家族性高胆固醇血症样表型的临床特点及基因诊断

家族性高胆固醇血症对人类健康危害极大已经受到世界各国的重视,并开展大量研究,但该病在我国并未得到应有的重视。因此,正确认识FH患者的临床特点,及早将他们鉴别出来,深入研究这类人群的遗传背景,有助于了解其分子病理机制,对于As疾病的防治有重要意义。

基因敲除

基因敲除刘德培，方福德，梁植权（中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）目录一、基因敲除（ｇｅｎｅｋｎｏｃｋｏｕｔ）方法二、胚胎干细胞中同源重组的筛选（一）正负筛选法（二）标记基因的特异位点表达法...

神经生长因子家族及其受体研究进展

过去几年在神经营养因子、受体和神经元细胞程序性死亡的研究领域中取得了几项引人注目的进展：（１）神经生长因子（ＮＧＦ）基因家族的其他一些成员包括脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经营养素－３（ＮＴ－３）、神经营养素－４（ＮＴ－４）、神经营养素－５（ＮＴ－５）的发现；（２）神经生长因子三维结构及功能和进化之关系的阐明；（３）定性了两种神经生长因子受体ｐ７５（ＮＧＦＲ）和原癌基因ｐ１４０（ｔｒｋＡ）以及相关的ｔｒｋ家族的另外两个神经营养因子受体ｐ１４５（ｔｒｋＢ）及ｐ１４５（ｔｒｋＣ）。发现ＬＮＧＦＲ是相关细胞的致死基因；（４）确认ＮＧＦ等能用于神经退行性疾病的治疗。本文一并予以扼要介绍。

人分泌型白细胞介素2受体α链基因的克隆及其在真核细胞中的表达

删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染ＣＨＯ细胞，经Ｇ４１８筛出表达Ｎｅｏ基因的克隆２０株，通过ｍＲＮＡ狭缝杂交及ＥＬＩＳＡ检测，有５株能稳定表达分泌型α链ｍＲＮＡ及蛋白，其中４株细胞培养上清中的ＩＬ２Ｒα链的含量达１４００Ｕ／ｍｌ以上。

载脂蛋白E在神经系统中的作用

载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）在中枢神经系统（ＣＮＳ）生长发育，成熟衰老和损伤修复过程中发挥重要作用。其分子机制是：（１）稳定神经细胞骨架系统；（２）通过ａｐｏＥ受体途径调节神经细胞中胆固醇脂的运输和突触末梢的再生；（３）调控神经元之间及神经细胞与介质之间的相互作用；（４）调节神经细胞内Ｃａ２＋离子的平衡。

时空特异性基因打靶的应用及有关进展

时空特异性基因打靶以源于大肠杆菌噬菌体P1的Cre loxP系统为基础 ,可以在特定的发育阶段和特定的组织细胞中对几乎任何基因进行遗传修饰 。

拟老年痴呆大鼠脑中GFAP和NSE蛋白表达的改变

目的了解老年痴呆模型大鼠海马及嗅球中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的差异,从而了解嗅觉与老年痴呆的关系。方法成年SD大鼠,通过向大鼠侧脑室内注射Aβ建立模型后用免疫组化方法检测海马及嗅球中GFAP和NSE的表达,并对嗅球中两者蛋白水平表达的变化进行初步的检测。结果通过比较模型组与对照组海马及嗅球组织,模型组GFAP的表达显著增加,而NSE的表达则降低。结论老年痴呆大鼠模型组与对照组嗅觉系统内GFAP和NSE蛋白表达存在显著性差异。

Cre/loxP系统与时空特异性基因打靶

时空特异性基因打靶是指借助于噬菌体 P1的位点特异性重组酶 Cre和该酶的特定作用位点 lox P组成的 Cre/lox P系统的作用、利用控制 Cre表达的启动子的时空特异性 ,从而在特定的发育阶段和特定的组织细胞中对特定的基因进行遗传修饰的技术。

人热休克因子原核表达及表达产物的研究

利用ＤＮＡ重组技术构建了人ｈｓｐ反式作用因子ＨＳＦ１和ＨＳＦ２的原核表达质粒ｐＥＴ－１１Ｂ／ＨＳＦ１和ｐＥＴ－１１Ｂ／ＨＳＦ２。经ＩＰＴＧ诱导，二者在ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ菌株中得到有效表达。利用ｈｓｐ９０β第一内含子ＨＳＥ和合成ＨＳＥ作为探针，对比分析两种表达产物与其特异性顺式作用元件间的结合能力，结果显示，原核表达的ＨＳＦ具有ＨＳＥ结合活性，ＨＳＦ１对ＨＳＥ的亲和力及结合在ＨＳＥ上的分子数明显高于ＨＳＦ２，这种差异可能是两种ＨＳＦ具有不同转录活化功能的分子基础。

编码人精子膜蛋白BS-84的cDNA研究

在以前的工作中,证实人精子膜蛋白BS-84系不育患者血清中一种重要的抗精子抗体的靶抗原,实验初步表明它与受精作用有关。由于精子材料来源的困难,严重影响了对其结构与功能的深入研究。目前应用基因工程技术获取大量精子蛋白的途径已受到重视。本工作对编码BS-84的cDNA进行了克隆筛选与鉴定,限制性酶谱分析、核苷酸序列测定及结构分析、组织特异性检查和转录水平的基因表达研究。

正确识别深入研究提高血脂紊乱临床表型的检出率(二)

载脂蛋白Ｃ－Ⅱ缺乏症（ａｐｏＣ－Ⅱ缺乏症）ａｐｏＣ－Ⅱ缺乏症是一种罕见的长染色体隐性遗传性紊乱疾病，发病率约为百万分之一，由此而产生的乳糜微粒综合症相似于ＬＰＬ缺乏症引起的症状，其特征是胰腺炎，腹痛反复发作，１２ｈ空腹后其血清呈浑浊状，多发现于儿童和...

正确识别深入研究提高血脂紊乱临床表型的检出率(一)

高胆固醇血症和高甘油三酯血症已被我国广大医务工作者和研究人员有了较全面的认识，并能给予正确的临床处理，但从近年国内重要医学杂志上发表的文章看，很少有血脂紊乱新病例的报道。如：低α－脂蛋白血症、低β－脂蛋白血症、脂蛋白脂肪酶缺乏症、ＬＣＡＴ缺乏症、载脂...

CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究

研究了ＣＤ３ε和ＰＭＡ对细胞凋亡基因ｆａｓ的转录调控作用．根据已知的人ｆａｓ基因５＇上游序列设计引物，用ＰＣＲ法从人胸腺细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ｆａｓ５＇上游长为４４６ｂｐ的启动子片段．将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体ｐＸＰ２中．经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒ＤＮＡ的结构和序列正确．用此质粒（ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ）瞬时转染人ＪｕｒｋａｔＴ淋巴细胞，分析报告基因的表达水平．结果表明ｆａｓ基因上游－５０６到－６０的区域有弱启动子活性，约是阴性对照的１．５倍．抗ＣＤ３ε抗体和ＰＭＡ处理均可增强ｆａｓ启动子的活性，促进报告基因的表达，其虫荧光素酶活性分别是未经处理的ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ转染细胞的１．７倍和３．３倍，但二者没有协同作用．ＰＫＣ的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ＰＴＫ的抑制剂ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ可抑制ＰＭＡ诱导的ｆａｓ基因转录，使虫荧光素酶基因的表达降至未用ＰＭＡ处理的水平．但ＰＴＫ的另一种抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可与ＰＭＡ发挥协同作用，上调ｆａｓ基因的转录，使虫荧光素酶活性增加到５倍．这些结果为阐明ＣＤ３ε及ＰＭＡ介导Ｔ淋巴细胞激活和凋亡的分子机制?

蛋白激酶Cξ与葡萄糖吸收

2型糖尿病是一种慢发性疾病，发病率占10％左右。胰岛素抵抗表现为胰岛素刺激后骨骼肌葡萄糖吸收相对下降，是该疾病的一个苇要方面。尽管这方面研究很尽力，但是胰岛素抵抗的分子机制仍然没有弄清楚。胰岛素主要促进GLUT4从内膜系统转运到细胞膜来刺激肌肉组织吸收葡萄糖。虽然发现很多分子参与胰岛素信号通路，但是联系GLUT4转位与胰岛素刺激之间的精确步骤尚未完全阐明。

热休克蛋白90β参与热休克基因的表达调控

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一类进化上保守的蛋白质,它们以分子伴侣的形式在细胞内发挥其正常生理功能,并参与细胞应激保护和应答过程。人淋巴细胞中最主要的HSP是表观分子量70ku和90ku的HSP70和HSP90两组,其中HSP90又分为α和β两个拷贝。热休克蛋白基因(heat shock protein gene,hsp)的反式调节因子即热休克因子(heat shock factor,HSF)通过多聚化、磷酸化等活化过程参与HSP基因表达。与主要在应激诱导中大量表达的HSP70不同,HSP90是一类特异性分子伴侣,在生理条件下能与多种细胞内受体和信号传递途径中有关成分结合并调节它们的活性,因而其细胞内精密调节的机制具有重要的生理意义;但是,作为分子伴侣的HSP90是否参与其自身或对其他热休克基因的反馈调节迄今未见报道,本文对此进行了探讨。

人B细胞活化相关基因BC-1514全长cDNA的克隆与原核表达

目的 克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达。方法 采用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析 ,差异显示的片段经过Northern杂交验证后 ,作为探针进行人活化B细胞cDNA文库的筛选。将所获得的阳性克隆的编码区经PCR扩增后克隆到原核表达载体pGEX 5X 1中 ,重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌BL 2 1,以IPTG诱导表达融合蛋白。结果 以在活化B细胞高表达的EST32为探针 ,经 3轮筛选人活化B细胞文库获得一个新的全长为 15 14bp的cDNA克隆 (命名为BC 15 14)。重组的BC 15 14蛋白可在E .coli中以融合蛋白的形式有效表达 ,其表达量约占细菌总蛋白量的 14.3%左右。BC 15 14cDNA的GenBank的登录号为AF30 44 42。结论 获得了 1条新的与B细胞活化相关的cDNA克隆并在E .coliBL 2 1中得到了有效表达。

诱导性基因打靶的原理及有关应用

诱导性基因打靶是一种借助于 Cre/ lox P系统的作用、利用控制重组酶 Cre表达的启动子或 Cre酶活性的可诱导性、或重组酶 Cre定位表达的基因转移系统的宿主细胞特异性等特性 。

阿藿烯(Z-Ajoene)诱导肿瘤细胞凋亡

为了研究大蒜的药理作用 ,从大蒜中分离得到了含硫的简单有机化合物阿藿烯 (z_Ajoene) .在体外以不同浓度的阿藿烯处理 3种不同的肿瘤细胞 ,应用MTT法分析阿藿烯对肿瘤细胞生长的影响 ,采用光学显微镜、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳等技术分析肿瘤细胞形态、DNA含量和染色体DNA的断裂 ,使用West ern蛋白印迹法测定基因表达 .发现阿藿烯对HL_6 0 ,MGc_80 3和Molt_4等 3种肿瘤细胞均具有明显的致凋亡作用 ,其机制可能是通过抑制原癌基因bcl_2的表达而实现的 .

红系NFE2反式作用因子

NFE2是碱性亮氨酸拉链家族成员之一,由一个广泛表达的18kD亚基和一个组织限制表达的45kD亚基组成。NFE2是生血组织特异的反式作用因子。它通过α和β珠蛋白基因簇的位点控制区调节珠蛋白基因转录。而且对正常血小板的生成是必须的。