盐酸多西环素ChP 2015标准检测的紧邻主成分后杂质的制备及鉴定

目的:制备盐酸多西环素中国药典2015年版(Ch P 2015)标准检测的紧邻主峰后杂质,并鉴定其结构。方法:以盐酸多西环素成盐用母液为对象,采用室温条件下半制备液相色谱分离纯化杂质;色谱条件:采用Synergi C_(18)(50 mm×250 mm,10μm)色谱柱,以0.1%三氟乙酸水溶液(A)-0.1%三氟乙酸乙腈溶液(B)为流动相,线性梯度洗脱(A-B):0.0 min(85∶15)→40.0 min(60∶40)→40.5 min(85∶15)?50.0 min(85∶15),流速为80 m L·min^(-1);254 nm检测收集目标组分,旋转蒸发去除有机溶剂,冷冻干燥制得目标杂质;采用盐酸多西环素Ch P 2015标准中有关物质检查的高效液相色谱法确证制得物质为目标杂质并采用归一化方法测定其纯度;采用光谱综合分析等手段确证其结构。结果:制得目标杂质纯度为98.7%,结构确证为2-乙酰-2-脱氨甲酰多西环素(即EP 8.0中的盐酸多西环素杂质F),在有关物质测定用供试品溶液中添加该杂质后,多西环素后相邻峰面积显著增加。结论:盐酸多西环素Ch P 2015标准检测的紧邻主峰后杂质经制备色谱分离并成功鉴定,该结论被Ch P 2015采用。

在线脱盐-高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱法鉴定盐酸多西环素有关物质结构

目的应用在线脱盐-高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(2D-LC-IT-TOF/MS)法鉴定盐酸多西环素片在药典条件下检出的有关物质结构,并推断盐酸多西环素在溶液状态下的降解途径。方法 LC 1 stD色谱条件:InertSustain^(TM)C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,醋酸盐缓冲液[0.25 mol·L^(-1)醋酸-0.1 mol·L^(-1)EDTA钠盐-三乙胺(100:10:1),用醋酸或氨水调节pH值至8.8]-乙腈(85:15)为流动相进行等度洗脱;LC 2ndD色谱条件:InertSustain^(TM)C_(18)(2.1 mm×50 mm,2μm)色谱柱,0.1%甲酸冰溶液为流动相A,0.1%甲酸福乙睛为流动相B,进行梯度洗脱;质谱条件:ESI正负离子同时检测,雾化气流速1.5L·min^(-1),干燥气流速10 L·min^(-1)脱溶剂管温度200℃。根据多级质谱信息来推定药典条件下检出的有关物质结构和强制降解溶液中产生的杂质结构。结果在盐酸多西环素片中共检出8个有关物质推定出其中4个含量大于0.1%的有关物质的结构,分别为4-表多西环素、美他环素、β-多西环素、2-乙酰-6-脱碳酰胺多西环素。盐酸多西环素溶液在碱性条件下易降解,生成脱酮基开环物;在高温条件下容易产生4-表多西环素,并伴有少量4-表-6-表多西环素的生成;在酸性条件和光照条件下相对稳定。结论建立的方法可用于盐酸多西环素中杂质的鉴定,为盐酸多西环素的质量控制与工艺优化研究提供可靠的分析手段。