精氨酸对大肠癌患者免疫功能及肿瘤细胞增殖活性的影响

目的 探讨精氨酸 (Arg)对大肠癌患者免疫功能及肿瘤细胞增殖活性的影响。 方法 大肠癌患者 34例 ,随机分 2组。实验组静脉输注Arg 2 5 g/d、连续 3d。检测细胞免疫指标 :T细胞亚群 ,NK细胞活性 ,淋巴细胞转化率 ;红细胞免疫指标 :C3b受体花环率 (C3bERR) ,免疫复合物花环率(ICR) ,循环免疫复合物 (CIC)以及体液免疫指标。免疫组织化学方法和流式细胞仪研究肿瘤细胞增殖活性的变化。 结果 实验组CD4 + 、CD4 + /CD8+ 、NK细胞活性、C3bRR均有提高 ,尤以CD4 + 、NK细胞活性提高明显 (P <0 .0 1) ;淋巴细胞转化率和CIC亦有改善 ,但仅组内比较差异显著 (P <0 .0 5 ) ;C3bRR变化与NK细胞活性变化之间呈正相关 (r =0 .5 80 4,P <0 .0 5 ) ;增殖细胞核抗原 (PC NA)表达显著下降 ,由 5 5 .8%降至 42 .6 % ,(P <0 .0 1) ,S期 %及 (S +G2 +M )期 %亦显著降低 (P <0 .0 5 ) ,而对照组各指标均无显著变化 (P >0 .0 5 )。 结论 短期应用药理剂量的Arg可以改善大肠癌患者的细胞免疫、红细胞免疫指标 ,抑制肿瘤细胞的增殖活性。

经颈静脉肝内门体静脉内支架分流术术式改良的实验研究

目的 探讨建立改良式猪经颈静脉肝内门体静脉内支架分流术 (TIPSS)模型的可行性及其意义。方法 11只家猪分成 2组 ,7只采用改良术式 (经肝段下腔静脉穿刺门脉 )建立TIPSS模型 ,另 4只行常规TIPSS作对照。共置入 4枚进口覆膜镍钛合金支架 ,8枚国产覆聚氨酯膜支架。其中 ,改良组 7只猪置入 7枚支架 (4枚进口支架 ,3枚国产支架 ) ;对照组 4只猪置入 5枚国产覆膜支架(1只猪置入时支架发生移位 ,故加用 1枚支架 )。术后 4周 (5只 ) ,8周 (2只 )和 12周 (4只 )进行门脉造影观察分流道通畅情况。动物处死后 ,行分流道大体和组织病理学检查。结果 术后 4周 ,改良组2只分流道通畅 (进口支架、国产支架各 1枚 ) ,分流道表面均形成完整的假性内膜组织 ;另 5只分流道在 4至 12周均闭塞 ,分流道内形成血栓 ,其中 2只内支架伸入下腔静脉内不全 ,陷入肝实质内。常规组 4只分流道在 4、8和 12周观察期内均闭塞。两组间分流道肝 (下腔 )静脉端 ,肝实质段和门静脉端各段的增生组织厚度对比差异均无显著性意义 (t值分别为 0 14、0 16和 0 2 0 ,P值均 >0 0 5 )。结论 改良式猪TIPSS模型的建立是安全和可行的。改良式TIPSS中应采用覆膜支架 ,并应有足够长度伸入至两端静脉内 。

RACK1通过影响MCM7磷酸化促进肺癌细胞的增殖

目的:研究蛋白激酶C受体1(receptor for activated Ckinase1,RACK1)基因沉默或过表达对大细胞肺癌细胞系H460及肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用脂质体转染法分别将针对RACK1基因的RACK1siRNA和重组质粒pCMV-sport6-RACK1转入H460和A549细胞中。采用MTT法和集落形成实验分析RACK1基因对细胞增殖的影响,FCM检测其对细胞周期的影响;采用酵母双杂交法、免疫共沉淀法、激光共聚焦显微术及磷酸化蛋白免疫共沉淀法检测RACK1表达与肺癌细胞增殖之间的关系。结果:转染RACK1siRNA后,H460和A549细胞中RACK1蛋白的表达量明显下调,细胞的增殖能力和集落生成数明显降低,S期细胞所占比例明显下降(P<0.01);转染pCMV-sport6-RACK1后,H460和A549细胞中RACK1蛋白的表达量明显上调,细胞的增殖能力增强,倍增时间增加,集落生成数明显增多,S期细胞所占比例明显升高(P<0.01)。采用酵母双杂交法和免疫共沉淀法检测发现,RACK1与MCM7存在直接作用。RACK1进入细胞核内,与微小染色体维持蛋白7(minichromosome maintenance protein7,MCM7)特异性结合,促进MCM7蛋白磷酸化。结论:RACK1通过直接与MCM7结合促进MCM7蛋白磷酸化途径,继而促进肺癌细胞增殖。

喉癌Hep2细胞系APAF-1表达及对5-Aza-CdR诱导凋亡敏感性的研究

目的:探讨喉癌中APAF-1基因的表达及其对5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-az-a-2′-deoxycitydine,5-Aza-CdR)诱导的Hep2细胞系凋亡的影响。方法:不同浓度5-Aza-CdR(5×10-8、10-7、2×10-7和3×10-7mol/L)处理体外培养的Hep2细胞后,用流式细胞仪检测处理72h的细胞周期分布和细胞凋亡率变化;通过RT-PCR及免疫组织化学技术检测APAF-1基因在喉癌中的表达情况,并建立APAF-1瞬时过度表达系统,观察在APAF-1过度表达情况下,5-Aza-CdR对Hep2细胞凋亡的影响。结果:10-7mol/L5-Aza-CdR处理Hep2细胞72h后,凋亡率由对照组的1·07%增加到13·96%,且发生G1期细胞周期阻滞;喉鳞癌组织中APAF-1mRNA和蛋白表达都明显下调,分别为16/42、14/31,且未发现APAF-1表达与肿瘤的分化程度具有相关性,P=0·093;在10-7mol/L浓度5-Aza-CdR诱导下,APAF-1过度表达组Hep2细胞系凋亡率由空白对照组的12·46%及空载体转染组的14·74%增高到28·64%,且发生S期细胞周期阻滞。结论:过度表达APAF-1基因可以明显增加Hep2细胞系对去甲基化药物5-Aza-CdR诱导的凋亡敏感性。

整合素β3,p38MAPK及MMP-2在乳腺癌中存在功能性的联系

目的研究整合素β3与配体Tenascin-c(TN-c)在乳腺癌组织中的表达,探讨其是否通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)激活基质金属蛋白酶-2(MMP-2)。方法本研究应用免疫组化SP方法检测了80例乳腺浸润性导管癌中整合素β3及TN-c的表达,同时在培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞系中分别阻断整合素β3和p38MAPK,应用Western Blot的方法,检测p-p38和MMP-2的表达情况。结果整合素β3和TN-c在乳腺浸润性导管癌组织中高表达,整合素β3与TN-c的表达之间存在相关性,并与乳腺癌的TNM分期及淋巴结转移相关。应用整合素β3的抗体抑制表达后,可以降低乳腺癌细胞系MDA-MB-231中p-p38以及MMP-2的表达量;用p38的特异性抑制剂SB203580进行阻断,可以降低MMP-2的表达量。结论乳腺浸润性导管癌中存在整合素β3和TN-c的高表达且它们的表达存在相关性,抑制整合素β3可以通过p38MAPK信号分子,抑制MMP-2的表达。