稳定过表达人源SAMHD1基因细胞株的建立及其抗病毒活性的研究

目的建立慢病毒介导的稳定过表达人源SAMHD1基因的结肠癌细胞株,观察SAMHD1对细胞抗1型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染能力的影响。方法利用pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP慢病毒载体新构建了p CDH-EF1-MCS-SAMHD1-T2A-GFP重组质粒,测序鉴定成功后,将重组质粒和慢病毒包装质粒共转染293T细胞,收集病毒液,浓缩后感染人结肠癌细胞,构建过表达细胞株。利用HSV-1感染过表达细胞株并与对照组比较,通过Western blotting和免疫荧光检测病毒感染效率。结果基因测序结果显示成功构建了重组质粒;Western blotting检测稳定过表达人源SAMHD1结肠癌细胞株构建成功;Western blotting和免疫荧光结果显示过表达人源SAMHD1的细胞株能够有效抑制HSV-1病毒感染和复制。结论成功构建慢病毒介导的稳定过表达人源SAMHD1基因细胞株,过表达人源SAMHD1的细胞株能有效抑制HSV-1病毒复制,为进一步深入研究SAMHD1蛋白生物学功能提供保障。