Notch-1及Jagged-2基因在肛门直肠畸形大鼠直肠发育过程中的表达及意义

目的检测Notch-1及Jagged-2基因在肛门直肠畸形(ARM)胎鼠直肠肠壁的胚胎发育过程中的表达变化,探讨其与肠壁神经肌肉发育的关系。方法应用免疫组化和Western blot方法检测正常与乙烯硫脲致畸的ARM胎鼠直肠末端组织Notch-1及Jagged-2蛋白的定位及定量表达,应用RT-PCR方法检测Notch-1及Jagged-2基因mRNA的表达差异。结果 Notch-1/Jagged-2在正常大鼠胚胎直肠发育过程中,在肠壁肌间神经丛(MP)、肠壁平滑肌及黏膜层均有表达,随着胚胎发育,表达强度逐渐增强,胚胎晚期主要集中在肠壁平滑肌及神经丛处;ARM组E17～E21表达均较正常组减弱,E19～E21表达与正常组差异更为显著。正常胎鼠直肠末端壁内中Notch-1及Jagged-2总蛋白量及mRNA明显高于畸形组(P<0.05)。结论 Notch-1/Jagged-2基因在肛门直肠畸形的神经肌肉发育过程中表达下调,可能与其发育不良有一定关系。

Cajal间质细胞及突触素在肛门直肠畸形动物模型末端直肠壁的表达及意义

目的检测Cajal间质细胞(ICCs)及突触素(SY)在肛门直肠畸形胎鼠直肠肠壁的胚胎发育过程,探讨其表达的意义。方法应用免疫组化、免疫荧光和Western blot方法检测正常与肛门直肠畸形胎鼠直肠末端组织c-kit、SY的表达情况。结果正常组结肠及直肠壁内肠壁肌层及黏膜肌层c-kit、SY大量表达;畸形组胎鼠直肠末端壁内的分布均比对照组明显减少,发育延迟,但随着远离盲端,c-kit、SY出现并逐渐增多。正常胎鼠直肠末端壁内c-kit、SY总蛋白量明显高于畸形组(P<0.05)。结论Cajal间质细胞及突触素的分布异常是肛门直肠畸形动物模型直肠末端壁的重要病理改变之一。

首届全国小儿实验外科与临床新技术会议纪要

为促进小儿外科实验技术和研究水平的提高，由《中华小儿外科杂志》与中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室共同举办的首届全国小儿实验外科与临床新技术会议于2006年8月26-29日在沈阳召开。本次会议共收到论文104篇，其中专家讲座22篇，大会发言74篇（应用基础研究17篇，普外26篇，腹腔镜14篇，泌尿11篇，骨科6篇），会议交流8篇。参加会议的代表有来自香港和内地各个小儿外科中心的知名专家，其中包括中国工程院院士、中华小儿外科学会名誉主席、《中华小儿外科杂志》顾问、北京儿童医院张金哲教授，香港大学副校长、

先天性肛门直肠畸形胎鼠支配肛提肌感觉神经元定量研究

目的定量观察支配肛提肌的感觉神经元,探讨先天性肛门直肠畸形术后发生排便功能障碍的病因。方法采用胎仔外科、显微注射和神经示踪相结合技术对孕20 d Wistar 胎鼠支配肛提肌的感觉神经元进行荧光金标记,脊髓连续横切片,计数标记神经元数量并观察神经元形态。乙烯硫脲致畸制作先天性肛门直肠畸形动物模型。结果支配肛提肌的感觉神经元主要分布在 L_4-S_1脊髓节段的脊髓背根神经节。正常对照组(24只胎鼠)标记神经元数量为(11804±2362)个,先天性肛门直肠畸形组标记神经元数量明显减少,低位畸形组(18只胎鼠)为(2886±705)个,高位畸形组(41只胎鼠)为(1026±425)个,两个畸形组分别与正常对照组相比差异有统计学意义(均 P<0.05)。结论先天性肛门直肠畸形胎鼠支配肛提肌腰骶髓感觉神经元存在明显发育异常。

腰骶部隐性脊柱裂在小儿非潴留性便失禁发生中的意义

目的探讨腰骶部隐性脊柱裂（SBO）在小儿非潴留性便失禁（NRFI）发生中的临床意义及其病理特点。方法对27例NRFI患儿（合并SBO组21例，未合并SOB组6例）及226例无胃肠道、泌尿系统和神经系统症状的患儿（对照组）进行腰骶椎X线片、盆底神经电生理、结肠传输试验、直肠肛管向量测压和盆底肌电图等检查，分析SBO和NRFI临床症状与肛门直肠功能改变的关系。结果NRFI患儿中SBO发生率为78％（21／27），明显高于对照组[24％（54／226）]。反映支配肛门外括约肌神经功能的会阴-肛门反射潜伏期分别为（52±20）、（29±9）和（23±7）ms，NRFI合并SBO组明显长于NRFI未合并SBO组和对照组（均P〈0．05）；反映结肠传输功能的全结肠传输时间分别为（41±17）、（24±5）和（29±8）h，NRFI合并SBO组明显长于NRFI未合并SBO组和对照组（均P〈0．05）；反映肛门内括约肌功能的静息向量容积在NRFI合并SBO组、NRFI未合并SBO组和对照组分别为（376±283）、（278±133）和（662±311）cm×cm Hg^2，反映肛门外括约肌功能的收缩向量容积分别为（564±287）、（400±169）和（934±426）cm×cm Hg^2，两个病例组之间差异无统计学意义，但均明显低于对照组（均P〈0．05）。结论SBO是NRFI的主要原因，治疗上应采取神经功能恢复为主的治疗措施。

Notch-1和Jagged-2基因在先天性巨结肠中的表达及意义

目的研究先天性巨结肠症（HD）患儿各段肠管中Notch-1及Jagged-2的表达情况，初步探讨Notch-1及Jagged-2表达与HD发生的可能关系。方法选取2005-2010年间在中国医科大学附属盛京医院行手术治疗的HD患儿结肠标本共30例．将HD患儿正常段肠管设为对照组．移行段及痉挛段肠管设为实验组，应用免疫组织化学（免疫组化）染色、Westernblot及RT-PCR法观察Notch-1及Jagged-2在各肠段的表达情况。结果免疫组化染色示HD患儿正常段肠管的神经节细胞中有大量Notch-1及Jagged．2阳性细胞的表达．而在痉挛段肠管中没有这两种细胞的表达．移行段肠管中可见少量Notch-1及Jagged-2阳性细胞的表达。Westeinblot结果显示Notch-1和Jagged-2蛋白在痉挛段肠管相对表达量分别为0．19±0．02和0.13±0．04．明显少于移行段肠管和正常段肠管（0．58±0．05和0．52±0．04；0．72±0．04和0．69±0．04）（P〈0．05）。RT—PCR结果显示，Notch-1及Jagged-2的mRNA水平与蛋白表达一致。结论HD患儿痉挛段肠管中Notch-1及Jagged-2的表达缺失可能与HD的发生有关。

针对性生物反馈训练方法治疗合并隐性脊柱裂的便秘和便失禁的疗效

目的探讨针对性生物反馈训练方法对合并隐性脊椎裂的功能性便秘（FC）和非潴留性便失禁（NRF）患儿治疗效果。方法2003-2006年对34例FC患儿和21例NRFI患儿进行常规保守治疗，在保守治疗无效的患儿中有15例FC患儿和9例NRFI患儿接受针对性生物反馈训练和神经电刺激治疗，并进行客观功能检查，评价治疗效果。结果经过保守治疗有22例（40％）患儿治愈，5例明显好转。保守治疗无效的24例患儿经过针对性生物反馈训练和神经电刺激治疗有19例（79．2％）患儿治愈，其余5例明显好转。保守治疗无效患儿组的平均病程为（3．1±2．9）年，明显长于保守治疗有效的患儿组（2．0±1．2）年（P〈0．05），客观检查结果也显示保守治疗无效患儿组的反映肛门直肠功能的指标改变明显严重于保守治疗有效的患儿组，经过针对性生物反馈训练和神经电刺激治疗各项指标均明显恢复（P〈0．05）。结论针对性生物反馈训练和神经电刺激治疗是治疗合并隐性脊椎裂的FC和NRFI患儿的有效方法。

生物反馈治疗对隐性脊椎裂患儿排便功能的影响

目的探讨生物反馈方法对隐性脊椎裂患儿排便功能的影响。方法选取68例隐性脊椎裂合并功能性便秘的患儿进行常规保守治疗。保守治疗无效的患儿接受生物反馈治疗，并进行客观指标检查，评价治疗效果。57例无肛肠及神经系统疾病儿童为正常对照组。结果68例经保守治疗，27例治愈，6例明显好转。35例保守治疗无效的患儿有31例接受全部疗程生物反馈治疗。客观评价指标显示，保守治疗无效患儿反映肛门直肠功能的指标改变明显严重于保守治疗有效的患儿，静息向量容积、收缩向量容积、直肠感觉阈值、静息肌电振幅、会阴一肛门反射潜伏期、传输指数两组比较差异均有显著性（P〈0．05）。生物反馈治疗后，除静息向量容积，其余各项指标与治疗前比较差异有显著性（P〈0．05），其中收缩向量容积、直肠感觉阔值、静息肌电振幅和收缩肌电振幅与正常组比较差异无显著性。基本达到正常。结论隐性脊椎裂可能是功能性便秘的主要原因之一，生物反馈训练是有效的治疗方法。

宫内移植rAAV—BDNF对抑制胚胎期显性脊柱裂胎鼠神经细胞凋亡的影响

目的探讨重组腺相关病毒载体（recombinant adeno-associated virus，rAAV）介导的脑源性神经营养因子（BDNF）对先天性脊柱裂中神经细胞凋亡的抑制作用。方法利用维甲酸灌胃的方法对18只Wistar孕鼠致畸制作先天性脊柱裂胎鼠动物模型，其中BDNF转基因治疗组和空载体治疗组各9例，于孕16d（E16）进行胎仔外科手术，分别向显性脊柱裂胎鼠腰骶部注射1μ1（大约2x10。TU）rAAV-BDNF和rAAV-ZsGreen病毒悬液；正常对照组孕鼠10例，不做任何处理。结果转基因治疗组胎鼠的存活率为70．oH，空载体治疗组胎鼠的存活率为71．4％，两组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。BDNF转基因治疗组BDNF的表达明显高于空载体治疗组和正常组。TUNEL染色显示BDNF转基因治疗组平均每个脊髓切片的凋亡细胞数较空载体治疗组和正常对照组明显减少，各组之间的差别有统计学意义（P〈0．05）。结论BDNF转基因疗法能够显著抑制先天性脊柱裂胎鼠脊髓缺损组织神经细胞的凋亡，对显性脊柱裂治疗具有潜在应用价值。