肿瘤细胞对体外诱导人内皮细胞血管形成的影响及VEGF的作用

目的应用Matrigel建立血管形成的体外培养体系,研究肿瘤细胞对诱导人血管内皮细胞血管形成的影响及血管内皮生长因子(VEGF)的作用,进而探讨VEGF与肿瘤血管新生的关系及其作用机制。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),应用Matrigel建立血管形成的体外培养体系;传代培养口腔鳞癌细胞株,制备肿瘤细胞条件培养液;实验分浓度效应组和时间效应组;对各实验组观察、照相后95%冰乙醇固定,CD34及激酶结构域区受体(KDR)免疫细胞化学染色;采用光镜下计数管腔数及计算机图像分析对结果进行测定并分析。结果肿瘤细胞条件培养液作用于培养的HUVECs后,培养体系的管腔数增多,且在一定范围内呈剂量和时间依赖效应(P<0.01);随培养体系的管腔数增多,血管内皮细胞KDR表达增加,在一定范围内呈剂量和时间依赖效应(P<0.01)。结论肿瘤细胞可以促进Matrigel体外诱导人内皮细胞的血管形成及KDR表达上调,并在一定范围内呈剂量及时间依赖效应。

bFGF和PDGF-BB对内皮祖细胞分化的内皮样细胞和平滑肌样细胞增殖和迁移的影响

目的探讨内皮祖细胞分化的内皮样和平滑肌样细胞在碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB作用下的增殖和迁移能力。方法将分离、培养及纯化的内皮祖细胞培养5天后进行分组:对照组、碱性成纤维生长因子组和血小板源长因子BB组。对照组使用20%胎牛血清的DMEM培养基;碱性成纤维生长因子组和血小板源生因子BB组在20%胎牛血清的DMEM培养基中分别添加碱性成纤维生长因子(30μg/L)和血小板源生长因子BB(40μg/L)。免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞以及检测内皮祖细胞内皮方向分化标记物CD31和vWF,及平滑肌方向分化标记物α-SMA和Calponin。将分化的内皮样细胞和平滑肌样细胞用MTT法和Transwell小室分别检测其增殖活性和迁移能力。结果与对照组比较,内皮祖细胞经碱性成纤维生长因子或血小板源生长因子BB诱导后呈现较强的内皮细胞(CD31,vWF)或平滑肌细胞(α-SMA,Calponin)的荧光染色,被诱导细胞分别称为内皮样细胞和平滑肌样细胞;碱性成纤维生长因子促进内皮样细胞和血小板源生长因子BB促进平滑肌样细胞增殖的作用在一定范围内具有时间(0～48 h)和浓度(碱性成纤维生长因子:0～16μg/L;血小板源生长因子BB:0～18μg/L)依赖效应。结论碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB分别可以促进内皮祖细胞分化成内皮样细胞和平滑肌样细胞,并且在碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB作用下具有明显的增殖和迁移能力。