基于我国动物性食品中禁限用兽药使用规定的食源性兴奋剂种类浅析

本文通过对GB 31650—2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》允许使用的兽药、农业农村部第250号等系列公告禁用兽药以及世界反兴奋剂机构(World Anti-Doping Agency,WADA)《WADA禁用清单国际标准(2021年)》中11个大类315种禁用物质和监控程序涉及的物质进行对比分析,运用Python的第三方函数库对比算法,发现《WADA禁用清单国际标准(2021年)》中蛋白同化制剂、β2-激动剂、糖皮质激素类、刺激剂、利尿剂和掩蔽剂以及肽类激素6个大类的33种物质与我国动物性食品兽药使用规定相应种类重合。同时对大型赛事防控食源性兴奋剂种类进行分析比较,发现有蛋白同化制剂、β2-激动剂、β-阻断剂、利尿剂和掩蔽剂、刺激剂、糖皮质激素类6个大类39种药物与WADA禁用药物相同;有蛋白同化制剂、β2-激动剂、利尿剂和掩蔽剂、刺激剂、糖皮质激素类5个大类25种药物与农业农村部禁限用兽药种类相同;与WADA禁用药物和农业农村部禁限用兽药种类均相同的有蛋白同化制剂、β2-激动剂、利尿剂和掩蔽剂、刺激剂、糖皮质激素类5个大类19种兴奋剂。以上分析结果为进一步明确食源性兴奋剂种类及范围提供工作思路,为加强重大体育赛事动物性食品中食源性兴奋剂的防控工作提供参考。

干血点采样设备及方法在兴奋剂检查中的应用

目的:通过对运动员指尖或上臂开展干血点(driedbloodspot,DBS)器材测试,比较不同采血设备和采血针头搭配效果,探讨符合世界反兴奋剂机构(WADA)样本采集要求的DBS采样方式,为DBS技术在兴奋剂检查领域的推广应用做准备。方法:选取12名检查官对60名覆盖奥运会和冬奥会大部分兴奋剂高危项目的运动员进行不同组合方式的DBS采样,选取Tasso、Hemaxis、HemaSpot、Capitainer及金豪5种采血设备,搭配施莱低血量(SL)、施莱中血量(SM)、施莱高血量(SH)、BD低血量(BDL)、BD中血量(BDM)、BD高血量(BDH)6种采血针头,对运动员在采集过程中对兴奋剂检查方式偏好、采样痛感、出血情况、采血时间、失败情况等数据进行统计分析。结果:1)相比传统兴奋剂尿检、血检检查,运动员更倾向于DBS采样方式(P<0.01);2)BDL针头采血合格率最低,与其他5种型号针头相比均具有显著性差异(P<0.01),BDL针头采血量无法满足WADA定量采血要求;手臂血采集合格率低于指尖血合格率,BDM、BDH采血针采血合格率高于施莱3种采血针,但不存在差异(P>0.05);3)手臂血采血时间显著高于指尖血采血时间(P<0.01),各指尖采血方式用时无差异;4)满足采血量要求的情况下,BDH针头按摩手指次数明显少于其他型号针头(P<0.01),BDM针头按摩次数少于SM针头(P<0.01)和BDL针头(P<0.05);5)采血失败原因集中在血量不足和血液凝固,Capitainer采血设备搭配各针头使用失败率最高,HemaXis和HemaSpot采血设备搭配各针头失败率较低。结论:1)DBS技术采集血样时,建议使用用时更短、合格率更高的指尖血采集形式;2)采血针推荐使用BDM和BDH型号。3)结合采血器材、运动员偏好、疼痛感、采血合格率、采血时间等角度综合考虑,不推荐Capitainer采血器材,HemaXis采血器材推荐搭配BDM或BDH采血针使用,HemaSpot采血器材可搭配SL、SM、SH、BDM、BDH采血针使用。

兴奋剂检测中吗啡和可待因的LC-MS/MS定量方法研究

目的：建立WADA禁用清单中阈值物质吗啡及相关物质可待因的HPLC-MS/MS定量方法并进行方法验证。方法：尿样加内标后,加入磷酸盐缓冲液（0.1 mol/L Na2HPO4和0.1 mol/L Na H2PO4水溶液p H=6.8）及β-Glucuranidase水解过夜,加入固体缓冲剂（Na HCO3/K2CO3=3/2,w/w,p H=9.5）和提取液（乙醚/异丙醇=9/1,v/v）萃取,有机相于氮气流下吹干,用初始流动相定容后进样于LC/MS/MS。使用耐受高p H值的Waters XBridgeTMC18色谱柱,以乙腈/氨水（p H≈10）作为流动相体系,使用乙腈的起始浓度为2%,最终浓度为98%,运行时间为10min的梯度洗脱条件,采用多反应离子监测正离子模式,以286→201（morphine）,300→171（codeine）,289→165（morphine-D3）为定量离子。结果 ：吗啡和可待因在尿中的定量限分别为0.05μg/m L和0.005μg/m L,线性范围分别为（r^2〉0.99）0.10-10μg/m L和0.05-10μg/m L,吗啡定量的日内精密度和日间精密度（CV）分别为2.64%和4.01%,可待因为2.22%和2.01%。吗啡和可待因在1.0μg/m L浓度时的方法回收率分别为98.47±2.73%和99.41±4.12%。定量检测误差均低于5%。结论：本方法使用一个步骤同时测定尿中禁用物质morphine的总量,并可同时定量检测尿样中的codeine,数据处理简单;简化了前处理操作步骤,定量结果的精密度得到了提高;采用Bridge ^TM C18色谱柱和高p H值流动相,改善了morphine在普通C18柱上不保留、仪器响应和保留时间重现性较差、峰形拖尾较为严重的问题。方法重现性好,测量结果准确可靠,满足WADA技术文件的要求,应用于本实验室常规检测和WADA的外部质量评估计划,效果良好。

液相色谱-质谱联用在兴奋剂检测中的应用及进展

液相色谱-质谱联用技术已越来越广泛地应用在兴奋剂的检测中,其中包括对各类小分子兴奋剂和肽类激素等的检测。本文综述了近年来液相色谱-质谱联用在兴奋剂检测中的筛选、确证和定量方面的应用及进展情况,并讨论了相关的检测标准。

液相色谱单四极杆质谱联用仪在2008年北京奥运会兴奋剂检测中的应用

2008北京奥运会兴奋剂检测采用了液相色谱单四极杆质谱联用仪对几千份尿样进行利尿剂、掩蔽剂以及其它禁用物质的检测。检测结果准确可靠,检测到有运动员使用利尿剂,并检出世界反兴奋剂机构(WADA)在兴奋剂检查样品中加入的两个控制样品,未出现漏检事故。检测灵敏度比较高,满足WADA的最低检出能力(MRPL)的要求。仪器工作状态稳定,操作简单,自动化程度高。在数据分析软件中使用编写的MACRO指令,检测数据容易识别和判断。使用这种仪器分析手段检测利尿剂和其它掩蔽剂,是常规和大型运动会兴奋剂检测的良好方法。

国际体育仲裁院反兴奋剂处仲裁规则

"孙杨案件"体育仲裁院上诉处仲裁庭的二审裁决与国际泳联内部反兴奋剂听证机构的一审裁决迥异,使外界对体育组织内部反兴奋剂听证机制的中立性和公正性怀疑加剧。与国际泳联的实践不同,在2016年里约奥运会和2018年平昌冬奥会上,国际奥委会将本由其纪律处罚委员会拥有的兴奋剂案件听证权力完全剥离,委托给了独立的第三方——国际体育仲裁理事会,后者设立了国际体育仲裁院奥运会反兴奋剂处,临时负责奥运会期间的兴奋剂案件的一审听证程序。基于奥运会和冬奥会上的成功尝试,2019年1月1日起国际体育仲裁理事会设立了体育仲裁院新的常设机构——反兴奋剂处,专门负责兴奋剂案件的一审听证程序,或者一审听证与二审仲裁合并审理的程序。目前除国际奥委会之外,另有近10个国际单项体育联合会接受了国际体育仲裁院反兴奋剂处的强制排他性管辖权,由后者负责兴奋剂案件的听证以及作出处罚决定。这一新机制让体育组织与兴奋剂案件听证处罚主体相对分离,对保障运动员权利意义重大,将促进世界反兴奋剂工作的中立性、公正性、统一性。可以预见,在国际奥委会、世界反兴奋剂机构的推动下,在各国运动员的呼吁下,其他的国际单项联合会如国际泳联迟早会接受体育仲裁院反兴奋剂处对兴奋剂案件听证和处罚决定的统一集中管辖。截至2020年6月,体育仲裁院反兴奋剂处一共有40多名仲裁员(完全独立于体育仲裁院上诉处的仲裁员),来自20多个国家(中国籍3名),审理一般由双方当事人协商指定的一名独任仲裁员(无法协商时由反兴奋剂处的主席指定)负责并作出处罚决定,运动员可以申请向社会公开听证,当事人不服裁决还可以上诉到体育仲裁院上诉处,申请二审仲裁;经当事人双方同意,也可以合并一审听证和二审的仲裁程序,由3名仲裁员组成合议仲裁庭负责审理,裁决结果是终局的,不得上诉。为使国内体育界与法律界了解熟悉国际体育仲裁院反兴奋剂处听证和仲裁程序这一新机制,译者翻译了其听证仲裁规则,①供大家参考。

气相色谱-质谱联用快速筛查尿样中麻醉剂类药物

为了快速检测尿样中的麻醉剂类药物(可待因,双氢可待因,四氢大麻酚酸,苯甲酰爱康宁,6-乙酰吗啡,吗啡,羟考酮),建立了气相色谱-质谱联用检测方法。尿样经葡萄糖醛酸甙酶酶解后,采取HLB Oasis反相固相萃取柱纯化,氮气吹干后衍生化,采用HP-5MS柱(25m×0.2mm×0.33μm)色谱分离,程序升温,质谱检测,SIM方式采集。该方法的检测限为5mg/L,在添加高、中、低3种浓度的相对回收率分布在75%～123%,满足常规检测要求,样品前处理简单、快速、结果可靠。

液相色谱-电喷雾电离质谱法检测尿液中的3种合成类固醇药物

研究建立了合成类固醇药物群勃龙、四氢孕三烯炔酮和孕三烯酮的液相色谱-电喷雾质谱的检测方法。尿样经过β-葡萄糖醛酸酶酶解和叔丁基甲醚提取后,采用Zorbax SB-C18分析柱(150mm×2.1mm,5μm),在流动相为pH3.5的甲酸铵缓冲液-乙腈的条件下进行梯度洗脱,在正离子模式下检测。考察了不同的质谱条件对这类化合物检测结果的影响。建立了人尿液中合成类固醇药物的液相色谱-电喷雾电离质谱的初筛和确证方法。

液相色谱-串联质谱法快速筛查马饲料中39种违禁药物

建立了同时快速筛查和确证马饲料中39种赛马违禁药物(包含抗心率失常类药物、抗惊厥类药物、止痉挛类药物、抗疟疾类药物、刺激剂、麻醉剂及大麻酚类药物)的液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)分析方法。样品粉碎后分别经1 mmol/L HClO4溶液和酸化乙腈溶液提取,并通过混合型固相萃取柱净化。采用Agilent Zorbax SB(10.0 cm×2.1 mm i.d.,3.5μm)色谱柱,以0.4%甲酸水溶液和0.4%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,正离子多反应监测(MRM)模式下检测。方法对空白饲料3个加标水平下的平均回收率为58%～116%,相对标准偏差为1.6%～20.4%,各类药物线性良好(r2>0.99)。方法检出限(S/N≥3)和定量下限(S/N≥10)分别为0.2～25.0μg/kg和1.0～40.0μg/kg,其中超过67%药物的检出限在2.5μg/kg以下。实验结果表明,该方法分析时间短,灵敏度、精密度良好,适用于马饲料中上述几类药物的快速筛查和测定。

气相色谱-质谱联用检测保健品中的9种睾酮酯类

采用气相色谱-质谱联用法同时检测保健品中的9种睾酮酯类(睾酮Testosterone(T),醋酸睾酮T acetate,丙酸睾酮T propionate,异己酸睾酮T isocaproate,庚酸睾酮T enantate,环戊丙酸睾酮T cypionate,葵酸睾酮T decanoate,苯丙酸睾酮T phenpropionate,十一酸睾酮T undecylate)。采用叔丁基甲醚提取,针对保健品剂型的不同分别采取C-18反相固相萃取柱和硅胶正相固相萃取柱分离纯化,甲基睾酮作为内标,采用HP-1MS柱(17m×0.2 mm i.d.×0.11mm)色谱分离,程序升温,质谱检测。该方法的检测限和回收率均满足保健品的日常检测要求,前处理简单、快速、可靠。

保健食品中降糖药物的LCMS检测

目的:探讨LCMS本实验方法对待测样品的检测效果。方法:直接用流动相溶解样品后即可进样,无需化学提取。分析仪器为高效液相色谱-单四极杆质谱检测器,使用编辑好的MACRO数据分析软件,可以迅速得到胶囊和片剂类保健食品中二甲双胍等8种降糖药物的检测结果。结果:测定较满意。结论:此法检测灵敏度较高,检测结果可靠,是一种实用的保健食品中降糖药物的检测方法。

异体同型输血检测方法研究

目的:探讨异体同型输血的科学检测方法。方法:将若干份单一血液按比例实施体外两两混合,分别采用流式细胞的免疫血液学检测法及PCR-STR分析技术检测样本是否为混合血。结果:流式细胞仪检测法检测205份有效混合血样,检测出为混合血样的198份,其中2例为真正的输血病人,疑似混合血样品7份,无假阴性报告;相对于洛桑的8种目标检测抗原,采用21种目标检测抗原提高了确诊率。对291份有效混合血样采用PCR-STR分析技术进行检测,结果确定为混合血样的240份,其中1份为真正的输血病人,疑似混合血样39份,其中1份为输血病人,未检测出混合血迹象的12份;当血样混合比例高于1:10时,确诊率才明显下降。结论:在现阶段,流式细胞仪检测法和PCR-STR分析法是可行的异体同型输血检测方法。

液相色谱-串联质谱法测定马饲料中的抗凝血类药物

建立了马复合饲料中双香豆素、香豆素、醋硝香豆素、苄丙酮香豆素、苯茚二酮5种抗凝血类药物的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时快速筛查和定量测定方法,并对该类化合物在电喷雾电离条件下的主要碎裂途径进行了探讨。方法以甲醇和0.02mol/L NaOH溶液作为提取溶剂,饲料样品经提取后利用混合型阳离子交换固相萃取进行净化,采用正负切换多反应监测(MRM)模式对试样中5种香豆素类及茚二酮类抗凝血剂进行定性与定量分析。苯茚二酮的检出限为15ng/g,香豆素和醋硝香豆素的检出限为4ng/g,华法林和双香豆素的检出限为10ng/g。5种药物的定量限在10～40ng/g之间,日内日间精密度分别不高于8.63%和10.20%。

气相色谱-质谱检测人尿液中非那雄胺代谢物

采用气相色谱-质谱法检测人尿中非那雄胺三个代谢物。叔丁基甲醚提取,甲基睾酮作为内标,对尿样的游离部分和酶解后部分分别提取,采用HP-1MS柱(17m×0.2 mm i.d.×0.11mm),程序升温,质谱检测。发现一种羧酸代谢物(M1)和两种羟基代谢物(M2和M3),采用标准品对照确证了M1的结构;另外根据质谱特征阐明M2和M3的结构,总结三种代谢物的质谱裂解特点。初步分析三种代谢物的排泄规律,M1为主要代谢物,M2和M3为次要代谢物,M1的可检出时期最长,M3最短。该方法简单,快速,可靠,适合进行尿样的常规检测。

冬奥之际话运动医学——访中华医学会运动医疗分会副主任委员、北京大学第三医院副院长王健全教授

运动即良医,今天你动了吗?运动已成为一种时尚,一种需求。随着人口老龄化和全民健身的推广,获益于运动医学的群体变得越来越广。但有运动就很可能伴有运动损伤,这部分人群将会在未来的几年内剧增,而运动医学康复将肩负重担。2022年北京冬奥会胜利召开之际,中华医学会《健康世界》邀请中华医学会运动医疗分会副主任委员、北京大学第三医院副院长王健全教授,介绍运动医学领域的现况、进展及北京大学第三医院运动医学研究所近期主要工作,旨在为大众带来权威、前沿的运动医学知识。