口腔颌面部软组织炎性肌纤维母细胞瘤21例临床分析

目的:探讨口腔颌面部炎性肌纤维母细胞瘤的病因、临床表现、鉴别诊断和治疗。方法:回顾分析中国医科大学附属口腔医院1990-2011年收治的21例炎性肌纤维母细胞瘤(包括炎性肌纤维母细胞瘤的其他名称)的临床资料,总结其临床症状、病灶区的影像学表现、病理学表现、临床治疗方案以及术后随访情况。结果:21例病例均在病灶边界外0.5～1 cm切除病灶。10例随访5 a以上,6例随访3 a,3例随访2 a,其中3例复发。对于复发病例,采用低剂量分次放射治疗。1例随访3 a,肿物明显减小,1例随访2 a,肿物基本消失,1例随访半年,无明显变化。结论:口腔颌面部炎性肌纤维母细胞瘤确诊依赖组织病理学表现,其中手术治疗为首选治疗方法。若入路困难或者多次复发,可辅助放射或激素治疗。

血管生成素4对牙髓干细胞成牙本质向分化的作用

目的探讨血管生成素4(angiopoietin 4,ANGPT4)对牙髓干细胞成牙本质向分化的影响。方法本实验研究已通过单位伦理委员会审查批准,并获得患者知情同意。将人前磨牙进行固定、脱钙、脱水、包埋和切片,免疫荧光染色观察ANGPT4的表达及定位。体外分离培养人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs),于倒置相差显微镜下观察hDPSCs的生长状态及形态;流式细胞术检测细胞表面相关分子标志物的表达;碱性磷酸酶和茜素红S染色鉴定hDPSCs成牙本质向分化的潜能;油红O染色鉴定hDPSCs成脂向分化潜能。提取hDPSCs成牙本质向诱导后不同时间点的RNA,采用RT-qPCR分析hDPSCs体外成牙本质向分化过程中ANGPT4基因及成牙本质细胞相关基因的表达。采用siRNA基因沉默技术沉默hDPSCs中ANGPT4基因的表达,通过RT-qPCR和Western blot检测沉默效率;在hDPSCs中沉默ANGPT4基因表达24 h后进行成牙本质向诱导,在诱导的第7天和14天分别进行碱性磷酸酶和茜素红S染色,检测沉默ANGPT4后hDPSCs的成牙本质向分化能力。结果人前磨牙的免疫荧光染色结果显示,ANGPT4在成牙本质细胞及成牙本质细胞下层多细胞区中表达。hDPSCs经分离培养14 d后状态良好,镜下观察到多个细胞集落,细胞形态均一,呈长梭形;流式细胞术结果显示,hDPSCs表达间充质干细胞标志物CD105(90.42%)和CD90(97.15%),不表达造血细胞标志物CD45(0.01%)和CD34(0.08%)。将hDPSCs进行成牙本质向和成脂向诱导培养后,碱性磷酸酶染色、茜素红S染色和油红O染色均呈阳性。RT-qPCR结果显示,ANGPT4在hDPSCs分化的第5、7、11和14天均高表达(P<0.05),其中第5天表达水平最高。转染si-ANGPT4后,hDPSCs的ANGPT4 mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05);碱性磷酸酶染色结果显示,si-ANGPT4组ALP染色强度和面积均显著低于阴性对照组;茜素红S染色结果显示,si-ANGPT4组钙结节形成明显低于阴性对照组。结论ANGPT4基因在人前磨牙成牙本质细胞及下层多细胞区中表达;ANGPT4可能促进hDPSCs成牙本质向分化。

抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合碳点通过高尔基体应激对MG63细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响

目的:探讨抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合碳点(CDs)对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和氧化应激等的影响,阐明抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合CDs的细胞生物学特性。方法:以抗坏血酸和聚乙烯亚胺为原料,用微波法合成抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合CDs。采用MTT法检测MG63细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期MG63细胞百分比。将MG63细胞分为空白对照组、转染阴性对照组、转染GOLPH3-siRNA组、CDs组、转染阴性对照+CDs组、转染GOLPH3-siRNA+CDs组。采用RT-PCR法检测各组MG63细胞中高尔基体磷酸化蛋白3(GOLPH3)的基因表达水平并计算基因沉默效率,流式细胞术检测各组MG63细胞凋亡率以及MG63细胞中活性氧(ROS)水平。结果:与空白对照组比较,随着CDs浓度的增加,MG63细胞的增殖率降低;在24和48 h时,CDs浓度大于40 mg·L^-1时,MG63细胞增殖率明显降低(P<0.05);在72 h,CDs浓度大于20 mg·L^-1时,细胞增殖率明显降低(P<0.05)。与对照组比较,40 mg·L^-1 CDs组G 0/G 1期MG63细胞百分比明显升高(P<0.01),S期MG63细胞百分比明显降低(P<0.01)。倒置荧光显微镜下CDs具有一定的光致发光特性;与非碳点组(空白对照组、转染阴性对照组、转染GOLPH3-siRNA组)比较,碳点组(CDs组、转染阴性对照+CDs组、转染GOLPH3-siRNA+CDs组)MG63细胞凋亡率和细胞中ROS水平升高(P<0.05)。结论:CDs具有低毒性和光致发光特性,可以阻滞细胞周期,并促进细胞凋亡和ROS生成。GOLPH3具有抗凋亡和抑制ROS生成的作用,对细胞的存活起到一定的保护作用。

载他克莫司可注射温敏型水凝胶促牙周组织再生的研究

目的:制备载FK506(他克莫司,tacrolimus)的可注射温敏型水凝胶,研究其在大鼠牙周炎模型中促牙周组织再生的作用。方法:以壳聚糖(chitosan,CS)、β-甘油磷酸钠、明胶和FK506为原料合成为载FK506的可注射温敏型水凝胶,扫描电镜下观察其微结构。建立Wistar大鼠牙周炎模型,分为空白组、牙周炎组、牙周炎+水凝胶组、牙周炎+载FK506水凝胶组及牙周炎+FK506组。应用Micro-CT观察牙周骨组织破坏情况、苏木精-伊红染色(HE染色)法进行组织学分析,并结合免疫组织化学染色检测炎症因子环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达情况。进一步使用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检查水凝胶载FK506对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响,评估其生物安全性。结果:扫描电镜图像显示,冻干水凝胶孔径大小均一;Micro-CT扫描分析结果表明,水凝胶载FK506可以减轻牙周炎导致的牙槽骨破坏;组织学分析表明,在牙周炎+载FK506水凝胶组中几乎没有炎性细胞浸润或牙槽骨破坏,并且在根分叉区及上颌第一和第二磨牙之间可见少量新生骨组织;免疫组织化学染色结果显示,牙周炎+载FK506水凝胶组及牙周炎+FK506组中,COX-2和MMP-9阳性细胞数量较少;MTT结果显示水凝胶载FK506对BMSCs的增殖活性无明显抑制作用。结论:可注射温敏型水凝胶缓释FK506可用于抗炎和牙周组织再生,在牙周炎治疗中具有良好的应用前景。

活化素Ⅰ型受体对小鼠下颌骨髁突软骨生长发育的影响及其机制

目的:观察Ⅰ型骨形态发生蛋白(BMP)受体活化素Ⅰ型受体(ACVR1)对出生后小鼠下颌骨髁突软骨(MCC)细胞形态、增殖和分化的影响,为研究MCC相关性疾病的病因及治疗提供参考。方法:采用Cre-LoxP系统构建在C57BL/6J小鼠MCC细胞中条件性敲除ACVR1基因的动物模型。将基因型为Acvr1fx/fx;RS/RS和Acvr1+/-;Osterix(+)/(-)的雌性和雄性小鼠配对合笼,以子代Osterix-Cre(+);Acvr1fx/-;RS/+基因型小鼠为实验组,Osterix-Cre(+);Acvr1fx/+;RS/+小鼠为对照组。分别取新出生(n=3)、出生后21天(PN21)(n=4)和出生后42天(PN42)(n=5)雄性小鼠,X-gal染色检测MCC组织中Osterix-Cre表达,micro-CT法检测2组小鼠下颌骨髁突宽度和髁头长度,HE染色和甲苯胺蓝染色分析2组小鼠MCC细胞形态及各层软骨厚度,免疫组织化学(IHC)染色检测2组小鼠MCC组织中增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数和Ⅹ型胶原水平。结果:X-gal染色和IHC染色,ACVR1条件性基因缺失小鼠模型构建成功。在PN21时,与对照组比较,实验组小鼠下颌骨髁突宽度和髁头长度明显变短(P<0.05);2组小鼠MCC细胞形态表现和结构无明显差异。与对照组比较,实验组小鼠肥大软骨细胞层(Hy)和成软骨细胞层(Ch)这2层及Hy单层MCC组织中PCNA阳性细胞数明显增多(P<0.05或P<0.01)。在PN42时,与对照组比较,实验组小鼠部分下颌骨髁突软骨细胞形态异常,部分髁突肥大软骨细胞的排列紊乱,实验组小鼠髁突软骨前1/3区的Hy和中1/3区除Hy以外的其他层细胞厚度明显增大(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,实验组小鼠MCC组织各层PCNA阳性细胞数和Ch中Ⅹ型胶原水平明显升高。结论:ACVR1通过抑制MCC细胞增殖和成软骨细胞向肥大软骨细胞的分化,从而影响MCC细胞形态及MCC组织结构。

活化蛋白A受体1在成牙本质细胞极化和牙本质形成中的作用

目的:研究活化蛋白A受体1(ACVR1)对成牙本质细胞极化及牙本质形成的影响。方法:以Cre-LoxP系统建立牙源性间充质特异性Acvr1基因敲除小鼠模型,取"Osterix-Cre;Acvr1 fx/-基因型小鼠"为实验组,同窝"Osterix-Cre;Acvr1 fx/+基因型小鼠"为对照组。取新生小鼠,通过HE染色观察小鼠下颌切牙的牙本质形成和成牙本质细胞形态;天狼星红染色观察下颌切牙的牙本质胶原排列;免疫荧光染色检测高尔基体(GM130)在下颌切牙成牙本质细胞中的定位。结果:HE染色结果显示,与对照组相比,实验组小鼠下颌切牙有牙本质形成缺陷,牙尖处可见骨样牙本质;从颈环至牙尖,成牙本质细胞形态由多角形变为高柱状,又变为多角形,极性从无到有,再逐渐消失,最终牙尖处部分细胞极性完全丧失。天狼星红染色结果显示实验组小鼠切牙的牙尖处胶原排列紊乱。GM130免疫荧光染色结果显示实验组小鼠切牙的近牙尖处成牙本质细胞中,高尔基体-细胞核相对位置发生变化。结论:Ⅰ型BMP受体ACVR1可维持成牙本质细胞极性并促进牙本质的有序形成,在调控牙本质形成中具有重要作用。

机械应力调控成骨细胞信号通路影响骨重塑的研究进展

生理状态下,骨骼处于不断重建的连续过程,称为骨重塑。遗传、激素、营养、生物活性物质、机械力等都能影响此过程,其中机械应力是刺激骨形成的重要因素,比如促进骨骼成熟和重建等,其缺乏可导致骨代谢紊乱、骨量流失等[1]。成骨细胞作为骨重塑中关键的效应细胞,可感受体内外力学刺激,并将力学信号转化为生物化学信号,参与骨形成的生理活动[2]。机械应力能影响成骨细胞内不同信号通路而调节其增殖、分化等,从而调控骨重塑[3]。本文对不同机械应力对成骨细胞信号通路调控的相关研究予以综述,以期为探究机械应力影响骨重塑的具体机制以及临床治疗骨相关疾病提供新思路。