Akt和SRC在Exosomes促进同源肺癌细胞增殖中的作用

目的探索肺癌细胞分泌的Exosomes对其分泌细胞及其同源肿瘤细胞增殖的影响,以及PI3K/Akt和SRC信号通路在其中的作用。方法采用密度梯度离心法从肺癌A549细胞的上清液中提取Exosomes,透射电子显微镜法观察Exosomes的形态,Western blotting法检测Exosomes标志蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖能力。结果 A549细胞来源的Exosomes的直径在30~100 nm之间,由双层膜构成。Western blotting检测到Exosomes中CD9的表达,且A549细胞来源的Exosomes以剂量和时间依赖性的方式促进其自身及同源肿瘤细胞HCC827细胞的增殖,并伴随Akt和SRC的活化。结论肺癌A549细胞来源的Exosomes以时间和剂量依赖性促进其自身及同源肿瘤细胞的增殖,其机制可能与Akt和SRC的活化有关。

Akt和SRC在Exosomes促进同源肺癌细胞迁移中的作用

目的研究肺癌细胞来源的Exosomes对其分泌细胞及同源肿瘤细胞迁移的影响,初步探讨PI3K/Akt和SRC信号转导通路在此过程中的作用。方法采用密度梯度离心法,从肺癌细胞A549的上清液中分离出肺癌细胞来源的Exosomes,利用透射电子显微镜观察Exosomes的形态,用Western blotting实验观察蛋白的表达。Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果透射电子显微镜下观察肺癌A549细胞来源的Exosomes,其具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,直径30~100 nm。Western blotting结果显示Exosomes表面富含CD9分子。A549细胞来源的Exosomes以剂量依赖性的方式促进A549和其同源肿瘤细胞HCC827细胞的迁移,并伴随Akt和SRC的活化。结论肺癌细胞来源的Exosomes能促进其分泌细胞和同源肿瘤细胞的迁移,其机制可能与Akt和SRC的活化有关。

抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞外信号调节激酶影响的研究

目的:探讨抑制Src酪氨酸激酶活化对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞外信号调节激酶的影响及其作用。方法:采用NSCLC细胞株进行细胞培养,分别给予不同浓度的Src酪氨酸激酶抑制剂。蛋白质印迹检测NSCLC细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化以及抑制Src酪氨酸激酶活化对NSCLC细胞ERK1/2磷酸化的影响。MTT法检测抑制Src酪氨酸激酶活化对NSCLC细胞体外增殖的影响。软琼脂糖集落形成实验检测抑制Src酪氨酸激酶对NSCLC细胞克隆形成的影响。结果:选用的NSCLC细胞都存在ERK1/2磷酸化。抑制Src酪氨酸激酶对PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化呈现浓度依赖性抑制作用,亚微摩尔水平Src酪氨酸激酶抑制剂几乎完全抑制PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化。Src酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞体外增殖表现出明显的浓度依赖性抑制作用(F=5.072,P=0.004;F=4.368,P=0.008)。0.1、0.3和1.0μmol/L的Src酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞增殖的抑制率分别为14.7%、47.1%、61.3%和19.8%、24.2%、30.6%。而其余3种NSCLC细胞ERK1/2磷酸化以及体外增殖对Src酪氨酸激酶抑制剂反应不敏感。Src酪氨酸激酶抑制剂明显抑制PC-9和A549细胞的克隆形成(t=11.746,P<0.001;t=5.237,P<0.001)。结论:抑制Src酪氨酸激酶能够抑制PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化,从而抑制PC-9和A549细胞体外增殖。