人白细胞介素-6基因的克隆表达和纯化的研究

目的：研究人ＩＬ６基因在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的纯化。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆了人ＩＬ６ｃＤＮＡ，用ｐＢＶ２２０载体对ＩＬ６基因进行了表达调控研究，用阴离子交换柱和凝胶柱对表达产物进行纯化，用ＭＴＴ法测定ｒｈＩＬ６的活性。结果：表达调控研究发现，当ＳＤ序列到ＡＴＧ之间的距离为６ｂｐ和１０ｂｐ时在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶上未见明显表达，而当距离为５ｂｐ、７ｂｐ、８ｂｐ、９ｂｐ时均可获高效表达，最高表达量占菌体总蛋白的２６％。表达产物经变性复性及纯化后产品纯度达９８％，比活性为１１×１０８Ｕ／ｍｇ。

巢式RT-PCR扩增CK20、MMP-7诊断大肠癌淋巴结微转移的初步研究

目的建立巢式逆转录聚合酶链式反应(nestedreversetranscriptase-polymerasechainreac-tion,nestedRT-PCR)扩增CK20mRNA、MMP-7mRNA,检测大肠癌淋巴结微转移。方法据CK20、MMP-7基因序列设计四对引物,建立巢式RT-PCR扩增体系,检测CK20mRNA、MMP-7mRNA在30例行根治性手术大肠癌患者187个淋巴结中及10例良性肠道疾病患者25个淋巴结中的表达,并与传统组织学检查相比较。结果大肠癌患者187个淋巴结中75个CK20mRNA表达,阳性率40.11%(75/187),97个MMP-7mRNA表达,阳性率51.87%(97/187),61个CK20mRNA及MMP-7mRNA表达,阳性率32.62%,病理组织学检查仅57个淋巴结有肿瘤转移;10例良性肠道疾病25个淋巴结扩增结果阴性。结论巢式逆转录聚合酶链式反应检测淋巴结CK20mRNA、MMP-7mRNA的表达是诊断大肠癌微细胞转移灵敏特异的指标,其结果较常规病理组织学检查敏感,可对精确大肠癌的临床分期、判断患者预后及治疗提供一定理论依据。

Toll样受体研究进展

Toll-like receptors(TLRs)是存在于机体的一类重要的模式识别受体,在机体天然免疫中起着重要的作用。TLRs还是连接天然免疫和适应性免疫的桥梁。目前TLR1-9研究的较清楚和详尽。不同TLRs识别的病原体相关分子模式各不相同。TLRs介导的机体信号传导途径分为MyD88依赖性和非MyD88依赖性。多种生物TLRs已被克隆和表达,通过进化分析,脊椎动物的TLRs可被分为6大基因家族,识别相似PAMP的TLRs聚为一簇。TLRs编码序列和功能是高度保守的。

枸杞多糖作为甲型肝炎疫苗佐剂免疫效果的实验研究

目的:探讨枸杞多糖(LBPS)作为甲型肝炎(HAV)疫苗佐剂的效果。方法:设HAV含铝佐剂疫苗阳性对照组、HAV不含任何佐剂的抗原阴性对照组、生理盐水空白对照组、LBPS(20mg、10mg、5mg)3个剂量分别与HAV含铝佐剂疫苗联合、分别与HAV不含任何佐剂的抗原联合成6个实验组免疫小鼠,于免疫后4周、8周、12周、16周、20周尾静脉采血,ELISA法检测小鼠血清抗-HAVIg水平。结果:LBPS10mg剂量作为HAV疫苗佐剂免疫效果最佳,与阳性、阴性对照组比较差异均有显著性意义。结论:LBPS与铝佐剂有相似的疫苗佐剂效果,且与铝佐剂合用有佐剂协同作用。

狂犬病毒疫苗新研究

狂犬病是由狂犬病毒引起的世界性人兽共患疾病 ,几乎遍及世界各个国家和地区。它的传播途径主要为咬伤 ,一旦临床症状出现 ,病人则无可挽救地死亡 ,自然条件免疫群永远不会建立。目前尚无有效的治疗方法 ,其控制主要依赖于疫苗的接种即是一种建立免疫群的方法。随着分子生物学研究的飞速发展 ,狂犬病毒分子生物学方面亦取得了显著进展。这对于研究狂犬病毒的基因工程疫苗具有重要指导意义。

巢式RT-PCR扩增CK20诊断大肠癌淋巴结微转移的初步研究

目的:建立巢式逆转录聚合酶链反应( reverse transcriptase polymer ase chain reaction,RT PCR)扩增CK20mRNA,检测大肠癌淋巴结微转移。方法:据CK20 基因序列分别设计2 对引物,建立巢式RT- PCR 扩增体系,检测CK20 mRNA在30 例行根治性手术大肠癌患者187个淋巴结及10 例良性肠道疾病患者25 个淋巴结中的表达情况,将检测结果与传统组织学检查相比较。结果:大肠癌患者30 例187 个淋巴结有25例97个检测到CK20 mRNA表达,阳性率51 .87%(97/187),病理学检查仅发现18 例57 个淋巴结存在肿瘤转移;10例良性肠道疾病25 个淋巴结扩增结果为阴性。结论:巢式RT- PCR检测淋巴结CK20 mRNA的表达是诊断大肠癌微细胞转移灵敏特异的指标,可对精确大肠癌临床分期、判断患者预后及制定治疗方案提供一定的理论依据。

膀胱癌H—ras基因突变和P21蛋白表达的研究

目的 了解膀胱癌中H—ras基因突变和P21蛋白表达情况。方法 应用PCR—SSCP银染和免疫组化方法对31例膀胱癌组织分别进行检测。结果 发现H—ras基因突变发生率为38.7％,P21蛋白阳性率为71.0％。结论 二者存在一定的关联,并与临床分期、病理分级有密切联系。H—ras基因突变和P21蛋白表达可望作为膀胱癌诊断和判断预后有价值的指标。

HSVI立即早期基因研究进展

相对于其它病毒而言 ,单纯疱疹病毒的基因组巨人 ,基因数日繁多 ,根据其基因转录的先后顺序 ,分为立即早期、早期利晚期基因二类。作为病毒首先表达的立即早期基因 ,它们的表达产物都为非结构蛋白 ,可对病毒的复制进行调控 ,决定了病毒进入细胞后的命运。因此对单纯疱疹病毒的立即早期基因的定位、命名。

云南省白族和汉族冠心病患者载脂蛋白E基因多态性研究

目的探讨云南省确诊的白族和汉族冠心病(CHD)病人载脂蛋白E(ApoE)基因多态性的民族差异。方法选择云南省确诊的冠心病病人。白族21例和汉族77例(其中80病人通过冠脉造影证实,18例病人有明确的心梗病史)。采用生物化学方法测定其血清血脂。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法,以Hhal内切酶及聚丙烯酰胺凝胶电泳确定ApoE基因多态性。结果在白族CHD组和汉族CHD组均以ε3等位基因以及E3/3基因型最常见,两组之间E2/3、E3/3、E3/4基因型的分布未见统计学差异；白族组和汉族组中ε2、ε3、ε4等位基因频率比较无统计学差异(P＜0．05)；两组中含ε4等位基因携带者总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇和(LDL-C)显著高于其他基因型组,(P＜0．01)。结论在云南省白族和汉族人群之间ApoE基因型分布没有明显差异,白族和汉族人群中ε4等位基因是影响血清TC、LDL-C水平的重要遗传因素之一。

白介素系列受体研究现状

白介素受体（ＩＬｓ－Ｒ）在介导ＩＬｓ的多种生物学功能中起着重要的作用。随着ＩＬｓ－Ｒ各组分ｃＤＮＡ的克隆，对其结构及功能的认识更加深入。

载脂蛋白E基因多态性与冠状动脉硬化性心脏病关系的研究进展

载脂蛋白E(apoE)在血脂代谢的过程中发挥着重要的作用,由于碱基突变而产生的基因多态性使其不同基因型对冠状动脉硬化性心脏病(CAD)的发病产生不同的影响:apoE4可望成为CAD发病的一个遗传标志,apoE2则具有保护作用。检测apoE基因多态性对发现CAD的易感人群及开展一级预防具有重要意义,但其是否是独立于血脂途径实现对CAD发病的影响还在进一步的研究中。

指数富集配基的系统进化原理及应用进展

过去十几年 ,指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术得到了充分的发展 ,目前已经成为在数量众多的靶分子中 ,高亲和性和特异性地确定适配子的一种崭新的方法 .SELEX的流程即是人工合成随机寡核苷酸序列、适配子筛选、扩增、再循环的过程 .在这一过程中 ,适配子修饰基团文库的应用使得SELEX流程更加经济、快捷、高通量 .回顾了SELEX的研究和应用 ,期待着这一方法能够在理论和实践上得到进一步的发展 .

观察佛波脂和二甲基亚砜联合诱导人肺腺癌GLC分化过程中的形态和超微结构

目的 探讨佛波脂 (TPA)和二甲基亚砜 (DMSO)联合诱导分化剂对人肺腺癌GLC细胞形态的影响。 方法 采用细胞计数 ,光镜、扫描电镜与透射电镜观察 ,经过TPA和DMSO联合诱导的人肺腺癌GLC细胞增殖以及形态和超微结构的变化。 结果 经过联合诱导分化剂作用后 ,细胞增殖受到抑制 ,细胞体积增大 ,呈现扁平铺展状态 ,细胞核质比例变小 ,核仁数量减少。细胞表面微绒毛减少 ,细胞边缘丝状伪足减少 ,片状伪足增多 ,核形态较规则 ,核内异染色质减少 ,常染色质增多 ,细胞质中的细胞器数量增多 ,结构趋于正常。

一种治疗恒河猴婴猴菌痢的新方法

目的以药物保留灌肠的综合治疗措施,观察药物对恒河猴婴猴菌痢的疗效,探索治疗猴菌痢的新方法。方法在2002年10月至2004年10月期间,我们采取复方新诺明、黄连素、地噻米松保留灌肠为主的综合治疗方案,对我所饲养的部分发病婴猴进行治疗观察。采用甲酚皂、优氯净等消毒液对环境、笼舍消毒防止疾病的蔓延。结果采用保留灌肠法治疗的病猴56只,显效者38只,占67.86%;有效者13只,占23.21%;无效5只,占8.93%;死亡3只,占5.36%。结论结合药物的性质改变给药途径可以增强其疗效,降低副作用,提高病猴的治愈率。

实验恒河猴猴群暴发细菌性痢疾的治疗及控制

目的 诊断、治疗及控制我所实验恒河猴猴群暴发的细菌性痢疾。方法 采集病猴直肠粪便进行实验室细菌培养、生化反应、血清型鉴定、药敏试验对病原菌进行鉴定 ,寻找有效的治疗药物。采用甲酚皂、优氯净等消毒液对环境、笼舍消毒的方法预防疾病的传播 ,及时隔离病猴、防止交叉感染和疾病的蔓延。结果 猴群发病数为 42 6只 ,隔离重病猴 16 0只。鉴定病原菌为福氏志贺菌 2A型。病情轻者 ,采用口服诺氟沙星、黄莲素等药物 ,病情重者静脉滴注头孢哌酮等 ,取得显著治疗效果 ,治愈率为 97 9%。结论 细菌性痢疾病原菌的鉴定 ,正确的诊断 ,科学的用药方案是提高疗效的关键。与国内其它猴场相比较 ,治愈率提高 2 0 %以上。

牛血清在疫苗生产中的质量控制

大多数疫苗产生是以细胞培养为基础,细胞培养是众多生物技术产品的基本条件之一,对作为培养所使用原辅材料——牛血清进行全面质量控制。根据2000年版《中国生物制品主要原辅材料质控标准》[1]进行质控,通过对近年来72批牛血清的检测,结果显示,影响牛血清质量的主要原因是大肠杆菌噬体污染及细菌内毒素的超标。

冠心病患者载脂蛋白E基因多态性的临床意义

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性对冠心病发病的意义。方法选择98例冠心病患者(CHD组)及87例非冠心病患者(均通过冠脉造影证实)。采用生物化学方法测定其血清血脂,应用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性分析(RFLP)法,以Hhal内切酶及聚丙烯酰胺凝胶电泳确定ApoE基因多态性。结果冠心病组ApoE4/3基因型及ε4等位基因频率都比对照组高,差异有显著性(P<0.05);冠心病组高脂血症例数要高于对照组(P<0.05);两组中含ε4等位基因者TC、LDL水平较E3型者高(P<0.05),差别有显著性。结论E4等位基因是影响血清TC、LDL-C水平的重要遗传因素之一,并进一步导致冠状动脉粥样硬化及冠心病的发生,是CHD发病的重要危险因素。

脊髓灰质炎病毒缺陷型载体瞬时表达系统Ⅰ的构建

为探索可表达较大片段外源基因的脊灰病毒重组载体，以ＨＢＶＳ基因置换脊灰病毒的Ｐ１基因，同时以另一途径提供脊灰病毒Ｐ１结构蛋白，经转染入Ｈｅｌａ细胞中形成缺陷型重组病毒颗粒，此病毒可以感染新的细胞，并表达其重组的外源基因，但不产生子代病毒。实验结果表明，这种瞬时表达系统的构建，为脊灰病毒缺陷型重组载体用于基因转导技术打下基础。