早期炎性反应对移植静脉中外源基因表达效率的影响

目的探讨早期炎性反应对移植静脉中腺病毒载体转染的外源基因表达效率的影响。方法通过颈外静脉将携lacZ基因的腺病毒载体注入大鼠的颈总静脉中,使其自然充盈。室温下孵育3 0m in后,将转基因静脉间置移植于颈总动脉。在静脉转基因后3,1 4,2 1 d取材。经X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)染色检测静脉中标记基因的表达,测定β-半乳糖酶的活性。常规免疫组化染色观察静脉中细胞内黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达。结果外源基因在体表达1 4 d时β-半乳糖酶活性下降,至2 1 d时活性近消失。静脉移植后3 d,VCAM-1和ICAM-1表达上调,白细胞浸润,内皮细胞脱落,内皮层不完整。而未进行移植的转基因静脉,内皮细胞无VCAM-1及ICAM-1的表达,血管壁无炎性细胞浸润,内皮细胞完整。在移植静脉中,阳性内皮细胞数比未移植静脉明显减少(P<0.0 5),平滑肌细胞数则与未移植静脉相比无明显差别。结论移植静脉早期炎性反应造成的内皮细胞损伤与转基因表达迅速下降有关。

腺病毒介导胸苷激酶基因对静脉平滑肌细胞增殖及内膜增生抑制作用的研究

目的探讨以腺病毒为载体介导胸苷激酶(tk)基因对静脉平滑肌细胞增殖及内膜增生的抑制作用。方法腺病毒载体携tk及β半乳糖苷酶(lacZ)基因转染人的大隐静脉平滑肌细胞及大隐静脉片,以不同浓度的更昔洛韦(GCV)培养。通过X gal染色观察标记基因lacZ的表达效率。将转染tk基因阳性与tk基因阴性的平滑肌细胞以不同的比例混合培养观察旁观者效应。将转染tk基因的静脉片在含有GCV的培养液中培养14d,取标本进行HE、VG染色,辅以计算机图像分析,观察内膜增生情况。结果腺病毒载体能有效地转染培养的平滑肌细胞和静脉片中的平滑肌细胞,外源基因表达持续14d。平滑肌细胞增殖受抑制程度与GCV的浓度和tk表达的水平呈正相关。转染lacZ的平滑肌细胞则不被GCV抑制。混合细胞培养(tk阳性及tk阴性细胞混合),当10%的细胞表达tk基因时,细胞生存率下降了55%。在静脉片培养实验中,tk/GCV组与对照组(lacZ/GCV和tk/GCV-)比较,前者内膜增生60%受到抑制。结论tk基因合并GCV治疗具有抑制平滑肌细胞增殖和移植静脉内膜增生的作用,tk基因治疗具有旁观者效应。

血液透析动静脉内瘘术36例分析

目的：总结血液透析动静脉内瘘术的经验。方法；收集我院36例患者，鼻咽窝内瘘术7例、腕部头静脉及桡动脉内瘘术29例。结果：手术均—期成功，无并发症出现，术后内瘘使用良好。结论：严格遵守血管外科操作技术是手术成功的保证，鼻咽窝内瘘效果好。

二氢睾酮通过下调LOX-1的表达抑制J774．1细胞向泡沫细胞转化

目的探讨雄激素二氢睾酮（DHT）对雌性巨噬细胞系J774．1细胞的植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）表达及泡沫细胞形成的影响。方法体外培养J774．1细胞，通过氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）诱导巨噬细胞向泡沫细胞转化，采用1×10^-9mol／L和1×10^-8mol／L浓度的DHT进行预处理，提取细胞mRNA及蛋白行实时定量PCR及Western印迹法检测LOX-1mRNA及蛋白表达，油红O染色观察泡沫细胞形态，按照泡沫细胞数／视野及每个视野中油红染色的颗粒面积进行定量分析。结果与对照组（加入乙醇）相比，ox—LDL明显增加J774．1细胞的LOX-1mRNA（4．71±0．31比1．00±0．06）及蛋白（1．75±0．11比1．04±0．04）相对表达水平（均P〈0．01）。应用1×10^-9mol／L和1×10^-9mol／L浓度的DHT可以降低ox-LDL诱导的LOX-1mRNA（2．81±0．46、2．29±0．21比4．71±0．31，均P〈0．05）和蛋白表达水平（1．35±0．06、1．09±0．04比1．75±0．11，均P〈0．05）。这种作用可通过雄激素受体（AR）阻滞剂逆转87．6％（P=0．004）。油红O染色表明ox—LDL明显增加泡沫细胞形成（45．9±3．7比0．0±0．0，P〈0．01）。应用1×10^-9mol／L和1×10^-8mol／L浓度的DHT可以抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞形成（泡沫细胞数／视野定量分析：36．0±3．0、29．1±1．3比45．9±3．7，均P〈0．05；油红O相对染色面积定量分析：7983±1035、4060±390比14750±2489，均P〈0．05）。结论1×10^-9mol／L和1×10^-8mol／L浓度的DHT通过AR可以减少雌性巨噬细胞系J774．1细胞的LOX-1表达，并抑制J774．1细胞向泡沫细胞转化。