肿瘤内科住院患者静脉血栓危险因素分析及现有风险评估模型预测价值研究

目的探讨肿瘤内科住院患者发生静脉血栓栓塞症(VTE)的风险因素及现有风险评估模型的预测能力。方法纳入2017年7月至2019年3月辽宁省肿瘤医院肿瘤内科住院的252例患者,按是否发生VTE分为研究组63例及对照组189例。应用霍拉纳评分(KRS)及帕多瓦预测评分(PPS)评估VTE风险,通过Logistic回归分析,探究发生VTE的危险因素并评估KRS及PPS的预测能力。结果 VTE病史、卧床≥3 d、血小板数目≥350×10^9/L、D-二聚体>0.55 mg/L、Ⅳ期肿瘤共5项风险因素与增加VTE风险相关(OR分别为12.149、3.672、3.144、5.263、1.439、1.382,均P<0.05)。通过KRS进行风险评估,低、中危风险组中,研究组及对照组的差异有统计学意义(均P<0.01),而高危组差异无统计学意义。通过PPS进行风险评估,低、高危风险组中差异均无统计学意义。结论在肿瘤内科住院患者中,VTE病史、卧床≥3 d、血小板数目≥350×10^9/L、D-二聚体>0.55 mg/L、Ⅳ期肿瘤为发生VTE的独立风险因素。KRS在低中危人群中能够很好预测血栓风险,而PPS预测能力有限。

乳腺癌患者术后辅助治疗对治疗相关心功能不全的影响

目的探讨乳腺癌患者术后辅助治疗对治疗相关心功能不全(CTRCD)的影响。方法选取2016年1月至2017年6月辽宁省肿瘤医院乳腺外科及肿瘤内科接受含蒽环类药物(表柔比星联合环磷酰胺序贯多西他赛;或表柔比星、环磷酰胺联合多西他赛)为基础的术后辅助治疗的乳腺癌患者327例。按术后治疗方式不同分为4组:化疗组、化疗+放疗组、化疗+曲妥珠单抗组、化疗+放疗+曲妥珠单抗组。分析不同治疗方式对CTRCD发生率的影响。结果CTRCD的发生率化疗+曲妥珠单抗组显著高于化疗组和化疗+放疗组(P<0.01)。按年龄分层(≥50岁组和<50岁组),<50岁组患者化疗+曲妥珠单抗组CTRCD发生率显著高于化疗组(P<0.01)。logistic回归分析结果显示,与其他治疗方式比较,化疗+曲妥珠单抗治疗可使CTRCD发生的风险增加(OR=24.244,95%CI:2.202~266.973)。结论以蒽环类药物为基础的化疗联合曲妥珠单抗治疗能够使乳腺癌术后患者CTRCD的发生率增加,是发生CTRCD发生的独立危险因素。

喉癌组织中Klotho基因的表达及其临床意义

目的探讨喉癌组织中Klotho基因的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting检测80例喉癌组织及癌旁正常组织中的Klotho mRNA及蛋白表达情况,并探讨两者表达与临床病理特征的关系。采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测Klotho基因启动子DNA甲基化状况。结果 80例喉癌组织中的Klotho mRNA相对表达量为0.2890±0.012,低于癌旁正常组织的0.7908±0.015,差异有统计学意义(P<0.01);Klotho蛋白相对表达量为0.2290±0.009,低于癌旁正常组织的0.5368±0.023,差异有统计学意义(P<0.01)。Klotho mRNA及蛋白表达与肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度无关(P>0.05)。喉癌组织及癌旁正常组织中Klotho基因启动子区DNA甲基化率分别为53.8%(43/80)、26.2%(21/80),差异有统计学意义(P<0.05)。结论Klotho基因在喉癌组织中表达下调,其表达可能受Klotho基因启动子区DNA甲基化水平的调控,且与浸润深度及淋巴结转移密切相关。

DHA对UVB和砷引起的DNA损伤的预防作用

目的探讨DHA对于紫外线B(UVB)照射和砷诱导的正常小鼠上皮细胞DNA损伤是否具有预防保护作用。方法采用不同浓度(25、50、75、100μmol/L)DHA处理小鼠上皮细胞株JB6,加入5μmol/L砷并进行UVB照射(照射能量为240 mJ/cm^2),将未进行UVB照射和砷处理的细胞设为空白对照组。MTT实验检测JB6细胞活性,免疫荧光实验检测γH2AX的表达,彗星实验检测DNA损伤程度,Western blotting法检测DNA修复相关蛋白及抗氧化酶的表达水平并用DHE和DCF染色检测在此过程中活性氧簇(ROS)的产生水平。结果 DHA在75、100μmol/L时能够降低UVB和砷联合作用诱导的细胞死亡;γH2AX的荧光染色及Western blotting检测结果均显示,UVB和砷联合作用导致DNA损伤标志物γH2AX表达水平升高,而DHA预处理的细胞能够明显抵抗UVB和砷引起的γH2AX表达增加,且呈浓度依赖性。彗星实验结果显示,JB6细胞经50、75和100μmol/L的DHA预处理后,降低了UVB和砷导致的彗星尾部DNA含量增加并缩短了尾矩。Western blotting检测显示,DHA可以促进p53表达持续升高,降低其负调控蛋白MDM2的表达,上调DNA修复蛋白Rad52的表达水平。DHA降低了UVB和砷诱导产生的ROS,并且上调了捕捉ROS的过氧化氢酶。结论 DHA减少了JB6细胞死亡并减轻了DNA损伤,为预防UVB和砷导致的非黑色素瘤皮肤癌提供了新的思路。

miR-140-5p靶向HDAC4调控人骨肉瘤细胞MG-63增殖

目的探讨microRNA-140-5p (miR-140-5p)能否通过抑制组蛋白脱乙酰基酶4(Histone deacetylase 4,HDAC4)基因调控人骨肉瘤细胞MG-63增殖。方法 qRT-PCR法检测miR-140-5p在骨肉瘤细胞系MG-63及成骨细胞系hFOB1.19中的差异表达;Western blot和qRT-PCR法检测miR-140-5p对HDAC4蛋白和mRNA表达的影响;CCK8法检测miR-140-5p对人骨肉瘤细胞MG-63增殖的变化;荧光素酶报告基因实验检测miR-140-5p能否特异性结合于HDAC4基因的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)。结果荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-140-5p可特异性结合于HDAC4基因的3′UTR;Western blot及qRT-PCR检测结果显示,miR-140-5p能抑制HDAC4的蛋白及mRNA表达;CCK8法结果显示,过表达miR140-5p可明显抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖。结论 miR-140-5p可抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖,且这种抑制效应与其特异性结合于HDAC4基因的3′UTR,下调HDAC4的表达有关。

miR-140-5p在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞侵袭转移的影响

目的研究miR-140-5p在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞MG-63及U2OS侵袭转移的影响。方法 qRT-PCR及免疫原位杂交法检测miR-140-5p在骨肉瘤组织中的表达情况; qRT-PCR检测miR-140-5p在骨肉瘤细胞M G-63、U2OS及正常成骨细胞系hFOB 1. 19中的表达;在MG-63、U2OS细胞中转染miR-140-5p mimic以上调miR-140-5p的表达,qRT-PCR确认转染成功; Transwell实验检测不同miR-140-5p表达水平对骨肉瘤细胞MG-63、U2OS侵袭转移的影响。结果与癌旁组织比较,miR-140-5p在骨肉瘤组织中表达降低;与正常成骨细胞系h FOB 1. 19比较,miR-140-5p在骨肉瘤细胞MG-63、U2OS中表达降低;在MG-63、U2OS中转染miR-140-5p mimic后,miR-140-5p表达升高,M G-63、U2OS细胞侵袭转移能力下降。结论 miR-140-5p在骨肉瘤组织及细胞系MG-63、U2OS中表达下降,上调其表达水平可抑制MG-63、U2OS细胞侵袭转移。

长链非编码RNA LINC00483抑制miR-204-3p对结直肠癌细胞侵袭转移的实验研究

目的探讨长链非编码RNA LINC00483能否通过抑制miR-204-3p表达的方式促进结直肠癌细胞侵袭转移。方法qRT-PCR法检测长链非编码RNA LINC00483及miR-204-3p在结直肠癌组织及细胞系HT29和LOVO中的表达;考察不同LINC00483及miR-204-3p表达水平分别与结直肠癌患者临床病理参数的相关性;在HT29及LOVO中分别转染特异性LINC00483干扰寡核苷酸(siLINC00483)以下调其表达;qRT-PCR法检测下调LINC00483后HT29及LOVO细胞内miR-204-3p表达变化,Transwell实验检测HT29及LOVO细胞侵袭转移能力的变化;共转染siLINC00483及miR-204-3p inhibitor,Transwell实验再次检测HT29及LOVO细胞侵袭转移能力的变化。结果相比于癌旁组织和正常肠上皮细胞系NCM460,LINC00483在结直肠癌组织及细胞系中表达增高而miR-204-3p表达降低(P<0.01);高表达的LINC00483和低表达的miR-204-3p均与结直肠癌患者的不良病理参数密切相关(P<0.01);下调LINC00483可明显抑制HT29和LOVO细胞中miR-204-3p的表达并抑制其侵袭转移(P<0.01);相比于单独转染siLINC00483,共转染siLINC00483及miR-204-3p inhibitor后,HT29及LOVO细胞的侵袭转移能力明显增加(P<0.01)。结论LINC00483在结直肠癌中表达增高且可通过抑制miR-204-3p的方式促进结直肠癌细胞侵袭转移。

下调长链非编码RNA LINC00483抑制结肠癌细胞侵袭转移的研究

目的研究长链非编码RNA LINC00483在结肠癌中表达及其对结肠癌细胞HT29和LOVO侵袭转移的影响。方法 qRT-PCR法及免疫原位杂交法检测LINC00483在结肠癌及癌旁组织中的表达;qRT-PCR法检测LINC00483在结肠癌细胞HT29及LOVO中的表达,同步设定人肠正常上皮细胞系NCM460作为对照;在HT29及LOVO细胞中转染LINC00483 siRNAs及对应的scramble siRNA并再次通过qRT-PCR检测LINC00483的差异表达;Transwell实验检测不同LINC00483表达水平对HT29及LOVO细胞侵袭转移的影响。结果相比于癌旁组织,LINC00483在结肠癌组织中表达明显增高;LINC00483在结肠癌细胞HT29及LOVO中表达明显高于人肠正常上皮细胞系NCM460;转染LINC00483 siRNA后,HT29及LOVO细胞中LINC00483的表达明显降低;下调LINC00483后,HT29及LOVO细胞侵袭转移能力受到抑制。结论 LINC00483在结肠癌中表达增高,下调LINC00483表达可抑制结肠癌细胞HT29及LOVO侵袭转移。

ZSWIM5在人非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探索ZSWIM5在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法运用免疫蛋白印迹检测20例NSCLC患者肿瘤标本及瘤旁正常肺组织中ZSWIM5的表达;在139例NSCLC病人的石蜡包埋标本中运用免疫组织化学染色法检测ZSWIM5的表达,对其表达与患者预后进行生存分析,进一步通过在线数据库进行大数据分析及结果比对。结果与邻近的非肿瘤肺组织相比,NSCLC组织中ZSWIM5的表达显著下降(P<0.02),非肿瘤组织中ZSWIM5的阳性率(76.67%)显著高于肿瘤组织中ZSWIM5的阳性率(40.29%)。ZSWIM5的阴性表达与高TNM分期、淋巴结转移和不良预后显著相关。结论ZSWIM5在NSCLC中表达下调,且与肿瘤恶性演进及患者不良预后相关,提示其在NSCLC中发挥抑癌作用。

环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭的影响

目的探讨环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法培养肺腺癌A549细胞,分为阴性对照(si-NC)组及circ0004771小干扰RNA(siRNA)组(si-circ0004771组),将si-NC和circ0004771 siRNA分别转染入相应组A549细胞中。si-NC组和si-circ0004771组细胞转染后,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测2组细胞circ0004771、miR-339-5p的表达水平,通过细胞计数试剂盒法检测细胞活力,通过EdU实验检测2组细胞增殖能力,通过Transwell小室实验检测2组细胞迁移和侵袭能力。结果si-NC组和si-circ0004771组A549细胞circ0004771基因的相对表达水平分别为3.07±0.07和0.68±0.04,miR-339-5p相对表达水平分别为1.14±0.13和2.33±0.07,差异均有统计学意义(t=51.34、13.96,P值均<0.001)。si-NC组和si-circ0004771组A549细胞在培养前(0 h)和培养后24、48 h的吸光度值分别为0.21±0.02、0.35±0.05、0.65±0.04和0.21±0.01、0.33±0.04、0.59±0.05,差异均无统计学意义(P值均>0.05);而在培养后72 h si-circ0004771组吸光度为0.92±0.15,小于si-NC组的1.32±0.04,差异有统计学意义(t=4.46,P=0.011)。EdU实验中,si-circ0004771组细胞阳性率为47.97%±4.68%,低于si-NC组的58.61%±2.15%,差异有统计学意义(t=3.58,P=0.023)。转染后si-circ0004771组的细胞迁移率、侵袭率分别为52.27%±2.92%、55.33%±6.29%,均低于si-NC组的99.79%±4.23%、98.67%±5.72%,差异均有统计学意义(t=16.26、8.83,P值均<0.001)。结论下调肺腺癌A549细胞circ0004771的表达水平,可以降低A549细胞的活力和增殖能力,可抑制A549细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与上调miR-339-5p的表达有关。

ZSWIM5抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、集落形成和迁移能力

目的研究ZSWIM5对非小细胞肺癌细胞的增殖、集落形成和迁移能力的作用。方法通过质粒转染和特异性siRNA干扰实现在非小细胞肺癌细胞系A549和H1299中双向调控ZSWIM5的蛋白表达水平,并应用免疫蛋白印迹验证。运用MTT实验检测ZSWIM5表达水平对肺癌细胞增殖能力的影响;运用集落形成实验检测ZSWIM5表达水平对肺癌细胞集落形成能力的影响;运用划痕实验检测ZSWIM5表达水平对肺癌细胞迁移能力的影响。结果 MTT和克隆形成实验表明,转染ZSWIM5可以抑制肺癌细胞的增殖和集落形成,而特异性干扰ZSWIM5促进细胞的增殖和集落形成。划痕实验表明转染ZSWIM5可以抑制肺癌细胞的迁移,而特异性干扰ZSWIM5促进细胞迁移能力。结论 ZSWIM5抑制非小细胞肺癌细胞的恶性表型,可能在肿瘤演进过程中发挥抑癌作用。

慢病毒介导干扰SIRT2人外周血白血病T细胞株建立及其抗凋亡活性研究

目的建立慢病毒介导稳定干扰SIRT2基因的人外周血白血病T细胞株(Jurkat)并检测其对细胞凋亡的影响。方法构建2条针对人源SIRT2基因的shRNA(shSIRT2-1#,shSIRT2-2#),连接到慢病毒载体(pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP)并进行测序鉴定。将SIRT2shRNA慢病毒载体和包装质粒一起转染到293T细胞中,然后收集病毒液,将病毒浓缩液浓缩后去感染人外周血白血病T细胞。采用嘌呤霉素筛选细胞株,进而去建立能够稳定表达SIRT2 shRNA的细胞株。通过蛋白质印迹法来检测SIRT2蛋白水平的表达变化情况,使用流式细胞术来检测细胞的凋亡变化情况。结果琼脂糖凝胶电泳法鉴定经酶切后的重组质粒,结果显示片段大小约为500bp,与SIRT2片段长度相符,SIRT2shRNA慢病毒干扰载体构建成功。蛋白质印迹法检测SIRT2蛋白,与阴性对照组相比,shSIRT2-1#组和shSIRT2-2#组Jurkat细胞中SIRT2蛋白水平显著下调。流式细胞术结果显示,稳定敲低SIRT2蛋白的细胞早中期凋亡率为(20.77±0.66)%,较沉默敲除细胞明显增加,P=0.004。结论成功建立了shRNA慢病毒载体介导的稳定敲低SIRT2的Jurkat细胞株,功能试验证实病毒介导的敲除SIRT2基因的Jurkat细胞的凋亡率增加,说明SIRT2基因具有抗凋亡作用,为进一步深入研究SIRT2蛋白生物学功能提供理论依据。

^(18)F-FDG PET-CT基线SUV_(max)与淋巴瘤临床病理特点及生存相关性分析

目的分析^(18)F-FDG PET-CT基线最大标准摄取值(SUV_(max))与淋巴瘤患者临床病理特点的关系,探讨基线SUV_(max)对判断淋巴瘤类型及预后的应用价值。方法回顾性分析2012—2018年间就诊于辽宁省肿瘤医院肿瘤内科、基线行PET-CT的96例淋巴瘤患者资料,分析临床特点、生存情况与基线PET-CT SUV_(max)的关系。以非参数检验和χ^(2)检验比较组间差异,将P<0.05数据纳入多元Logistic回归分析。以受试者工作特征(ROC)曲线分析通过SUV_(max)判断侵袭性淋巴瘤的敏感性和特异性,并确定最佳临界值。通过Kaplan-Meier法计算生存率并Log-rank检验差异。结果不同类型淋巴瘤基线SUV_(max)不同(P=0.035),其中侵袭性淋巴瘤的明显高于非侵袭性淋巴瘤(P=0.024)。年龄>60岁(P=0.038)、Ⅲ-Ⅳ期(P=0.011)、伴有B症状(P=0.019)的SUV_(max)较高。临床分期晚(P=0.001)和侵袭性淋巴瘤(P=0.037)是高SUV_(max)的独立危险因素。ROC曲线分析显示基线SUV_(max)可用于判断淋巴瘤侵袭性(P=0.024)。伴有B症状显著影响淋巴瘤患者总生存(P=0.020),且SUV_(max)高者总生存具有更差趋势(P=0.239)。结论基线SUV_(max)可作为判断淋巴瘤侵袭性的参考指标,PET-CT对淋巴瘤辅助诊断、精准治疗有重要的临床价值。