先天性肛门直肠畸形术后合并便秘患儿排便功能评定及病因探讨

目的便秘是先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)术后常见的并发症,其病理改变复杂,病因尚不清楚。本研究利用多种客观检查方法对ARM术后便秘患儿肛门直肠功能和神经功能进行评定,并对其病因进行探讨。方法利用同位素排便造影、直肠肛管测压、肌电图和肛门括约肌神经电生理等方法对49例ARM患儿和31例正常儿童的排便功能进行全面、系统和动态的评价,49例ARM患儿根据畸形位置分为中低位组和高位组,每组再根据是否发生便秘分出两个亚组,并对上述测量指标进行统计分析。结果同位素排便造影结果显示,ARM术后便秘组半排时间[中低位:(13.45±8.35)s;高位:(20.59±4.26)s]与术后无便秘组[中低位:(4.69±6.86)s;高位:(7.66±6.38)s]相比明显延长,ARM术后便秘组排空率[中低位:(29.35±14.84)s;高位:(33.00±9.04)s]与术后无便秘组[中低位:(61.70±23.01)s;高位:(60.31±30.38)s]相比明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。直肠肛管测压检测结果显示,直肠感觉阈在所有ARM组中均明显高于正常组(P<0.05),ARM便秘组[中低位:(53.57±9.45)mL;高位:(57.50±9.14)mL]高于ARM无便秘组[中低位:(46.32±14.61)mL;高位:(47.27±8.76)mL]。ARM便秘组感觉收缩时间[中低位:(2.79±0.39)s;高位:(3.51±1.93)s]明显长于ARM无便秘组[中低位:(1.97±0.67)s;高位:(2.11±0.43)s],差异具有统计学意义(P<0.05)。肌电图结果显示,反映排便动力的痉挛指数在术后合并便秘组均明显高于未合并便秘组。神经电生理结果显示会阴-肛门反射潜伏期在ARM患儿组均明显延长,其中ARM合并便秘组[中低位:(66.04±16.20)ms;高位:(70.41±17.91)ms]延长更加明显,与ARM无便秘组[中低位:(38.51±16.92)ms;高位:(49.91±9.45)ms]相比存在统计学差异(P<0.05)。结论ARM术后便秘患儿直肠感觉功能和排便动力存在明显异常,其严重程度与支配盆底肌肉的神经功能异常有关。治疗前应进行详细、系统的肛门直肠和神经功能的客观检查,明确排便功能障碍的具体病因和病理改变。

先天性肛门直肠畸形病因学研究新进展

先天性肛门直肠畸形（congenital anorectal malformation,ARM）是最常见的消化道畸形之一,其全球范围内发生率为0.2‰~0.6‰,男性发病率略高于女性[1,2]。ARM是后肠在胚胎4~8周发育异常所致的一组不同表型的肠道畸形,从简单的直肠会阴瘘等低位畸形到复杂的一穴肛、直肠膀胱瘘等高位畸形,畸形的类型不同所采用的手术术式也不同,其治疗效果也不同,肛门狭窄、

先天性巨结肠组织蛋白质组成分的双向凝胶电泳分析

目的分析先天性巨结肠(HD)狭窄段及正常段肠管组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质。方法采用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离20例HD患者配对狭窄段及正常段肠管组织的总蛋白,银染显色,Image Master 2D Platinum 6.0软件分析差异表达的蛋白质点。结果获得了重复性较好的2-DE银染图谱。图像分析显示,狭窄段和正常段肠管组织凝胶的平均匹配率分别为78.1%和86.7%。差异分析共获得103个差异表达的蛋白质点。结论采用2-DE分离HD肠管组织的总蛋白可获得重复性较好的结果。获得的差异蛋白质点为寻找HD早期诊断的分子标记物提供了基础资料。

COLIA1调控小鼠神经细胞迁移在神经管畸形中的作用

目的探讨Ⅰ型胶原蛋白α1(COLIA1)调控神经细胞迁移活动对小鼠神经管闭合的作用。方法利用全反式维甲酸(ATRA)诱导建立神经管畸形(NTDs)小鼠模型。采用Western blotting检测COLIA1,上皮细胞间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、Snail、Vimentin表达情况。在C17.2神经干细胞中沉默COLIA1后,Western blotting检测COLIA1对E-cadherin、Snail和Vimentin表达的调节作用,通过Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验观察细胞迁移生物学活动变化。结果在ATRA诱导的NTDs小鼠模型中,COLIA1表达下调,迁移相关的EMT指标Snail、Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调。在C17.2神经干细胞中,沉默COLIA1表达后,EMT指标Snail、Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调,细胞迁移能力降低。结论COLIA1通过影响细胞迁移抑制NTDs的形成。

利用同位素标记相对和绝对定量技术筛查神经管畸形胚胎孕鼠血清差异蛋白质谱

目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清各5例,应用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)和液相色谱质谱鉴定技术分析2组蛋白质,定量信息以蛋白的丰度比差异倍数1.5倍以上(P <0.05)为差异蛋白质。结果质谱共得到谱图157 422张,鉴定出390种蛋白质,发现E11维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白40种,E13维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白26种。结论筛选出致畸早期大量神经管畸形和正常孕鼠血清差异蛋白,差异蛋白通过直接或间接相互作用,促进或抑制神经管畸形的发生与发展。

胎儿先天性心脏病无创性产前筛查分子标志物的研究进展

先天性心脏病(congenital heart defects,CHD)是目前最常见的先天缺陷,发生率为(6~8)/1000,占婴儿先天性疾病死亡率的30%~50%[1-2]。尽管CHD发病机制方面的相关研究较多,但其病因仍不清楚,仍然是一个严重的问题。因此,早期产前诊断对于改善母亲和胎儿双方结局是至关重要的,在某些类型的胎儿心脏异常中,早期产前诊断有助于提供最佳的围产期和围术期管理,减少产后发病率和死亡率[3]。在当前的围产保健中,CHD的临床诊断主要依靠妊娠中期的胎儿超声心动图检查。

神经管畸形发病机制研究进展与新策略

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是由于胚胎发育早期神经管闭合异常所致,是最常见、最严重的中枢神经系统先天性畸形。全球范围内发生率为0.55‰~21‰[1],不同国家和地区发生率有所不同,我国北方是NTDs的高发地区。近年来,随着孕期保健知识的普及和叶酸补充的加强,NTDs的发生率有了明显降低[2-3]。但仅仅依靠补充叶酸只能预防30%~50%NTDs的发生[4]。NTDs目前仍然是常见的先天畸形之一,发生率仅次于先天性心脏病。

生物标志物在神经管畸形产前诊断方面的进展及应用

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是一种严重的小儿神经系统先天畸形,据报道2015年全球NTDs患病率为1.86‰,世界不同地区的NTDs患病率为0.75‰~3.12‰[1]。该病于妊娠早期21~28 d发生,因神经皱襞在中线融合失败,神经管未闭合所致,是最常见和致残率最高的出生缺陷之一[2]。根据中枢神经组织是否暴露于外部环境,可将神经管缺陷划分为两种类型,即开放性和闭合性缺陷;根据神经管闭合失败的解剖部位,开放性缺陷又可分为颅轴裂、前脑无脑和脊髓脊膜膨出,闭合性缺陷又可分为脑膨出、脊膜膨出和隐性脊柱裂[3]。

COL1a1 COL3a1在发育性髋脱位患儿关节囊的表达

目的发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)的病因目前不明,但其与髋关节松弛密切相关。该研究通过比较DDH患儿与正常儿童关节囊中Ⅰ,Ⅲ型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异,以探索DDH患儿髋关节松弛的原因。方法选取性别相同年龄相近的9对发育性髋脱位患者及正常儿童配对比较。采用半定量RT-PCR及Western-Blot法检测COL1a1 COL3a1在mRNA及蛋白水平的表达。图像分析软件进行量化分析,并经统计学处理。结果COL1a1在DDH组mRNA及蛋白水平表达均较正常对照组降低(P<0.01);COL3a1在DDH组mRNA水平表达较正常对照组降低(P<0.01),其蛋白水平表达与正常对照组无显著差异(P>0.05)。结论DDH患儿关节囊中Ⅰ型胶原在mRNA及蛋白水平表达较正常同性同龄儿降低,可能是导致DDH患儿髋关节松弛的原因。DDH患儿髋关节松弛可能与Ⅲ型胶原含量无关。

COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达

[目的]探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中Ⅰ、Ⅲ型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。[方法]选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比较。采用半定量RT-PCR及Western-Blot法检测COL1a1、COL3a1在mRNA及蛋白水平的表达。图像分析软件进行量化分析,并经统计学处理。[结果]COL1a1在DDH组mRNA及蛋白水平表达均较正常对照组降低(P<0.01);COL3a1在DDH组mRNA及蛋白水平表达与正常对照组无显著差异(P>0.05)。[结论]DDH患儿圆韧带中Ⅰ型胶原在mRNA及蛋白水平表达较正常同性同龄儿降低,可能是导致DDH患儿髋关节松弛的原因。DDH患儿髋关节松弛可能与Ⅲ型胶原含量无关。

MeCP2基因在先天性巨结肠症和肛门直肠畸形中的甲基化与表达研究

目的观察甲基化CpG-结合蛋白-2（MeCP2）基因在先天性巨结肠症（HD）和肛门直肠畸形（ARMs）患儿中的甲基化，探讨MeCP2基因在HD和ARMs发病中的作用。方法运用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法，检测HD狭窄肠段和正常肠段肠管及ARMs直肠末端（高位、中位和低位组）和死于非胃肠道疾病（正常对照组）患儿各30例MeCP2基因甲基化程度；采用荧光实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测HD中MeCP2基因的mRNA转录水平。结果MSP检测30例HD，其中狭窄段肠管组织MeCP2基因高甲基化（19例），而正常段肠管组织MeCP2基因低甲基化（4例）；MSP检测30例ARMs，其中8例高位组MeCP2基因高甲基化（5例），9例中位组和13例低位组低甲基化（1例和2例），与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。HD狭窄段肠管组织MeCP2基因mRNA表达低于正常段肠管组织（P〈0．05）；ARMs高位组mRNA转录水平的表达低于正常对照组（P〈0．05），中位组和低位组mRNA转录水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MeCP2基因在HD狭窄段和ARMs的高位组高甲基化与mRNA低表达，可能在先天性消化道畸形的肠道发育中具有重要作用。

脑星形细胞瘤组织Topo-Ⅱα与Ki-67及PCNA表达与临床病理因素关系的研究

目的:研究DNA拓扑异构酶Ⅱα(Topo-Ⅱα)、Ki-67和增殖细胞核抗原(prolifera-ting cell nuclear antigen,PCNA)在中枢神经系统星形细胞瘤中的表达,并结合多种临床因素探讨其与肿瘤恶性程度及预后的关系。方法:应用SABC免疫组化技术,检测32例星形细胞瘤Topo-Ⅱα、Ki-67和PCNA的表达,并对其与恶性程度的关系及可能影响预后的因素进行统计学分析。结果:星形细胞瘤Topo-Ⅱα、Ki-67和PC-NA的表达阳性率在低度恶性组中为28.5%、21.4%和28.5%;在高度恶性组中为100%、100%和88.8%,两组之间的差异均有统计学意义(Topo-Ⅱα组χ2=23.87,P<0.01,Ki-67组χ2=18.16,P<0.01,PCNA组χ2=13.41,P<0.01);单因素条件Logistic回归分析显示,患者年龄、恶性程度、肿瘤切除范围、KPS、肿瘤Topo-Ⅱα和PCNA对2年生存率有意义;多因素分析表明,肿瘤的恶性程度、术前患者KPS及Topo-Ⅱα的高表达是影响星形细胞瘤患者预后的主要因素。结论:Topo-Ⅱα、Ki-67和PCNA在星形细胞瘤中的表达与其恶性程度相关,肿瘤的恶性程度、术前患者KPS及Topo-Ⅱα的高表达与患者的预后生存相关,可作为判断与预测星形细胞瘤患者预后的重要指标。

Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在先天性巨结肠症和肛门直肠畸形中的表达及意义

目的研究Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在先天性巨结肠症（Hirschsprungdisease，HD）和肛门直肠畸形中（anorectalmalformations，ARMs）的表达情况，以期探讨其在HD和ARMs发生发展中的作用。方法利用荧光实时定量PCR（quantitative real—timePCR，qRT-PCR）和蛋白质印迹（westernblot）技术检测HD狭窄肠段和正常肠段肠管组织及ARMs直肠末端（高位、中位和低位组）和死于非胃肠道疾病（正常对照组）患儿各30例中Wnt2、Wnt5b和Wnt9a表达，对其表达进行定位和定量，并比较分析。结果Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在HD狭窄段肠管中mRNA转录水平的表达分别为（10．19±0．27、10．38±0．19和11．43±0．51），均低于正常段肠管的相应表达水平（18．06±1．07、17．98±1．12、19．99±0．76）（P〈0．05）；Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在ARMs高位组中mRNA转录水平的表达分别为（14．27±0．31、13．69±0．45、13．07±0．67），均低于正常对照组（24．98±2．03、26．43±1．77、28．11±1．44）（P〈0．05），中位组和低位组之间mRNA转录水平比较无统计学意义。westernblot结果显示，Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在HD狭窄段肠管中蛋白表达水平分别为0．19±0．09、0．26±0．07、0．23±0．06，明显低于正常段肠管0．43±0．13、0．57±0．08、0．62±0．06，P〈0.05；Wnt2，Wnt5b和Wnt9a在ARMs高位组中蛋白表达水平分别为0．15±0．11、0．17±0．04、0．13±0．05明显低于正常对照组0．51±0．03、0．63±0．05、0．59±0．05，P〈0．05，而中位组和低位组之间蛋白表达水平无明显差异且与正常对照组比较无统计学意义（P〉0．05）。结论Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在HD狭窄段和ARMs的高位组表达水平减低，可能在先天性消化道畸形的肠道发育中具有重要作用。

先天性巨结肠症和肛门直肠畸形中甲基化CpG结合蛋白2基因第3外显子突变分析

目的探讨甲基化CpG结合蛋白2（MeCP2）基因第3外显子突变与先天性巨结肠症（HSCR）和先天性肛门直肠畸形（ARM）的关系。方法采用PCR和DNA直接测序的方法．检测120例HSCR、50例ARM患儿和120名健康儿童外周血MeCP2基因第3外显子（MeCP2．E3）的突变情况。结果MeCP2．E3测序结果显示，120例HSCR患儿的碱基置换突变有45例（37．5％）．其中12例（10．0％）为突变型纯合子；50例ARM患儿的碱基置换突变有14例（28．0％），其中4例（8％）为突变型纯合子：而健康对照儿童均未发现突变（P〈0．05）。结论HSCR和ARM患儿外周血MeCP2．E3存在突变．可能与疾病的发生有关．

转化生长因子β_2在发育性髋关节发育不良患儿圆韧带中的分布和表达

背景:发育性髋关节发育不良患儿关节松弛,很可能与细胞外基质成分有关。转化生长因子β2调控Ⅰ型胶原基因表达的关键性细胞因子,能促进成纤维细胞的生长、分裂,并能分泌胶原蛋白,是骨科学中纤维异常相关研究的方向之一。目的:观察发育性髋关节脱位患儿和正常儿转化生长因子β2在圆韧带中分布规律与其mRNA及蛋白质表达的差异,探索髋关节松弛的原因。方法:选取性别相同、年龄相近的6对发育性髋关节脱位患者与正常儿进行配对比较,采用免疫组化和半定量RT-PCR技术检测圆韧带中转化生长因子β2及其mRNA的分布规律与表达差异。结果与结论:分泌转化生长因子β2的成纤维细胞贴近圆韧带关节侧的滑膜层,内部纤维层转化生长因子β2阳性表达细胞稀疏。发育性髋关节脱位患儿纤维层中表达转化生长因子β2的成纤维细胞数数量明显减少(P<0.01),圆韧带中转化生长因子β2mRNA表达也明显减少(P<0.01)。由此推测,圆韧带中转化生长因子β2的分布减少和表达异常很可能与发育性髋关节发育不良患儿的髋关节松弛有关。

CXCL12及其受体CXCR4在喉鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨CXCL12以及CXCR4基因在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义。方法取39例喉鳞癌及28例正常喉组织,应用半定量的RT-PCR方法检测CXCL12以及CXCR4基因mRNA的表达。结果正常喉黏膜CXCL12基因mRNA表达量为(1.22±0.41),在有淋巴结转移(N1,N2),晚期分级(T3,T4)的喉癌组织中CXCL12表达量升高,其mRNA值分别为(1.63±0.47)和(1.57±0.61),与正常喉黏膜组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。正常喉黏膜组织的CXCR4基因mRNA表达量为(0.98±1.02),CXCR4基因mR-NA在喉癌中表达与淋巴结转移、T分级及病理分化无关,与正常喉黏膜组织mRNA表达相比,其差异没有统计学意义(P>0.05)。结论与CXCR4基因比较,CXCL12基因表达与喉癌发展关系更为密切,CXCL12基因mRNA表达升高可能与喉鳞状细胞癌的淋巴结转移及演进有关。

SELDI技术对开放性脊柱裂胎鼠羊水蛋白质组学的初步分析

目的利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对脊柱裂胎鼠模型的羊水进行初步的蛋白质组学分析。方法将25只雌性Wistar大鼠随机分为脊柱裂组(n=15)和对照组(n=10)。于妊娠第10日(E10)8时,脊柱裂组孕鼠经胃管注入全反式维甲酸与矿物油的混合物(140 mg/kg);对照组孕鼠给予等量的橄榄油。于妊娠第17日(E17)取胎鼠,立体显微镜下抽取羊水(0.2 mL/只)并确定开放性脊柱裂胎鼠。选取60只脊柱裂胎鼠和55只对照组胎鼠的羊水离心取上清。采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据。采用Ciphergen protein chip 3.1.1软件对数据进行统计分析。SELDI数据结果采用分类与回归树分析建立诊断模型,用于区分脊柱裂组胎鼠与对照组胎鼠。结果脊柱裂胎鼠羊水中共检测到55个差异蛋白峰,有统计学意义的差异蛋白峰有9个。包括5种蛋白峰高表达,优化相对分子质量(m/z)分别为11 658,27 387,7 898,11 603,13 831 Da;4种蛋白峰低表达,m/z分别为5 124,14 702,5 403,13 626 Da。选取m/z 13 831 Da和m/z 17 798 Da用于建立决策分类树诊断模型,诊断灵敏度93.33%,特异度96.36%,阳性预测值96.55%,阴性预测值96.36%。结论 SELDI技术可初步筛选出脊柱裂胎鼠羊水中的差异蛋白峰,这些蛋白可能是脊柱裂胎鼠羊水中的特异性羊水标志物。

质谱多反应监测技术筛查先天性心脏畸形蛋白标志物的价值

目的探讨质谱多反应监测技术(multiple reaction monitoring-mass spectrometry,MRM-MS)对先天性心脏畸形(congenital heart diseases,CHD)蛋白标志物的筛查价值。方法 CHD胎儿孕妇30例为CHD组,正常胎儿孕妇20例为对照组,分别采用MRM-MS法及ELISA法检测2组血清LMNA、TPM4、MYH9、TLN1、APOC1、PF4V1、SAA4和HP蛋白表达水平,Pearson法分析ELISA法与MRM-MS定量检测结果的相关性,ROC曲线评估候选蛋白标志物诊断CHD的效能。结果MRM-MS定量检测CHD组血清LMNA[(0.18±0.16)fmol/mL]、TPM4[(0.94±0.46)fmol/mL]水平低于对照组[(0.30±0.19)、(1.56±0.88)fmol/mL](P<0.05),APOC1[(33.89±13.65)fmol/mL]高于对照组[(22.81±10.49)fmol/mL](P<0.05),MYH9、TLN1、PF4V1、HP、SAA4表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);血清LMNA以0.14fmol/mL为最佳截断值,诊断CHD的AUC为0.800(95%CI:0.662~0.938,P<0.001),准确率为78.6%,灵敏度为100.0%,特异度为54.5%;血清TPM4以0.87fmol/mL为最佳截断值,诊断CHD的AUC为0.752(95%CI:0.601~0.904,P=0.001),准确率为73.8%,灵敏度为90.0%,特异度为54.6%;血清APOC1以22.8fmol/mL为最佳截断值,诊断CHD的AUC为0.777(95%CI:0.621~0.933,P<0.001),准确率为81.0%,灵敏度为80.0%,特异度为81.8%;LMNA、TPM4、APOC1分别以0.80、0.79、67.78fmol/mL为最佳截断值时,3种蛋白联合诊断CHD的准确率最高(88.1%),灵敏度为85.0%,特异度为90.9%;Pearson相关分析结果显示,MRM-MS定量与ELISA检测的LMNA、TPM4、APOC1蛋白水平均呈正相关(r=0.74,P=0.002;r=0.75,P=0.001;r=0.78,P=0.001)。结论 MRM-MS定量技术可获得LMNA、TPM4、APOC1 3种蛋白分子标志物,其联合诊断CHD具有较高的准确率。

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术研究神经管缺陷胎儿母亲尿液中蛋白质谱改变规律

目的探讨表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在筛选神经管缺陷胎儿母亲尿液中蛋白质标志物的应用。方法经超声确诊为神经管缺陷胎儿的孕妇20例和正常孕妇15例。神经管缺陷包括脊柱裂10例,无脑儿5例,脑积水5例。所有孕妇均取清晨空腹尿5ml,离心后取上清,选用CM10芯片检测。采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据。设定优化相对分子质量范围1000～30000Da。数据分析使用Ciphergen protein chip 3.1.1软件。结果共检测到39个尿液差异蛋白质峰,有统计学意义的差异蛋白质峰5个。病例组中有4种蛋白质高表达,相对分子质量分别为8320,8209,9099,10567;1种蛋白质低表达,相对分子质量3458。建立决策分类树,得到带有3个终结点的决策分类树,获得2个标志性蛋白质,分子量为9096,8244。进行留一法交叉验证后,神经管缺陷诊断模型的灵敏度为80.0%,特异度为93.3%。结论应用SELDI-TOF-MS技术可以在孕妇尿液中筛查出神经管缺陷的特异性蛋白质标志物,进一步可用于神经管缺陷产前早期无创诊断。

CD28/B7和CD134/CD134L共刺激通路阻断与免疫抑制剂联合治疗对移植心脏存活时间影响

目的探讨CD28-B7、CD134-CD134L共刺激信号通路阻断以及雷帕霉素、供体特异性脾细胞输注(DST)等联合治疗对心脏移植排斥反应的影响。方法将DA大鼠心脏移植到LEW大鼠的腹腔内,用CTLA4-Ig融合蛋白、CD134L抗体分别阻断CD28-B7、CD134-CD134L共刺激信号通路,以及雷帕霉素、DST等不同治疗组合观察对移植心脏存活时间的影响,并利用免疫组化方法观察炎症细胞浸润情况。结果CD134-CD134L、CD28-B7共刺激信号通路单独阻断和雷帕霉素单独治疗后心脏存活时间分别为7.6+0.5d、12+3.5d和19.1+6d;CD134-CD134L、CD28-B7共刺激信号通路阻断与雷帕霉素联合治疗心脏存活时间分别为25.2+2.2d和31.5+4.6d。CD134-CD134L、CD28-B7共刺激信号通路共同阻断与雷帕霉素、DST联合治疗心脏存活时间明显延长,为59.1±10.4d,另外有2例存活时间超过120d。结论单独雷帕霉素、CD134-CD134L和CD28-B7通路阻断对移植心脏炎症细胞浸润和组织坏死程度无明显改善,而两个共刺激通路同时阻断与雷帕霉素、DST联合治疗时改善效果最明显。