NIDDM患者红细胞膜Na^+-K^+-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性与全血粘度等关系的研究

Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶广泛存在于机体内多种细胞的细胞膜上,其中红细胞因其标本易于采集,准确性高,代表性强,可以作为研究其它多种组织细胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的生化代表,因而被广泛应用。近年来的研究发现,糖尿病患者红细胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性发生变化,且这一变化可能在其慢性并发症的形成中起一定作用。

肺血管内皮细胞在大鼠急性肺损伤发生中的作用

目的 :观察肺血管内皮细胞受损在大鼠急性肺损伤发病中的作用及地塞米松的影响。方法 :给Wistar大鼠静脉注射脂多糖 (LPS 5mg/kgBW)复制急性肺损伤模型。采用ELISA、放射免疫、原位杂交等多种方法测定肺组织ICAM - 1mRNA表达、iNOS活性、血中TNF -α、NO-2 /NO3-、ACE含量及肺血管通透性、肺泡灌洗液中细胞数、蛋白含量等的变化。结果 :注射LPS后 ,肺血管ICAM - 1mRNA表达增加 ,从 1h开始至 2 4h达高峰。肺组织匀浆iNOS活性升高、肺血管通透性升高、肺泡灌洗液中中性粒细胞数量增加 ,巨噬细胞数量减少、蛋白含量增加 ,血中TNF -α、NO2 -/NO3-含量升高而ACE含量下降等变化多在注LPS后 2h明显。预先给予地塞米松对上述多种指标的变化有明显缓解作用。结论 :提示LPS通过损伤肺血管内皮细胞导致急性肺损伤 。

尼古丁对中性粒细胞活化及细胞间粘附分子基因表达的影响

目的 :观察尼古丁对中性粒细胞 (PMNs)的活化 ,PMNs与内皮细胞的粘附及内皮细胞表达ICAM - 1mRNA ,有助于阐明尼古丁在慢性阻塞性肺疾患 (COPD)炎症发病中的作用。方法 :测定 β -葡萄糖醛酸苷酶及溶菌酶活性 ,以反映PMNs的活化 ;培养人脐静脉内皮细胞 ,观察PMNs与内皮细胞的粘附 ;制备探针 ,提取总RNA ,Northern杂交测细胞间粘附分子 - 1(ICAM - 1)mRNA。结果 :尼古丁可活化PMNs ,增加PMNs-内皮细胞粘附 ;增强ICAM - 1mRNA表达 ,76 4- 3可明显抑制尼古丁的上述作用。结论 :尼古丁通过活化PMNs,促进PMNs -内皮细胞粘附 ,在COPD慢性炎症发病中起重要作用。而这种粘附作用的增加与粘附分子表达增强有关 ;抑制尼古丁的上述作用可能是 76 4-

核转录因子NF-κB在血管内皮细胞组织因子表达中的作用

目的 探讨核转录因子NF-κB在肿瘤坏死因子α（TNF-α）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管内皮细胞组织因子（TF）表达中的作用。方法用发色底物法测定血管内皮细胞表面TF活性。分别采用凝胶电泳迁移率改变法(EMSA)和Western印迹法检测血管内皮细胞核转录因子NF-κB的DNA结合活性和含量。结果100 U/ml TNF-α、10-6 mol/l AngⅡ作用下，内皮细胞表面TF 活性明显增高，分别较对照增高1.65 倍和1.61 倍。TNF-α、AngⅡ作用组核抽提物与NF-κB特异DNA序列结合活性分别为正常对照组的2.07倍和3.89倍。TNF-α、AngⅡ处理后细胞核内NF-κB含量明显增加，分别为正常对照组的1.77倍和1.52倍。结论TNF-α、AngⅡ可增强内皮细胞TF活性，这可能与其促进内皮细胞核转录因子NF-κB的核转位和DNA结合活性有关，进一步证实NF-κB在内皮细胞TF诱导表达中的重要作用。

TNF-α或mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI-1的影响及其机制

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)或弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)PAI-1活性和mRNA表达的影响及其分子机制。方法用发色底物法测定HUVECs培养液中PAI-1的活性。用Northern印迹分析法检测PAI-1基因mRNA的表达情况,并分别用蛋白激酶C穴PKC雪或促分裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)抑制剂干预上述诱导实验。结果TNF-α或mmLDL作用HUVEC后,PAI-1活性和mRNA基因表达均明显增加。促分裂原活化蛋白激酶-激酶穴MAPKK雪的抑制剂PD98059(60μmol/L)能明显阻断TNF-α穴100U/ml雪或mmLDL穴50μg/ml雪对PAI-1活性和mRNA的诱导,但PKC的抑制剂Staurosporine(10nmol/L)和H7(15μmol/L)无显著阻断作用。结论(1)TNF-α或mmLDL能增强血管内皮细胞PAI-1活性与mRNA表达;穴2雪PAI-1活性提高与其mRNA表达增加有关;(3)MAPK途径可能在TNF-α或mmLDL诱导血管内皮细胞PAI-1表达中起重要作用。

中药814对地鼠实验性肺气肿的保护作用

目的 :进一步探讨慢性阻塞性肺疾病 (COPD)的发病机理 ,寻找防治用药。方法 :给地鼠气道内 1次滴注猪胰弹性蛋白酶复制肺气肿动物模型 ,以及附加烟雾吸入。分别用中药 814灌胃治疗 1个月及 3个月。观察肺组织形态 ,肺动脉压 (PAP) ,血清 a1-抗胰蛋白酶 (a1- AT) ,丙二醛 (MDA) ,β-葡萄糖醛酸酶(β- g) ,肺组织前列腺素类 (PGs)的变化。结果 :1个月时形成中度肺气肿 ,PAP、β- g、MDA、PGE2 、及TXB2 / 6- keto- PGF1a均显著升高 (P<0 .0 5或 <0 .0 1)。而 3个月时 a1- AT下降 (P<0 .0 5)。至 3个月时或附加烟雾吸入组 ,上述指标多无进一步的显著变化。中药 814对肺组织形态学改变 ,PAP,β- g,MDA及 TXB2 / 6- keto- PGF1a的升高以及 a1- AT的下降有一定的缓解作用。结论 :抗蛋白酶与蛋白酶之间的失衡是 COPD发病学的关键因素 ,中药

17-β-雌二醇影响人脐静脉内皮细胞的纤溶因子活性及其基因表达

目的观察１７－β－雌二醇对人脐静脉内皮细胞纤溶因子活性、基因表达以及胞内钙离子渡度（［Ｃａ（２＋）］i）的影响。方法应用发色底物法、细胞原位杂交技术和激光共聚焦扫描显微镜。结果组织型纤溶酶原激活物活性及其基因表达随１７－β－雌二醇浓度的增加而呈剂量依赖性增加；单个内皮细胞胞内钙离子浓度在高浓度雌二醇作用下先上升后下降，生理浓度时降低。结论雌激素可以提高纤溶能力、拮抗胞内Ｃａ(２＋)浓度升高，为雌激素保护心血管作用机制研究提供了部分实验依据。

尼古丁对脐静脉内皮细胞蛋白激酶C和Ras蛋白活性及胞浆钙浓度的影响

为研究尼古丁对血管内皮细胞胞内游离钙、蛋白激酶C(PKC)和Ras蛋白的作用 ,用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度的变化 ,用γ 32 P ATP掺入法检测PKC活性 ,用GST RBD沉淀并纯化活化的Ras蛋白和Western印迹杂交法检测Ras蛋白含量。观察到 (1～ 5 ) 10 - 4 mol L尼古丁使人脐静脉内皮细胞 [Ca2 + ]i 迅速增加 ,峰值约超过基础值 5 0 %～ 2 0 0 % ,钙通道阻滞剂尼莫地平可拮抗尼古丁的此种效应 ;10 - 4 mol L尼古丁作用 1～ 12h后胞浆PKC活性明显降低 ;而胞膜PKC活性则升高。 10 - 4 ～ 10 - 3 mol L尼古丁作用于人脐静脉内皮细胞 10～ 30min可使活化的Ras蛋白含量增加。以上结果提示尼古丁可使人脐静脉内皮细胞 [Ca2 + ]i

烟雾吸入对地鼠弹性蛋白酶性肺气肿的影响

为了进一步探讨慢性阻塞性肺疾患 (COPD)的发病机制 ,复制地鼠胰弹性蛋白酶性肺气肿动物模型及附加烟雾吸入。观察 1个月及 3个月时肺组织形态 ,肺动脉压 (PAP) ,血清丙二醛 (MDA)含量 ;血清血管紧张素转换酶 (ACE)活性及肺组织中前列腺素类 (PGE2 、TXB2 、6 keto PGF1α)物质含量的变化。结果发现单纯肺气肿组动物 1个月 ,已经形成中度肺气肿 ,PAP、MDA、PGE2 、TXB2 均有显著增加 (均P <0 0 1 )。而ACE、6 keto PGF1α显著降低 (分别P <0 0 1和P <0 0 5)。TXB2 / 6 keto PGF1α比值有显著增加 (P <0 0 1 )。肺气肿 3个月组较 1个月 ,除MDA、6 keto PGF1α及TXB2 / 6 keto PGF1α有进一步变化外 (P <0 0 5、P <0 0 1 ) ,其它指标无进一步变化。附加烟雾吸入较单纯肺气肿组 ,仅 1个月时MDA、3个月时 6 keto PGF1α及 1个月时TXB2 / 6 keto PGF1α有进一步变化 (P <0 0 5) ,而ACE的下降反而回升 (P <0 0 5、P <0 0 1 )外 ,其它指标无明显改变。提示 :气道内滴注胰弹性蛋白酶致使弹性蛋白酶与抗弹性蛋白酶之间失平衡是导致COPD的关键发病学环节。

顺式调控元件NF-κB在尼古丁诱导ICAM-1表达中的作用

目的 :研究 5’上游序列在尼古丁诱导细胞间粘附分子 - 1 (ICAM - 1 )基因转录调控中的作用。方法 :首先采用分子克隆技术构建实验所需的DNA片段 ,然后采用真核细胞转染技术将重组DNA片段与内参照质粒一起转染体外培养的内皮细胞并检测尼古丁刺激的转染细胞荧光素酶的相对活性。结果 :成功构建了 6种含有不同长度ICAM - 1基因启动子序列以及启动子中NF -κB和Sp - 1位点突变序列的荧光素酶报告基因质粒。与对照组相比尼古丁可促进含有启动子序列 - 579bp(pGL3E - 579/ +36) (P <0 .0 5) ,- 2 30bp (pGL3E - 2 30 / +36) (P<0 .0 5)以及启动子Sp- 1位点突变体 (pGL3E -Sp - 1 -MU) (P <0 .0 5)的荧光素酶基因表达 ,而下游NF -κB位点的删切重组体 (pGL3E - 1 34/ +36)和含有NF -κB位点突变体 (pGL3E -NF -κB -MU)的重组荧光素酶报告基因质粒在尼古丁诱导下与对照组相比荧光素酶表达量无明显差异。结论 :ICAM - 1基因启动子顺式作用元件下游NF -κB位点在尼古丁诱导ICAM -