huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白的复性及纯化研究

利用QSepharoseH .P .离子交换柱层析在 8mol L尿素变性条件下对huGM CSF(9 12 7) IL 6 (2 9 184)融合蛋白进行初步纯化 ,然后再利用SephacrylS 2 0 0分子筛柱层析复性及纯化后获得目的蛋白 ,其纯度达到 95 %以上。该纯化方案成功地解决了稀释复性或透析复性产物在进行QSepharoseH .P .离子交换柱层析时目的蛋白不稳定而沉积于柱上的问题 ,获得了较好的复性效果 ,复性率达到 80 %以上。使用该纯化方案 ,1天内便可基本完成重组蛋白的复性及纯化过程 。

巴斯德毕赤酵母研究进展

巴斯德毕赤酵母以其独特的生物学和遗传学特征成为当今一种诱人的外源基因表达系统,已成功地表达了各种类型的外源蛋白。本文综述了巴斯德毕赤酵母的一些特征及其作为外源基因表达系统,实现高表达的策略。

huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定

目的 构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0 IL 6 GM CSF(9- 12 7)表达质粒 ,将表达质粒导入E .coliDH5α中 ,诱导表达融合蛋白。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用MTT法测量其huIL 6和huGM CSF生物学活性。结果 pUC18 IL 6 GM CSF(9- 12 7)的序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在E .coliDH5α中得到高效表达 ,表达的融合蛋白占总蛋白含量的 30 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白 ,其纯度达到 96 %以上。融合蛋白具有huIL 6和huGM CSF的双重生物学活性 ,其促进huIL 6依赖细胞株B9和huGM CSF依赖细胞株TF 1增殖的比活性分别为 2 .86× 10 7U/mg和 3.33× 10 8U/mg。结论 获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)

分泌型乙型肝炎病毒包膜M蛋白在毕赤酵母中的表达

将乙肝病毒包膜中蛋白M基因插入酵母整合型表达质粒pAO818的醇氧化酶 (AOX1)启动子下游 ,构建携带 8拷贝M表达盒的重组载体 ,经电穿孔转化SMD116 8菌株和G4 18筛选 ,得到了高效分泌表达M蛋白的毕赤酵母菌株 ,表达量超过 5 0mg L .经初步纯化 ,对表达产物的性质鉴定表明 ,重组蛋白具有preS2和S抗原性 ,可以形成颗粒 ,并具有一定程度的糖基化 .所构建的稳定重组菌株和所得到的重组蛋白颗粒 ,为进一步研究新一代的疫苗提供了必要的材料 .