水飞蓟宾抑制人乳头状甲状腺癌TPC-1细胞增殖及诱导凋亡作用的实验研究

目的:研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1增殖的抑制作用。方法:采用CCK-8法观察不同浓度水飞蓟宾对TPC-1细胞株增殖的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞周期分布及凋亡相关蛋白的表达变化。结果:CCK-8检测发现,水飞蓟宾呈时间-剂量依赖性地抑制TPC-1细胞株的增殖,诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,并伴有细胞周期调节蛋白CDK2和CDK6的表达水平降低和凋亡相关蛋白的升高。结论:水飞蓟宾具有抑制人乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1的增殖和诱导其凋亡的作用。

应用导入HSVtk基因的骨髓间充质干细胞治疗胶质瘤的实验研究

目的探讨导入单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVtk)自杀基因的骨髓间充质干细胞(BMSC)对胶质瘤细胞的抗肿瘤作用。方法将导入HSVtk自杀基因的BMSC细胞分别与多种脑胶质瘤细胞株(人类和大鼠)共同培养后,采用MTT法观察其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。体外侵袭性实验观察胶质瘤细胞培养上清对BMSCtk的趋化作用。结果我们发现在更昔洛韦的存在下,人类BMSCtk细胞对胶质瘤细胞具有很显著的体外抗肿瘤活性。与新鲜培养基比较,从人类和大鼠胶质瘤细胞获得的条件培养基都可以增强人BMSC向胶质瘤细胞的迁移活性。结论导入HSVtk基因的BMSC在"旁观者效应"的介导下能够产生很强的抗胶质瘤效应。

高碘摄入对SD大鼠钠/碘同向转运体蛋白表达影响的免疫组化研究

目的:动态观察长期高碘摄入对SD大鼠甲状腺细胞钠/碘同向转运体(NIS)蛋白表达的影响。方法:SD大鼠分别饲以去离子水及不同碘浓度的碘化钾水,给碘后1 d及1,2,4,8周处死。测定尿碘、组织碘含量,免疫组织化学方法观察甲状腺细胞NIS蛋白表达水平。结果:高碘摄入可引起甲状腺滤泡细胞膜表面NIS蛋白表达的下降。短期较低浓度的高碘摄入对NIS蛋白的表达无明显影响,而较高浓度的碘摄入则引起NIS蛋白表达的明显减少;长期高碘摄入对NIS蛋白表达的抑制作用,可在机体自我调节机制作用下得以部分恢复,但NIS蛋白表达仍处较低水平。结论:高碘摄入可导致甲状腺细胞表面NIS蛋白表达下降,随摄碘浓度的增加抑制作用增强;不同浓度的碘摄入对NIS蛋白表达的抑制作用表达时间不同。

联合应用全反式维甲酸与单纯疱疹病毒腺苷激酶基因对髓母细胞瘤的协同杀伤作用研究

目的评估全反式维甲酸(ATRA)联合单纯疱疹病毒腺苷激酶(HSV-tk)基因对髓母细胞瘤细胞系Daoy的杀伤作用。方法观察不同浓度ATRA对Daoy细胞生长的抑制作用;HSV-tk基因稳定转染人的髓母细胞瘤细胞系Daoy,获得Daoy-tk细胞;Daoy-tk细胞与Daoy细胞按不同比例混合,给予不同浓度的更昔洛韦(GCV)和一定浓度的ATRA,7d后应用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生存率。结果 ATRA在0.5～1μmol/L时即可对Daoy细胞生长产生抑制作用;Daoy-tk与Daoy细胞比例达到1:4时仍有明显的抗肿瘤作用,联合应用1μmol/L的ATRA后能显著提高HSV-tk基因对Daoy细胞的杀伤率。结论 ATRA与HSV-tk/GCV系统联合应用,能增强对人的髓母细胞瘤的杀伤作用。

关于对亚临床内分泌疾病命名的个人看法

戴为信医师： 读了您的来信，我谈谈个人的意见。首先，我认为亚临床内分泌疾病是临床检测手段发展更新的必然产物。检测方法的敏感性和特异性提高了，检查设备的分辨力增强了，必然带来我们对疾病的新认识。

靶向GPR48的shRNA抑制人宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移

背景与目的:GPR48受体偶联Gs蛋白介导细胞内信号转导通路,通过调节微管聚合状态和基质金属蛋白酶活性,影响肿瘤细胞的侵袭转移。本研究探讨靶向GPR48的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人宫颈癌细胞株HeLa体外侵袭能力及在体转移能力的影响。方法:以人GPR48mRNA编码区中两条不同序列作为RNA干扰靶点,构建靶向GPR48的shRNA真核表达质粒,同时构建不针对任何已知mRNA的阴性shRNA真核表达质粒,分别转染至HeLa细胞,新霉素抗性筛选稳定表达siRNA的转化克隆。采用RT-PCR和Western blot检测GPR48的表达变化。通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HeLa细胞体外侵袭能力的变化;分别将转染和未转染GPR48shRNA的HeLa细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况及肺部转移情况。结果:RNA干扰使HeLa细胞GPR48表达下调80%;与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组穿膜细胞数显著减少(28.3±1.5和17.6±1.5vs.94.4±15.7,P<0.01)。裸鼠在体肺转移实验中,与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组肺转移结节数显著减少(1.3±0.2和1.5±0.4vs.7.8±1.8,P<0.01)。结论:shRNA真核表达载体能明显抑制HeLa细胞的GPR48表达,有效抑制HeLa细胞的体外侵袭和在体转移。

RNAi沉默NFκBp65基因对肝癌细胞FAT10表达的影响

目的观察HepG2细胞中NFκB p65基因沉默对FAT10蛋白表达的影响。方法采用电穿孔法将p65 siRNA转染人肝癌细胞系HepG2细胞,采用Western blot检测各组细胞中p65和FAT10蛋白的表达变化,用染色体核型分析p65干扰对FAT10过表达而导致的非整倍体现象的阻断作用。结果 Western blot结果显示,p65 siRNA干扰可以有效抑制HepG2细胞中NFκB p65的表达,并且通过抑制p65可以有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达,进而通过有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达而阻断TNF-α诱导的非整倍体现象。结论 NFκB p65的表达下调可以抑制TNF-α诱导的FAT10高表达及非整倍体现象。

近10年鼻咽癌放射治疗对甲状腺功能影响的文献计量学分析

目的对鼻咽癌放射治疗对甲状腺功能影响的相关文献进行系统分析,以展示该领域的研究现状。方法检索PubMed数据库近10年发表的相关文献,对文献的发表数量、高频主题词等信息进行统计,并对统计出的高频主题词运用SPSS软件进行同篇聚类分析。结果共检出相关文献2 928篇,统计出高频主题词11个,聚类结果主要集中于5个方面。结论近10年该领域研究主要集中在鼻咽癌放射疗法、鼻咽癌并发症与甲状腺功能减退病因学、放射治疗的剂量和副作用、鼻咽癌放射治疗影响甲状腺功能效应、鼻咽癌病理学与继发癌症5个方面。

高侵袭性胶质瘤细胞转移相关miRNA的芯片分析

目的筛选与人胶质瘤侵袭及转移密切相关的miRNA的表达谱。方法用Transwell侵袭小室,从人胶质瘤T98G细胞中筛选出高侵袭性的癌细胞。通过这一体外筛选过程获得3个高侵袭性的细胞亚群,命名为T98G-4M-1、T98G-4M-2和T98G-4M-3。这些细胞亚群已被证明在软琼脂上有更强的集落形成能力,我们用miRNA芯片技术分析与转移相关的miRNA表达谱,并与对照组比较,以期了解这些细胞亚群间侵袭能力显著差别的原因。结果高侵袭性细胞亚群中有11个与转移相关的miRNA差异表达:其中let-7b、miR-200A、miR-222、miR-106和miR-193的表达上调;而mir-199B、mir-26A、mir-34、miR-29、mir-15A和mir-16的表达下调。结论这些差异表达的miRNA可能显著影响肿瘤转移及恶性转化。

RNAi沉默Stat1基因对胶质瘤细胞FAT10表达的影响

目的观察U251人胶质瘤细胞中Stat1基因沉默对FAT10蛋白表达的影响。方法采用电穿孔法将Stat1siRNA转染人胶质瘤细胞系U251细胞,采用Western印迹检测各组细胞中Stat1和FAT10蛋白的表达变化,用染色体核型分析Stat1干扰对FAT10过表达而导致的非整倍体现象的阻断作用。结果 Western印迹结果显示,Stat1 siRNA干扰可以有效抑制U251细胞中Stat1的表达,并且通过抑制Stat1可以有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达,进而通过有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达而阻断TNF-α诱导的非整倍体现象。结论 Stat1的表达下调可以抑制TNF-α诱导的FAT10高表达及非整倍体现象。

自发恶性转化的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达谱的芯片分析

目的:解析骨髓间充质干细胞(MSCs)作为组织工程种子细胞的自发恶性转化的分子遗传学基础,探讨其临床可用性和安全性。方法:密度梯度离心法和贴壁筛选法联合应用,分离大鼠MSCs,流式细胞仪分析细胞同源性,体外培养6个月后获得自发恶性转化的MSCs。Trizol总RNA抽提法获取足量的RNA,用于MSCs基因表达谱的分析。实时定量RT-PCR法对在自发恶性转化的MSCs中呈差异表达的基因进行扩增和检测,以验证基因芯片分析结果。结果:流式细胞仪检测表明了所分离MSCs的高度同源性。MSCs发生自发恶性转化后,有44条差异表达基因,其中21条基因表达上调,23条基因表达下调。经实时定量RT-PCR检测差异表达基因结果与基因芯片结果一致。结论:Wnt、SHH、Notch、TGFβ/BMPs等信号转导通路上的若干基因在MSCs自发恶性转化中起到重要作用。

FAT10过表达对HepG2肝癌细胞生长及凋亡的影响

目的:探讨FAT10过表达对人肝癌细胞株HepG2生长和凋亡的影响。方法:采用脂质体法将FAT10质粒导入HepG2细胞,建立FAT10过表达的肝癌细胞系。Western blot检测细胞中FAT10表达水平,CCK-8细胞计数试剂盒,Annexin V凋亡试剂盒检测FAT10过表达对HepG2细胞生长和凋亡的影响。人类基因表达谱芯片检测FAT10下游与细胞增殖和凋亡相关基因的差异表达。结果:Western blot结果显示FAT10过表达细胞FAT10蛋白水平明显高于对照组,CCK-8检测显示FAT10过表达细胞增殖速度高于空载体组和对照组,而抗喜树碱诱导凋亡的能力FAT10过表达组较空载体组和对照组强。芯片分析显示,FAT10下游与细胞增殖和凋亡相关的若干基因表达有显著差异。结论:FAT10过表达可以促进HepG2细胞增殖和抗凋亡能力。

TNF-α和IFN-γ诱导人乳头状甲状腺癌细胞FAT10过表达及染色体核型异常

目的:观察TNF-α和IFN-γ通过诱导人乳头状甲状腺癌TPC-1细胞中FAT10的表达而导致染色体核型异常。方法:采用电穿孔法将FAT10 siRNA转染人TPC-1细胞,采用Western blot检测各组细胞中FAT10蛋白的表达变化,用染色体核型分析TNF-α和IFN-γ诱导TPC-1细胞非整倍体现象。结果:Western blot结果显示,TPC-1细胞经TNF-α和IFN-γ诱导后,FAT10过表达。FAT10 siRNA干扰可以有效抑制TPC-1细胞中FAT10的表达,并且通过抑制FAT10表达,可以有效抑制TNF-α和IFN-γ诱导的非整倍体。进而发现FAT10表达具有拮抗TNF-α和IFN-γ诱导的TPC-1细胞凋亡的作用。结论:FAT10介导了TNF-α和IFN-γ诱导的TPC-1细胞的非整倍体现象,并具有拮抗凋亡的作用。

GPR48单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备GPR48的单克隆抗体,并且初步评估其在体外对子宫颈癌细胞侵袭转移的抑制作用。方法:纯化的GPR48特异性片段作为抗原,细胞融合法制备GPR48单克隆抗体,蛋白免疫印迹法检测单克隆抗体的特异性,用体外侵袭性实验检测该单抗抑制子宫颈癌细胞Hela侵袭转移的作用。结果:制备了效价高、特异性好的GPR48单克隆抗体。当加入10 nmol/L浓度的单克隆抗体时,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为280±18、73±11;而当加入单抗浓度为50 nmol/L时,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为267±30、14±3。结论:GPR48单克隆抗体在体外能够显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭转移。

GPR48单克隆抗体的制备及其在结直肠癌中的表达

目的:制备G蛋白偶联受体48(Gprotein coupled receptor 48,GPR48)单克隆抗体,并研究其在结直肠癌中的表达。方法:采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,Western印迹法和FCM检测单克隆抗体的特异性,免疫组织化学法检测GPR48在40例结直肠癌中的表达。结果:制备获得GPR48的特异性单克隆抗体;GPR48在正常结直肠黏膜组织中无表达;淋巴结转移者GPR48阳性率(85.7%)明显高于无淋巴结转移者(34.6%)(P<0.05);高分化者的GPR48表达阳性率(22.2%)明显低于中、低分化者的77.3%(P<0.05);GPR48的表达与患者的性别和肿瘤大小均无关。结论:GPR48抗体是1种特异性抗体,可将其作为一项新的预测肿瘤分化程度和淋巴结转移的指标。

评估妊娠早期甲状腺功能：中国妊娠妇女妊娠早期TSH参考上限的合理制定

目的 为中国妊娠妇女妊娠早期亚临床甲状腺功能减退症（亚临床甲减）的诊断建立合理的TSH参考范围.方法 筛查4 800名妊娠4～12周妇女及2 000名非妊娠妇女甲状腺功能,对其中535名妊娠妇女进行妊娠中期及妊娠晚期随访.结果 血清TSH浓度中位数从妊娠7周开始出现显著降低.妊娠4～6周TSH的中位数显著高于7～12周[2.15（0.56～5.31）mIU/L对1.47（0.10～4.34） mIU/lL,P＜0.01],但与非妊娠妇女相比无明显差异[2.07（0.69～ 5.64） mIU/L,P=0.784].FT4中位数在妊娠早期无明显改变.以TSH＞2.5 mIU/L作为亚临床甲减的诊断标准,4 800名妊娠妇女的亚临床甲减患病率为27.8％,若采用本实验室所得的TSH参考范围（0.14～4.87 mIU/L）,该患病率仅为4％.在妊娠早期血清TSH＞2.5 mIU/L的118名妇女中,妊娠20周、30周时分别只有30.0％、20.3％的妊娠妇女TSH水平高于3.0 mIU/L.结论 非妊娠妇女的TSH参考范围适用于妊娠4～6周妇女亚临床甲减的诊断.中国妊娠妇女妊娠早期的TSddH水平上限显著高于2.5 mIU/L.

慢性碘过量对具有自身免疫遗传倾向的NOD.H-2h4小鼠甲状腺功能和形态影响的实验研究

探讨慢性碘过量对具有自身免疫遗传背景的NOD.H-2h4小鼠甲状腺组织形态、超微结构和功能影响的剂量、时间效应关系.碘过量以剂量依赖和时间依赖的方式导致NOD,H-2h4小鼠甲状腺肿和甲状腺上皮细胞超微结构的损伤.

FAT10过表达促进人乳头状甲状腺癌细胞抗凋亡及集落形成能力的研究

目的探讨FAT10过表达对人乳头状甲状腺癌细胞抗凋亡及集落形成能力的影响。方法采用脂质体法将FAT10质粒导入TPC-1细胞,建立FAT10过表达的人乳头状甲状腺癌细胞,用Western blot检测细胞中的FAT10表达水平,用染色体核型分析FAT10过表达而导致的非整倍体现象,Annexin V凋亡试剂盒检测FAT10过表达对TPC-1抗凋亡能力的影响。通过集落形成实验观察其集落形成能力的变化。结果 Western blot结果显示FAT10过表达组细胞FAT10蛋白水平明显高于对照组,FAT10过表达组出现非整倍体形象,并且抗喜树碱诱导凋亡的能力和集落形成能力显著高于对照组。结论 FAT10过表达可以促进人乳头状甲状腺癌细胞抗凋亡及集落形成能力。