表达升高;相比于16HBE细胞,circTADA2A在A549细胞中表达升高;转染sicircTADA2A可明显敲低A549细胞内circTADA2A的表达水平;下调circTADA2A的表达水平可明显抑制A549细胞的迁移及侵袭能力。结论:circTADA2A在肺腺癌组织和细胞中表达增高,下调其表达可明显抑制A549细胞的迁移及侵袭能力。

长链非编码RNA BCAR4在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)BCAR4在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中的表达及其临床意义。方法以90例DLBCL患者为观察组,以同期90例淋巴反应性增生(RLH)患者为对照组。采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测2组血液LncRNA BCAR4含量,并分析其与DLBCL病理特征及患者预后的关系。结果DLBCL患者血清BCAR4表达水平(4.25±0.23)明显高于RLH患者(1.12±0.07)(P<0.05)。肿瘤较大、分期较高、存在B症状、国际预后指数(IPI)较高的DLBCL患者LncRNA BCAR4表达水平明显更高(P<0.05);高表达lncRNA BCAR4的DLBCL患者中位无进展生存时间(16.15±2.24个月)显著短于低表达者(33.06±3.22个月)(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,高表达的lncRNA BCAR4与高IPI指数是DLBCL患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论lncRNA BCAR4在DLBCL患者中表达水平较高,并与患者的肿瘤大小、分期、是否存在B症状、IPI指数及预后有关。

紫杉醇脂质体通过调节PI3K/Akt信号通路对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响

目的 探讨紫杉醇-脂质体(L-PTX)通过调节PI3K/Akt信号通路对鼻咽癌(NPC)细胞放疗敏感性的影响。方法 将CNE-1细胞分为对照组(未经处理)、IR组(4Gy照射),L-PTX组(10mmol/L L-PTX)、Ly294002组(25μmo1/L Ly294002),L-PTX+IR组(L-PTX+4Gy照射)、Ly294002+IR组(Ly294002+4Gy照射)。采用CCK-8法和集落形成实验检测细胞的增殖能力;DAPI荧光染色法检测γ-H2AX阳性率;流式细胞仪测定CNE-1细胞凋亡率;Western blot法检测Bax、Bcl-2、Cleaved caspase3,PI3K/Akt信号通路蛋白及γ-H2AX蛋白表达水平。将CNE-1细胞接种于小鼠右侧,并随机分为模型组、IR-2组、L-PTX-2组、(L-PTX+IR)-2组。L-PTX-2组、(L-PTX+IR)-2组小鼠L-PTX灌胃150 mg/kg,每日1次。IR-2组和(L-PTX+IR)-2组在第7和10天肿瘤进行7Gyx射线照射,每7天测量肿瘤大小并记录体重变化,第28天处死小鼠,取肿瘤组织进行肿瘤重量的检测。结果 PTX能够增加经辐照后的CNE-1细胞γ-H2AX阳性率、细胞凋亡率,提高γ-H2AX、Bax、Cleaved caspase3蛋白表达,下调Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达;体外实验中,L-PTX能够降低辐照后的肿瘤重量和体积。结论 L-PTX通过抑制DNA损伤修复及促进细胞凋亡来增强NPC细胞的放疗耐药性,其机制可能与抑制PI3K-Akt信号通路有关。

姜黄素对乳腺癌多柔比星耐药性的机制作用研究

目的探讨姜黄素是否通过Akt/Raptor通路调控乳腺癌多柔比星的耐药性。方法将MCF-7/ADR处理后的细胞分为对照组(Control)、姜黄素低剂量组(Curcumin-L)、姜黄素中剂量组(Curcumin-M)和姜黄素高剂量组(Curcumin-H)。MTT法检测耐药细胞对多柔比星的敏感性;CCK-8法检测耐药细胞增殖能力;克隆形成实验检测耐药细胞集落形成能力;Transwell法检测耐药细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测耐药细胞凋亡能力;Western blot实验检测mTOR、Akt、p-mTOR、p-Akt和Raptor蛋白的表达。结果低、中、高剂量的姜黄素均能够抑制MCF-7/ADR细胞存活率和IC50值,抑制MCF-7/ADR细胞集落形成能力,促进MCF-7/ADR细胞凋亡,其中高剂量的姜黄素对MCF-7/ADR作用最为明显。MCF-7/ADR细胞中mTOR、Akt和Raptor蛋白的表达明显高于MCF-7细胞,而且低、中、高剂量的姜黄素均能够抑制MCF-7/ADR细胞中mTOR、Akt和Raptor蛋白的表达,其中高剂量的姜黄素作用效果最为明显。结论姜黄素能够抑制MCF-7/ADR细胞的增殖、侵袭和迁移,促进凋亡,逆转MCF-7/ADR的耐药性,可能与下调Akt和Raptor的表达相关。