WIF-1阻断WNT通路对PAX2诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化作用的影响

目的体外转染配对盒基因2(PAX2)观察其对WNT通路的激活作用,应用WIF-1阻断WNT信号通路后观察WNT通路对PAX2基因诱导转分化的作用,探讨PAX2基因转分化机制。方法应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选建立稳定表达PAX2细胞系,将实验细胞分为转染组、空载组和对照组,采用Western blot和实时PCR对各组进行WNT通路分子WNT4及β-catenin表达检测。加入WIF-1至稳定转染PAX2细胞中,分为WIF-1 5μg/mL组、WIF-1 10μg/mL组、WIF-1 15μg/mL组及稳转组。加药后48 h收集细胞,应用免疫荧光法、Western blot和实时PCR检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达。结果 Western blot和实时PCR结果显示,转染组WNT4和β-catenin蛋白和mRNA表达水平较空载组及对照组明显增加(P<0.05)。免疫荧光法、Western blot和实时PCR结果显示,WIF-1 5μg/mL组、WIF-1 10μg/mL组和WIF-1 15μg/mL组β-catenin和α-SMA蛋白及mRNA表达较稳转组下调(P<0.05),WIF-1 15μg/mL组下降明显,各浓度WIF-1组E-cadherin蛋白及mRNA较稳转组明显上调(P<0.05),WIF-1 15μg/mL组明显。结论 PAX2基因可以在体外肾小管上皮细胞激活WNT通路。应用WIF-1阻断WNT通路后出现转分化逆转。推测PAX2基因可能通过WNT通路诱导上皮细胞间充质转分化。

PAX2基因在梗阻性肾病大鼠肾小管上皮细胞重新表达的意义

【目的】探讨PAX2基因在梗阻性肾病大鼠肾小管上皮细胞的重新表达对肾间质纤维化的意义。【方法】80只大鼠随机分为：假手术组（sham组）和模型组（UUO组）各40只。于术后3d、5d、7d、14d（每组10只）处死取肾组织。光镜观察肾脏病理形态改变，免疫组化、Westernblot及realtimePCR检测肾组织PAX2蛋白和mRNA的表达。【结果】①HE和Masson染色观察到UUO组肾间质呈现明显的纤维化。②免疫组化发现sham组肾小管上皮细胞无PAX2表达；UUO组肾小管上皮细胞表达较多；③Westernblot显示PAX2蛋白水平在UU0组术后3d相比sham组明显的增加（P〈0．05），随着梗阻时间延长PAX2蛋白表达更加明显；④realtimePCR显示，PAX2mRNA与PAX2蛋白的，矗达趋势相同。⑤相关分析：PAX2蛋白水平与肾小管损伤程度呈正相关（r=0．991，P〈0．05），与肾间质纤维化程度呈正相关（r=0．985，P〈0．05）。【结论】胚胎发育基因PAX2在梗阻性肾病大鼠肾小管存在重新表达；并参与了梗阻性肾病肾小管损伤和肾间质纤维化的过程。

PAX2在梗阻性肾病大鼠中重新表达与尿β2-MG关系研究

目的:探讨PAX2基因在梗阻性肾病大鼠重新表达对肾功能的影响。方法:将80只成年雄性大鼠随机分为:假手术组(sham组)40只,模型组40只(单侧输尿管结扎,UUO组)。分别于术后3d、5d、7d、14d(每组10只)处死,留取肾组织。光镜观察肾脏病理形态学改变,采用免疫组化检测肾组织PAX2蛋白表达。全自动生化分析仪一次性检测尿β2-MG含量。结果:①HE和Masson染色观察到UUO组出现明显的纤维化表现;②免疫组化结果显示UUO组随着梗阻时间的延长PAX2蛋白表达逐渐增加,UUO组尿β2-MG含量逐渐升高;③相关分析表明:PAX2蛋白表达量与尿β2-MG含量呈正相关(r=0.912,P<0.05)。结论:胚胎发育基因PAX2在梗阻性肾病大鼠重新表达与肾功能密切相关。

儿童类固醇糖尿病四例临床分析

目的探讨儿童类固醇糖尿病的临床特点及治疗方法。方法回顾性分析2008年6月-2009年4月我院收治的4例儿童类固醇糖尿病患儿的临床表现、实验室检查及治疗效果。结果4例类固醇糖尿病患儿,3例于糖皮质激素治疗2～3个月后发生,激素(相当于泼尼松)总量约2 235～5 985 mg,1例(母亲妊娠糖尿病)于大剂量甲强龙500 mg冲击治疗1 d后发生,均无多饮、多尿、体重减轻等糖尿病典型表现。3例患儿采用胰岛素治疗,其中2例分别于治疗后3个月、4.5个月后,血糖恢复正常,停用胰岛素,达到临床治愈;1例目前仍激素治疗,继续胰岛素治疗中,血糖控制平稳。另1例体质指数(BMI)29.2,伴胰岛素抵抗及2型糖尿病家族史,通过饮食及运动,餐后2 h血糖能够控制在5.2～12.2 mmol/L,暂未予胰岛素治疗。结论大剂量、长疗程使用糖皮质激素的患儿易导致类固醇糖尿病的发生,监测餐后血糖(尤其是餐后2 h)具有重要意义;伴有高危因素的患儿,在大剂量使用糖皮质激素前,建议行OGTT实验,以充分评价有无糖耐量异常,从而慎重地选择激素用量。

原发性肾病综合征患儿槐杞黄颗粒治疗前后血清细胞因子变化的研究

目的观察原发性肾病综合征(PNS)患儿血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-18、IL-10的动态变化,及槐杞黄颗粒对炎症因子和感染、复发的影响。方法2008-06-01—2009-07-31收治于中国医科大学附属盛京医院小儿肾内科的初发PNS患儿67例,随机分为两组:槐杞黄组35例,给予泼尼松加槐杞黄颗粒口服;激素组32例,单纯给予泼尼松口服。观察两组治疗前,治疗0.5、1、3和6个月血清TNF-α、IL-18、IL-10的动态变化,并记录1年内感染和复发次数。健康体检儿童25名为对照组。采用ELISA方法检测血清TNF-α、IL-18、IL-10。结果(1)槐杞黄组感染次数(19例次)明显少于激素组(58例次),槐杞黄组复发例数(7例,20%)明显少于激素组(12例,37.5%)。(2)治疗前两组未复发病例TNF-α显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);0.5个月时两组均显著下降至正常水平(P<0.05),之后无明显变化,组间无差异。(3)治疗前两组未复发病例IL-18明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);至3个月后槐杞黄组显著降低(P<0.05),并低于激素组,但仍明显高于对照组(P<0.05)。(4)治疗前两组未复发病例IL-10显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);0.5个月时槐杞黄组、激素组均明显降低,分别为(6.75±1.77)pg/mL、(7.79±3.01)pg/mL,且低于治疗前(P<0.05),两组间差异无统计学意义;至6个月时槐杞黄组明显上升([13.29±7.19)pg/mL]且高于激素组([7.48±3.04)pg/mL(]P<0.05)及治疗前,仍未达到正常水平。(5)复发病例中,槐杞黄组TNF-α显著低于激素组(P<0.05),两组IL-10及IL-18差异无统计学意义。结论TNF-α、IL-18、IL-10参与PNS的发病,致炎因子/抑炎因子失衡可能是PNS的发病机制之一。槐杞黄颗粒可能通过降低IL-18的致炎作用,增强IL-10的抑炎作用,从而减少PNS患儿感染及复发。

早期诊断急性肾损伤的生物学标志物研究现状

急性肾损伤（AKI）是一种常见的严重疾病。由于缺乏诊断AKI的早期生物学标志物，往往导致早期有效治疗的延误。目前对于诊断AKI新的生物学标志物的研究已发展到了临床研究阶段，最有希望成为早期诊断AKI的生物学标志物包括中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、IL-18、肾损伤分子-1和L-脂肪酸结合蛋白。本文就近年来关于上述几种生物学标志物的研究作一综述，为应用早期诊断AKI的生物学标志物提供理论依据。

沉默PAX2基因对肾间质纤维化大鼠的影响

目的探讨体内沉默PAX2基因对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞转分化(EMT)的影响。方法 64只Wistar大鼠麻醉后,单侧输尿管结扎法制作肾间质纤维化大鼠模型,随机分为阴性对照组和PAX2基因沉默组,每组32只。将200μL NC-siRNA-in vivo jetPEI^(TM)混合液转染阴性对照组大鼠,将200μL PAX2-siRNA-in vivo jetPEI^(TM)混合液转染PAX2基因沉默组大鼠,各组分别于转染后3、5、7、14 d分为4个亚组,每组8只。留取各组肾组织标本,应用Real-Time PCR及Western blot法检测肾皮质PAX2 mRNA及其蛋白的沉默情况,以及E-钙粘连素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达情况。结果 PAX2基因沉默组PAX2 mRNA和蛋白表达量较阴性对照组均降低(P<0.05)。随着梗阻时间的延长,两组E-cadhelin mRNA和蛋白表达量逐渐下降,α-SMA mRNA和蛋白表达量逐渐升高;在转染14 d时,PAX2基因沉默组E-cadhelin mRNA和蛋白相对表达量明显高于阴性对照组(P<0.05),而α-SMA mRNA和蛋白相对表达量明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论沉默PAX2基因在肾间质纤维化晚期大鼠中可明显抑制肾小管EMT进程,可能对肾间质纤维化有治疗作用。

水通道蛋白2在脓毒症大鼠肾脏的表达及意义

目的探讨水通道蛋白2（AQP2）在脓毒症大鼠肾脏的表达及对水代谢调节的意义。方法将6周龄Wistar大鼠64只，随机分为假手术组和手术组各32只，采用盲肠结扎穿孔法（CLP）复制脓毒症模型。每组分为3、6、12和24h4个亚组，各8只，分别留取尿液、血液、肾脏标本。观察尿量、尿渗透压和肾功能，HE染色光镜观察肾脏病理变化，采用实时定量PCR方法检测AQP2mRNA表达，免疫组织化学方法检测AQP2的蛋白表达。结果手术组大鼠术后3h尿量减少、尿渗透压增高，6h后尿量逐渐增多、尿渗透压降低；血肌酐和尿素6h开始升高，24h达高峰；随术后时间延长肾脏病理损害加重，主要表现为肾小管上皮细胞之间间隔消失，细胞核消失；肾小球球襻融合，细胞结构不清；间质可见点灶状炎性细胞侵润。AQP2mRNA的表达在术后3h增高，12、24h明显减低；AQP2蛋白表达在术后12h下降，24h最低，较假手术组均有显著性差异（P〈0．05）。结论AQP2参与脓毒症时肾脏水代谢的调节，AQP2表达下调是导致脓毒症尿浓缩功能障碍的主要病理机制之一。

NGAL在急性肾损伤与泌尿系统感染患儿血及尿中的改变及临床意义

目的探讨儿童不同程度急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）患儿和泌尿系统感染患儿和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase associated lipocalin, NGAL）在血及尿中的改变，以明确NGAL在儿童AKI诊断中的意义。方法根据儿童AKI诊断标准，将人选患儿分别纳入AKI—R、I和F组，将同时期收治的儿童泌尿系统感染（urinary tract infection, UTI）患儿和儿童保健门诊患儿分别纳入uTI组和正常对照组。采用ELISA方法检测血和尿NGAL，尿NGAL与尿肌酐的比值作为尿NGAL的最后结果。结果2009年6月至2010年12月收入到儿科肾脏病房的儿童AKI入选患儿共85例，AKI-R组42例，AKI—I组26例，AKI—F组17例。同期收治的儿童UTI组患儿51例，对照组儿童保健门诊入选患儿30例。AKI—I和AKI-F组SCr值明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈n001）；AKI—R、I、F组血NGAL值均明显高于和正常对照组，差异有统计学意义（P〈n001）；AKI-R、I、F组和UTI组患儿尿NGAL值均明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P〈0．001）。AKI—I和F组患儿血和尿NGAL均和SCr值有相关性（P〈0．001）。结论血和尿NGAL在AKI患儿中明显升高，且敏感性好于SCr。泌尿系统感染患儿尿NGAL升高，但升高的程度低于较重的AKI患儿，而血NGAL未见明显升高。在AKI—I和F组患儿血和尿NGAL均和SCr值有相关性。因此，NGAL对于儿童AKI的早期诊断有一定的临床意义。

雷公藤多苷治疗儿童过敏性紫癜肾炎的疗效分析

目的探讨雷公藤多苷治疗儿童过敏性紫癜肾炎单纯血尿型及血尿和蛋白尿型的临床疗效。方法临床表现为单纯胜血尿的患儿和l}缶床表现为血尿和蛋白尿的患儿68例随机分组，分为雷公藤多苷治疗纽和对照组，分别计算患儿用药1个月和3个月后尿中红细胞降为3个／HP以下的例数和尿蛋白定量的降低隋况。结果单纯血尿及血尿和蛋白尿患儿雷公藤多苷治疗组的疗效明显好于对照组（P〈Q05），且雷公藤剂量1．5mg／（kg·d）降尿蛋白的作用好于常规剂量1me,／（kg·d）（P〈n05）。结论雷公藤多苷治疗过敏『生紫癜肾炎单纯血尿型疗效确切，与口服泼尼松合用治疗血尿型和蛋白尿型疗效明显好于单用泼尼松。

PAX2在肾脏中表达及其意义

PAX2转录因子是肾脏发育的重要调控因子，可在前肾、中肾和后肾发育的全过程中表达，参与胚胎肾脏各个发育阶段的调控，在成熟肾单位表达消失。近来发现，PAX2在病理肾中出现再表达，其基因突变和重新表达与肾脏先天及后天性疾病紧密相关。该文从PAX2的正常表达、基因突变与异常表达在肾脏疾病中的作用和意义方面展开综述。

PAX2与急慢性肾脏疾病研究进展

配对盒基因2(paired box2,PAX2)是一种核转录因子,表达在发育期肾脏。研究表明PAX2通过与PTIP的相互作用使染色质处于可转录状态,与Grg4的相互作用削弱了其与PTIP结合而抑制转录。 PAX2在急性肾损伤时再表达,参与促进细胞增殖修复。先天PAX2基因突变与先天性肾脏输尿管异常密切相关。在慢性肾脏疾病,PAX2起到促进增殖及囊肿形成的作用。该文就PAX2的功能及其在急性肾损伤和慢性肾脏疾病中作用的相关研究进行综述。

N-myc下游调节基因-2在输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及意义

目的 观察N-myc下游调节基因-2(N-myc downstream regulated gene-2,NDRG2)在大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型上的表达,探讨肾脏纤维化发病的机制.方法 雄性Wistar大鼠48只,数字法随机分为假手术组(24只,行左侧输尿管分离术)和手术组(24只,行左侧输尿管结扎离断术),各组大鼠分别在术后3d、7d、14 d、21 d各6只取材,留取左肾标本.用HE、Masson染色观察肾小管损伤的病理变化,采用Western blot、免疫组化方法检测E-cadherin和α-SMA的表达情况,从而验证造模成功.用实时定量PCR、Western blot、免疫组化验证NDRG2的表达.结果 假手术组各时间点无差异.与假手术组相比,UUO组大鼠随着梗阻时间延长,肾小管损伤程度逐渐加重,E-cadherin蛋白表达减少(P＜0.05),α-SMA蛋白表达增加(P＜0.05).NDRG2蛋白表达在UUO组明显低于假手术组(P＜0.05),随梗阻时间延长递减.用ImagePro Plus 6.0分析NDRG2免疫组织化学OD值,在21 d时最低(14.33 ±2.45)×10-3;Westem blot结果采用目的蛋白与内参OD值之比,21 d时最低为0.03 ±0.01;实时PCR显示NDRG2 mRNA在UUO组显著降低(P＜0.05).结论 在UUO模型中,NDRG2表达下调,其有可能参与了肾脏纤维化的病理过程.

角质细胞生长因子-1在脓毒症大鼠肾脏的表达及意义

目的探讨角质细胞生长因子-1（keratinocyte growth factor-1，KGF-1）在脓毒症大鼠肾脏的表达及意义。方法将80只6周龄健康雄性Wistar大鼠随机分成手术组和假手术组（各40只）。用盲肠结扎穿刺法制备脓毒症大鼠模型。两组分别在术后3h、6h、12h、24h和36h留取血液及肾脏标本，HE染色光镜观察大鼠肾脏病理学变化，测定血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）浓度及WBC计数，免疫组织化学SABC染色法检测KGF-1蛋白表达，实时荧光定量PCR法检测KGF-1mRNA的基因相对表达量。结果与假手术组相比，手术组24h肾损伤最严重，可见肾小管空泡变性，大量中性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞浸润、局部有点状出血、坏死；血Cr、BUN术后3h无明显升高，6h后升高，24h达峰值，36h略有下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。KGF-1蛋白及基因表达6h最强，12h有所下降，24h出现第二次表达高峰，36h又有所下降，均明显高于假手术组（P〈0．01）。KGF-lmRNA与BUN成正相关（r=0．504，P〈0．01），与Cr成正相关（r=0．382，P〈0．05）。结论KGF一1在正常大鼠肾脏中即有表达，主要集中在髓质肾小管上皮细胞，皮质肾小管也有分布。脓毒症受损肾脏的KGF一1表达显著增强且与肾脏损伤程度呈正相关，推测KGF-1是影响感染后肾脏损伤修复的重要因素之一。

细胞自噬在急性肾损伤中的作用

急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是一种临床预后较差的常见疾病,肾小管上皮细胞的损伤及死亡是其主要的病理特征.近年来,大量的研究已经表明在急性肾损伤过程中,自噬在肾小管上皮细胞中被诱导发生.在多种药理干预或自噬相关基因敲除的急性肾损伤模型中,自噬能通过抑制炎症反应、清除损伤的细胞器等相关机制减少细胞凋亡,保护肾脏损伤.但是也有研究表明自噬在急性肾损伤中起损害作用.阐明自噬在急性肾损伤中的作用及相关调节机制能够为急性肾损伤的治疗及预后提供重要线索.

N-myc下游调节基因-2的研究进展

NDRG2基因全称为N-myc下游调节基因-2,是NDRG家族成员之一,该基因有高度的同源性,主要参与细胞增殖及分化.目前主要作为抑癌基因被大量研究,除此之外,其还参与组织胚胎的发育、神经系统的发育及其疾病,参与醛固酮对肾远曲小管和集合管的水钠代谢调节作用,参与应激反应.该文就NDRG2的转录调控机制、分子间相互作用机制作一综述.