兴奋剂检测中吗啡和可待因的LC-MS/MS定量方法研究

目的：建立WADA禁用清单中阈值物质吗啡及相关物质可待因的HPLC-MS/MS定量方法并进行方法验证。方法：尿样加内标后,加入磷酸盐缓冲液（0.1 mol/L Na2HPO4和0.1 mol/L Na H2PO4水溶液p H=6.8）及β-Glucuranidase水解过夜,加入固体缓冲剂（Na HCO3/K2CO3=3/2,w/w,p H=9.5）和提取液（乙醚/异丙醇=9/1,v/v）萃取,有机相于氮气流下吹干,用初始流动相定容后进样于LC/MS/MS。使用耐受高p H值的Waters XBridgeTMC18色谱柱,以乙腈/氨水（p H≈10）作为流动相体系,使用乙腈的起始浓度为2%,最终浓度为98%,运行时间为10min的梯度洗脱条件,采用多反应离子监测正离子模式,以286→201（morphine）,300→171（codeine）,289→165（morphine-D3）为定量离子。结果 ：吗啡和可待因在尿中的定量限分别为0.05μg/m L和0.005μg/m L,线性范围分别为（r^2〉0.99）0.10-10μg/m L和0.05-10μg/m L,吗啡定量的日内精密度和日间精密度（CV）分别为2.64%和4.01%,可待因为2.22%和2.01%。吗啡和可待因在1.0μg/m L浓度时的方法回收率分别为98.47±2.73%和99.41±4.12%。定量检测误差均低于5%。结论：本方法使用一个步骤同时测定尿中禁用物质morphine的总量,并可同时定量检测尿样中的codeine,数据处理简单;简化了前处理操作步骤,定量结果的精密度得到了提高;采用Bridge ^TM C18色谱柱和高p H值流动相,改善了morphine在普通C18柱上不保留、仪器响应和保留时间重现性较差、峰形拖尾较为严重的问题。方法重现性好,测量结果准确可靠,满足WADA技术文件的要求,应用于本实验室常规检测和WADA的外部质量评估计划,效果良好。