中耳胆脂瘤中P-Akt和Foxo3的表达及其和凋亡的关系

目的检测人类叉头框O3(forkhead box O3,Foxo3)蛋白、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-Akt)在中耳胆脂瘤的表达和DAPI核染色情况。方法应用免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)检测中国医科大学附属盛京医院2019年8月-11月期间30例中耳胆脂瘤标本(分为原发性胆脂瘤组和继发性胆脂瘤组)及15例正常皮肤标本中Foxo3和DAPI核染色情况;应用Western blot免疫印迹法检测以上标本中P-Akt(ser473)、Foxo3及内参GAPDH的表达情况;应用SPSS 22.0统计软件进行统计学分析。结果①免疫荧光实验显示,Foxo3定位于胆脂瘤和正常皮肤的细胞核和细胞质,DAPI染色于细胞核;Foxo3在中耳胆脂瘤的荧光值明显弱于正常皮肤,差异具有统计学意义(t=2.78,P=0.007,P<0.01);DAPI在中耳胆脂瘤的荧光值弱于正常皮肤,差异具有统计学意义(t=2.08,P=0.03,P<0.05);Foxo3和DAPI在原发性胆脂瘤和继发性胆脂瘤的染色均无统计学差异。②Western blot免疫印迹法检测显示:胆脂瘤中P-Akt(ser473)的表达量明显高于正常皮肤中的表达量,两者差异具有统计学意义(t=2.05,P=0.02,P<0.05);Foxo3的表达量明显低于正常皮肤,差异具有统计学意义(t=1.94,P=0.04,P<0.05);两者在原发性胆脂瘤和继发性胆脂瘤的表达均无统计学差异。③在中耳胆脂瘤标本中,Foxo3和DAPI呈显著正相关(r=0.451,P=0.001,P<0.01);P-Akt(ser473)和Foxo3的表达呈显著负相关(r=-0.466,P=0.0007,P<0.01)。结论中耳胆脂瘤的DAPI和Foxo3荧光染色均弱于正常皮肤组织,且两者呈正相关;胆脂瘤中P-Akt表达明确高于正常皮肤组织,而Foxo3在胆脂瘤中的表达明确低于正常皮肤,且两者呈负相关。这提示PI3K/Akt/Foxo3通路通过抑制凋亡的方式参与中耳胆脂瘤的发病过程。

异种脱细胞真皮基质修复耳廓前面皮肤缺损

2017年8月至2020年1月我科应用异种脱细胞真皮基质修复15例耳廓前面良、恶性肿物切除术后遗留皮肤缺损的患者,观察异种脱细胞真皮基质修复耳廓前面肿物切除后皮肤缺损的临床效果。异种脱细胞真皮基质用于修复耳廓前面肿物切除后皮肤缺损简便、可靠,可获得较满意的效果。

小干扰RNA靶向沉默磷酸酶张力蛋白同源物基因在角质细胞中的表达及其对中耳胆脂瘤增殖的影响

目的应用小干扰RNA(siRNA)沉默第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在角质形成细胞中的表达来研究PTEN对胆脂瘤增殖能力的影响,及与其相关的细胞外信号调节激酶5(extracellular-regulated kinase 5,ERK5)蛋白表达,探讨两者在胆脂瘤中的作用。方法将siRNA转染空白对照组、阴性对照组和特异转染组,用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Western blot检测三组细胞的增殖能力、PTEN和磷酸化的ERK5(P-ERK5)表达及相关性。结果①特异转染组OD值明显高于空白对照组(t=2.83,P=0.008)及阴性对照组(t=2.75,P=0.006)。②PTEN在特异转染组中表达明显低于空白对照组(t=2.45,P=0.009)及阴性对照组(t=2.56,P=0.007);P-ERK5在特异转染组中表达明显高于空白对照组(t=1.82,P=0.03)及阴性对照组(t=1.79,P=0.04)。③特异转染组中PTEN和P-ERK5的表达呈显著负相关(r=-0.417,P=0.02)。结论PTEN在角质细胞发展成胆脂瘤细胞过程中起到抑制增殖作用,可能通过负向调控MEK5/ERK5信号通路完成。

中耳胆脂瘤中活性氧及磷酸化蛋白激酶的表达及相关性研究

目的检测中耳胆脂瘤上皮组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-AKT)的表达及两者的相关性,探讨ROS在中耳胆脂瘤发病机制中的作用。方法应用免疫荧光技术检测中国医科大学附属盛京医院2019年9月~12月期间25例中耳胆脂瘤标本及15例正常皮肤标本中ROS的表达量;应用Western blot免疫印迹法检测上述标本中P-AKT和内参GAPDH的表达;并进一步分析ROS和P-AKT表达的相关性。结果免疫荧光染色显示,ROS定位于胆脂瘤和正常皮肤的细胞核,ROS在中耳胆脂瘤的平均荧光值(112.41±14.61)明显高于其在正常皮肤的平均荧光值(15.23±1.97)(t=3.24,P<0.01);Western blot免疫印迹法检测显示,胆脂瘤中P-AKT的平均灰度值(0.95±0.08)明显高于正常皮肤中的平均灰度值(0.41±0.07)(t=2.04,P<0.05);在中耳胆脂瘤标本中,ROS与P-AKT的表达呈显著正相关(r=0.508,P<0.01)。结论中耳胆脂瘤组织中ROS和P-AKT均过度表达,明显高于正常皮肤组织,且两者呈正相关,ROS可能通过PI3K/AKT信号通路参与了中耳胆脂瘤的发病过程。